ヒト臍帯血由来血管内皮コロニー形成細胞の表現型および機能解析
Summary
内皮コロニー形成細胞（ECFCs）組み込み表示されていること、堅牢なクローン増殖能と血管内皮細胞を循環している<emin vivoでの></em>船が能力を形成する。 CBから派生した副産物内皮細胞の表現型および機能解析を識別し、分離することが重要です。<em善意>善意</em損傷した組織を修復するの潜在的な臨床応用のために> ECFCs。
Abstract
血管新生、脈管形成、および動脈形成を介して新しい血管の形成の長年のビューは、最近1日されています。内皮前駆細胞（EPC）の循環の存在が最初に麻原らが成人ヒト末梢血で同定された1997年2血管の再生と修理のための新しい仮説と戦略の注入をもたらすインチEPCは血管形成または血管リモデリングのサイトへのホームという血液の循環まれではあるが、通常のコンポーネントであり、主にセル3派生した既存の血管壁のパラクリン刺激を介して出生後の脈管形成、血管新生、または動脈形成のいずれかを容易にします。 EPCを識別するために、特定のマーカーが同定されず、フィールドの現時点での状態は、血管新生、造血幹細胞や前駆細胞を含め、その多くの細胞タイプを理解することであり、新生細胞、Tie2の+単球、骨髄前駆セルを循環されていますlsは、腫瘍関連マクロファージ、M2活性化マクロファージは、前臨床動物モデル系の様々な、多くの病気の状態4、5、人間の被験者の血管新生のプロセスを刺激するに参加しています。内皮コロニー形成細胞（ECFCs）堅牢なクローン増殖能、播種時に能力を形成する第二級および第三級コロニー、および免疫不全マウスへの移植時に6月8日 in vivoで血管内に本質的な形成する能力によって特徴付けまれな循環可能な内皮細胞である。 ECFCsが正常健康成人被験者、健康な新生児の臍帯血（CB）、および多数の人間の動脈および静脈の血管6-9の血管壁の末梢血から単離されているが、CBはECFCs 7の最高周波数を有していることを表示最も堅牢なクローン増殖能および in vivo 8、10-13 のフォーム耐久性と機能的な血管を。 whileの導出成人の末梢血からECFCここでは、我々が導出するための方法論を記述し、14、15を提示されており、クローニング、拡張、およびin vitroで同様にヒト臍帯CBからECFCs の in vivo特性のように 。
Protocol
試薬およびソリューション EMG-2メディア（ロンザ、カタログ番号CC-3162 EBM-2培地とEGM-2 SingleQuotキットサプリメント＆成長因子を含む） 全体SingleQuotキットサプリメント＆成長因子（ロンザ、カタログ番号CC-4176）、10％（v / v）のウシ胎児血清（FBS）を添加したEBM-2（ロンザ、カタログ番号CC-3156）と1％（v / v）のペニシリン（10,000 U / ml）を/ストレプトマイ?…
Discussion
推定される内皮前駆細胞の表現型および機能解析は、クローンと連続して再メッキ文化の中で可能である善意の ECFCsを識別し、in vivoでの耐久性と機能的な植込み型血管を生じさせることが重要です。ヒト臍帯血はECFCsと老化や病気の10のこれらの循環細胞の減少の濃度で濃縮されています。最近の研究では、ECFCは、血管損傷、心筋梗塞、網膜症17から19までの状?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
博士YoderはEndGenitor Technologies社とRimedion Technologies社の取締役会のメンバーへのコンサルタントです。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
| Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
| Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
| TrypLE express | Gibco | 12605 |
| Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
| FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
| hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
| hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
| hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
| hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
| hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
| hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
| Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
| Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
| Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
| Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
| 0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
| Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
| Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
| IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
| Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
| Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |
References
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Phenotypic CharacterizationFunctional CharacterizationEndothelial Colony Forming CellsHuman Umbilical Cord BloodAngiogenesisVasculogenesisArteriogenesisCirculating Endothelial Progenitor CellsVascular RegenerationVascular RepairParacrine StimulationEPC MarkerProangiogenic Hematopoietic Stem CellsCirculating Angiogenic CellsTie2+ MonocytesMyeloid Progenitor CellsTumor Associated MacrophagesM2 Activated Macrophages
Cite This Article
Prasain, N., Meador, J. L., Yoder, M. C. Phenotypic and Functional Characterization of Endothelial Colony Forming Cells Derived from Human Umbilical Cord Blood. J. Vis. Exp. (62), e3872, doi:10.3791/3872 (2012).