ניתוח של התבגרות ריאתי Cell Migration הדנדריטים ובמהלך דלקת אלרגית Airway
Summary
אנו מתארים אסטרטגיה לפקח התבגרות והגירה של תאים דנדריטים ריאה בתגובה ovalbumin בסביבה של דלקת דרכי הנשימה הנגרמת ovalbumin אלרגית. אסטרטגיה זו ניתן לשנות על מנת להעריך ההגירה של תאים דנדריטים ריאתי ההגדרות של זיהום.
Abstract
תאים דנדריטים (DCS) הם השחקנים המרכזיים המעורבים בייזום של תגובה חיסונית אדפטיבית ידי הפעלת אנטיגן ספציפי בתאי T. DCS נמצאים ברקמות הפריפריה במצב יציב, אולם בעקבות גירוי אנטיגן, DCS לקחת את האנטיגן במהירות נודדים אל קשרי הלימפה שם הם מרוקנים ליזום בתגובה תא T נגד 1,2 אנטיגן. בנוסף, DCS גם לשחק תפקיד מרכזי בייזום תגובה חיסונית אוטואימונית, כמו גם אלרגי 3.
DCS לשחק תפקיד חיוני הן ייזום של התגובה החיסונית אינדוקציה של סובלנות על רקע הסביבה ריאות 4. סביבה בריאה היא tolerogenic במידה רבה, בשל החשיפה מגוון רחב של אנטיגנים סביבתיים 5. עם זאת, אצל אנשים מסוימים יש הפסקה סובלנות, אשר מוביל אינדוקציה של אלרגיה ואסטמה. במחקר זה, אנו מתארים אסטרטגיה, אשר ניתן להשתמש בהם כדי לפקח על דרכי הנשימה התבגרות הבירה מיגהמנה בתגובה לאנטיגן המשמש רגישות. מדידה של התבגרות DC דרכי הנשימה והגירה מאפשר הערכה של קינטיקה של התגובה החיסונית בזמן דלקת דרכי הנשימה אלרגית וגם מסייע בהבנת סדר הגודל של התגובה החיסונית לאחר מכן יחד עם המנגנונים.
האסטרטגיה שלנו מבוססת על שימוש ovalbumin כסוכן רגישות. Ovalbumin-Induced אסתמה אלרגית היא מודל בשימוש נרחב להתרבות eosinophilia דרכי הנשימה, דלקת ריאות ו-IgE רמות שנמצאו במהלך אסטמה 6,7. לאחר רגישות, עכברים מאותגרים על ידי משלוח של אפי ovalbumin FITC שכותרתו, אשר מאפשר תיוג ספציפית של דרכי הנשימה אשר DCS ovalbumin ספיגת. לאחר מכן, באמצעות מספר סמנים הבירה מסוימים, אנחנו יכולים להעריך את ההבשלה של DCS אלה ניתן גם להעריך את הנדידה אל קשרי הלימפה וניקוז על ידי העסקת cytometry הזרימה.
Protocol
Discussion
השיטה המוצגת כאן מציעה cytometry זרימת הגישה מבוססת על ניתוח DCS ריאתי, המבוססים על משלוח של OVA-FITC לאתגר דרכי הנשימה. זה מאפשר ניטור סלקטיבי של DCS ריאתי, אשר תופסים OVA-FITC ולכן האוכלוסיות DC, אשר נמצאות תחת פיקוח הם למעשה אלה המשתתפים בתגובה החיסונית דרכי הנשימה במהלך OVA דלקת דר?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו מומנה על ידי מענקים CIHR ו CF קנדה ד"ר ג'ים הו על ידי studentship PhD הוענק רהול Kushwah ידי CF קנדה.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
| Alum | Thermo Scientific | 77161 |
| OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
| Collagenase D | Roche | 11088858001 |
| Antibodies | e-Bioscience |
References
- Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
- Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
- Lambrecht, B. N., Hammad, H. Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma. Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).
- Hammad, H., Lambrecht, B. N. Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma. Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).
- Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. Tolerizing allergic responses in the lung. Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).
- Herz, U. The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma. Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).
- Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses. Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).
- Nakae, S. TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).
- Guth, A. M. Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).
- Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery. J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).
- Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells. J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).
