Анализ легких созревание дендритных клеток и миграции в течение аллергического воспаления дыхательных путей
Summary
Мы описываем стратегии для контроля созревания и миграции легких дендритные клетки в ответ на овальбумина в условиях овальбумина индуцированного аллергического воспаления дыхательных путей. Эта стратегия может быть изменена для оценки миграции легких дендритных клеток в условиях заражения.
Abstract
Дендритные клетки (ДК) являются ключевыми игроками участвуют в инициации иммунного ответа, активируя антиген-специфических Т-клеток. ДК присутствуют в периферических тканях, в установившемся режиме, однако в связи с антигенной стимуляции, ДК занимает антиген и быстро перейти на дренаж лимфатических узлов, где они инициируют Т-клеточного ответа против антигенов 1,2. Кроме того, контроллеры домена также играют ключевую роль в инициации аутоиммунных и аллергических иммунных реакций 3.
ДК играет важную роль как в начале иммунного ответа и индукции толерантности в условиях легкого среды 4. Легкие среды в значительной степени вызывающий иммунологическую толерантность, в связи с воздействием широкого спектра экологических антигенов 5. Тем не менее, у некоторых людей есть перерыв в терпимости, что приводит к индукции аллергии и астмы. В этом исследовании мы опишем стратегию, которая может быть использована для контроля дыхательных путей постоянного созревания и миграцион в ответ на антиген для сенсибилизации. Измерение постоянного тока дыхательных путей созревания и миграции позволяет для оценки кинетики иммунного ответа в течение аллергического воспаления дыхательных путей, а также помогает в понимании масштабов последующего иммунного ответа, а также основные механизмы.
Наша стратегия основана на использовании в качестве овальбумина сенсибилизирующего агента. Ovalbumin вызванного аллергической астмы является широко используемой модели, чтобы воспроизвести дыхательных путях эозинофилов, воспаления легких и повышенный уровень IgE, найденные во время астмы 6,7. После сенсибилизации мышей оспорено интраназального доставки FITC помечены овальбумина, который позволяет для конкретных маркировки дыхательных путей домена который поглощение овальбумина. Далее, используя несколько DC специфических маркеров, мы можем оценить созревания этих контроллеров домена, а также может оценить их миграции в дренаж лимфатических узлов, используя проточной цитометрии.
Protocol
Discussion
Метод, представленные здесь предлагается проточной цитометрии подход, основанный на анализе легочной РС, основанные на поставку OVA-FITC для отвода дыхательных путей. Это позволяет выборочный мониторинг легких домена, которые занимают OVA-FITC и, следовательно, постоянного населения, которы…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа финансировалась CIHR и CF грантов Канады д-р Джим Ху и студенческие кандидат награжден Rahul Kushwah на CF Канаде.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
| Alum | Thermo Scientific | 77161 |
| OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
| Collagenase D | Roche | 11088858001 |
| Antibodies | e-Bioscience |
References
- Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
- Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
- Lambrecht, B. N., Hammad, H. Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma. Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).
- Hammad, H., Lambrecht, B. N. Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma. Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).
- Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. Tolerizing allergic responses in the lung. Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).
- Herz, U. The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma. Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).
- Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses. Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).
- Nakae, S. TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).
- Guth, A. M. Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).
- Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery. J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).
- Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells. J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).
