Análise da maturação das células dendríticas e migração pulmonar durante a inflamação alérgica das vias aéreas
Summary
Nós descrevemos uma estratégia para monitorar a maturação e migração de células dendríticas pulmonares em resposta à ovalbumina na configuração de ovalbumina inflamação das vias aéreas induzida alérgica. Esta estratégia pode ser modificado para avaliar a migração de células dendríticas pulmonares nas configurações de infecção.
Abstract
As células dendríticas (DCs) são os principais agentes envolvidos na iniciação da resposta imune adaptativa por ativação de células T antígeno-específicas. DCs estão presentes nos tecidos periféricos em estado estacionário, no entanto, em resposta à estimulação de antigénio, DCs assumir o antigénio e rapidamente migram para os nódulos linfáticos drenantes onde eles iniciam resposta de células T contra o antigénio 1,2. Além disso, DCs também desempenham um papel-chave na iniciação auto-imune, bem como alérgica resposta imunitária 3.
DCs desempenham um papel essencial em ambos iniciação da resposta imune e indução de tolerância na configuração do ambiente de pulmão 4. Ambiente de pulmão é em grande parte tolerogénico, devido à exposição a vasta gama de antigénios ambientais 5. No entanto, em alguns indivíduos, há um intervalo de tolerância, o que leva a indução de alergia e asma. Neste estudo, descrevemos uma estratégia, o que pode ser utilizado para monitorizar das vias aéreas maturação DC e MIGração em resposta ao antigénio utilizado para a sensibilização. A medição da via aérea maturação DC e migração permite a avaliação da cinética da resposta imune durante inflamação das vias aéreas alérgica e também auxilia na compreensão da magnitude da resposta imune subsequente, juntamente com os mecanismos subjacentes.
A nossa estratégia é baseada no uso de ovalbumina como um agente sensibilizante. Ovalbumina induzida asma alérgica é um modelo largamente utilizado para reproduzir a eosinofilia das vias aéreas, inflamação pulmonar e níveis elevados de IgE encontrados durante a asma 6,7. Após a sensibilização, os ratos são desafiados por administração intranasal de FITC ovalbumina rotulado, que permite a marcação específica de DCs das vias aéreas que ovalbumina absorção. Em seguida, usando vários marcadores específicos DC, podemos avaliar a maturação desses DCs e também pode avaliar a sua migração para os linfonodos de drenagem através do emprego de citometria de fluxo.
Protocol
Discussion
O método aqui apresentado oferece uma abordagem baseada em citometria de fluxo para análise de DCs pulmonares, com base na entrega de OVA-FITC para o desafio da via aérea. Isto permite a monitorização selectiva de DCs pulmonares, que ocupam OVA-FITC e, portanto, as populações de CC, que são acompanhados são efectivamente as que participam na resposta das vias aéreas imune durante o curso de OVA induzida por inflamação das vias aéreas alérgica. Em ratinhos de controlo, na ausência de inflamação das vias …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por doações CIHR e CF Canadá ao Dr. Jim Hu e por uma bolsa de estudo de doutorado concedida para Rahul Kushwah pela CF Canadá.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
| Alum | Thermo Scientific | 77161 |
| OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
| Collagenase D | Roche | 11088858001 |
| Antibodies | e-Bioscience |
References
- Kushwah, R., Hu, J. Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells. Cell Biosci. 20, (2011).
- Kushwah, R., Hu, J. Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system. Immunology. 133, 409-419 (2011).
- Lambrecht, B. N., Hammad, H. Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma. Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).
- Hammad, H., Lambrecht, B. N. Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma. Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).
- Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. Tolerizing allergic responses in the lung. Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).
- Herz, U. The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma. Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).
- Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses. Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).
- Nakae, S. TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice. J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).
- Guth, A. M. Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).
- Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery. J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).
- Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells. J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).
