내피 콜로니 형성 세포의 Phenotypic 및 기능성 특성은 인간 탯줄의 혈액에서 유래
Summary
내피 콜로니 형성 세포 (ECFCs) 본질을 표시하는 강력한 clonal proliferative 잠재력과 내피 세포를 순환하고 있습니다<em> 생체내에서</em> 함선 능력을 형성. CB에서 파생된 가지 내피 세포의 Phenotypic 및 기능적 특성 식별하고 격리하는 데 중요<em거짓> 어딘가에서</em> 손상된 조직을 복구에서 잠재적인 임상 응용을위한 ECFCs.
Abstract
angiogenesis, vasculogenesis 및 arteriogenesis 통해 새로운 혈관 형성의 오랜 전망은 최근 1을 검토하고있다. 내피 전구 세포 (EPCs)를 순환의 존재가 처음 Asahara 외 의해 성인이 인간의 말초 혈액에서 발견되었다. 1,997 2가 혈관 재생 및 수리에 대한 새로운 가설과 전략의 주입을 가져 인치 EPCs은 혈액 순환의 드물지만, 일반적인 구성 요소입니다 그 혈관 형성이나 혈관 리모델링의 사이트에 대한 가정, 그리고 세포 3 파생 기존 선박 벽 paracrine 자극을 통해 주로 중 출생 후의 vasculogenesis, angiogenesis, 또는 arteriogenesis을 용이하게합니다. EPC를 식별하기위한 특별한 표지가 식별하지 않으며, 필드의 현재 상태는 proangiogenic 조혈 줄기 및 전구 세포를 포함한 그 많은 세포 유형을 이해하고, angiogenic 세포, Tie2 + monocytes, 골수양 전구 cel을 순환되었습니다혹시, 종양 관련 macrophages, 그리고 M2 활성화 macrophages는 잠복기 동물 모델 시스템의 다양한 수많은 질병 상태 4, 5의 인간 과목 angiogenic 과정을 자극에 참여합니다. 내피 콜로니 형성 세포 (ECFCs) 강력한 clonal proliferative 가능성 replating시 능력을 형성 보조와 차 식민지, 그리고 immunodeficient 생쥐 6-8로 이식시 생체내 혈관 형성에서 본질적인 능력을 특징으로 희귀 순환 가능한 내피 세포 수 있습니다. ECFCs이 성공적으로 건강한 성인 과목, 건강한 신생아 유아의 탯줄 혈액 (CB), 그리고 수많은 인간의 동맥과 정맥 혈관 6-9의 혈관 벽의 말초 혈액으로부터 격리되어 있지만, CB는 ECFCs 7의 높은 주파수를 보유하고 그 표시 가장 강력한 clonal proliferative 잠재력과 생체내 8, 10-13의 형태로 내구성과 기능성 혈관을. 동안의 유도성인 말초 혈액에서 ECFC 여기서 우리가 파생을위한 방법론을 설명하는, 14, 15를 발표되었으며, 복제, 확장, 그리고 체외에서뿐만 아니라 인간의 탯줄 CB에서 ECFCs의 생체내 특성에 있습니다.
Protocol
Discussion
putative 내피 전구 세포의 Phenotypic 및 기능적 특성은 clonally하고 순차적으로 다시 도금 문화에 능력이있다 타고난 ECFCs를 파악하고 생체내의 내구성과 기능성 implantable 혈관을 야기할 것이 중요합니다. 인간의 탯줄 혈액은 ECFCs 및 노화 또는 질병 10 이러한 순환 세포 감소의 농도로 풍부합니다. 최근 연구 ECFC은 혈관 상해, 심근 경색, 또는 망막 병증 17-19의 상황에서 혈?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
박사 Yoder는 EndGenitor 기술 주식 회사에 컨설턴트와 Rimedion 테크놀로지 주식 회사의 이사회의 구성원입니다
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
| Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
| Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
| TrypLE express | Gibco | 12605 |
| Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
| FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
| hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
| hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
| hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
| hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
| hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
| hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
| Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
| Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
| Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
| Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
| 0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
| Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
| Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
| IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
| Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
| Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |
References
- Carmeliet, P., Jain, R. K. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis. Nature. 473, 298-307 (2011).
- Asahara, T. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275, 964-967 (1997).
- Urbich, C., Dimmeler, S. Endothelial progenitor cells: characterization and role in vascular biology. Circ. Res. 95, 343-353 (2004).
- Critser, P. J., Voytik-Harbin, S. L., Yoder, M. C. Isolating and defining cells to engineer human blood vessels. Cell. Prolif. 44, 15-21 (2011).
- Matthias, M., David, N., Josef, N. From bench to bedside: what physicians need to know about endothelial progenitor cells. Am. J. Med. 124, 489-4897 (2011).
- Ingram, D. A. Vessel wall-derived endothelial cells rapidly proliferate because they contain a complete hierarchy of endothelial progenitor cells. Blood. 105, 2783-276 (2005).
- Ingram, D. A. Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood. Blood. 104, 2752-2760 (2004).
- Yoder, M. C. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals. Blood. 109, 1801-1809 (2007).
- Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs. J. Vis. Exp. (32), e1525 (2009).
- Au, P. Differential in vivo potential of endothelial progenitor cells from human umbilical cord blood and adult peripheral blood to form functional long-lasting vessels. Blood. 111, 1302-135 (2008).
- Critser, P. J., Kreger, S. T., Voytik-Harbin, S. L., Yoder, M. C. Collagen matrix physical properties modulate endothelial colony forming cell-derived vessels in vivo. Microvasc. Res. 80, 23-30 (2010).
- Melero-Martin, J. M. Engineering robust and functional vascular networks in vivo with human adult and cord blood-derived progenitor cells. Circ. Res. 103, 194-202 (2008).
- Melero-Martin, J. M. In vivo vasculogenic potential of human blood-derived endothelial progenitor cells. Blood. 109, 4761-4768 (2007).
- Hofmann, N. A., Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells. J. Vis. Exp. (32), e1524 (2009).
- Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. J. Clin. Invest. 105, 71-77 (2000).
- Witting, S. R. Efficient Large Volume Lentiviral Vector Production Using Flow Electroporation. Hum. Gene. Ther. , (2011).
- Yoon, C. H. Synergistic neovascularization by mixed transplantation of early endothelial progenitor cells and late outgrowth endothelial cells: the role of angiogenic cytokines and matrix metalloproteinases. Circulation. , 112-1618 (2005).
- Dubois, C. Differential effects of progenitor cell populations on left ventricular remodeling and myocardial neovascularization after myocardial infarction. J. Am. Coll. Cardiol. 55, 2232-2243 (2010).
- Medina, R. J., O’Neill, C. L., Humphreys, M. W., Gardiner, T. A., Stitt, A. W. Outgrowth endothelial cells: characterization and their potential for reversing ischemic retinopathy. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 51, 5906-5913 (2010).
