हम ovalbumin प्रेरित एलर्जी airway सूजन की सेटिंग में ovalbumin के जवाब में परिपक्वता और फेफड़े के वृक्ष के समान कोशिकाओं के प्रवास पर नजर रखने के लिए एक रणनीति का वर्णन. इस रणनीति के संक्रमण की सेटिंग में फेफड़े के वृक्ष के समान कोशिकाओं के प्रवास का आकलन करने के लिए संशोधित किया जा सकता है.
Abstract
वृक्ष के समान कोशिकाओं (DCs) कुंजी प्रतिजन विशेष टी कोशिकाओं को सक्रिय करने के द्वारा अनुकूली प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की दीक्षा में शामिल खिलाड़ी हैं. DCs को स्थिर अवस्था में परिधि के ऊतकों में मौजूद हैं, लेकिन प्रतिजन उत्तेजना के जवाब में DCs प्रतिजन ले और तेजी से draining लिम्फ नोड्स जहां वे प्रतिजन 1,2 के खिलाफ टी सेल प्रतिक्रिया आरंभ करने के लिए ओर पलायन. इसके अतिरिक्त, DCs भी रूप में अच्छी तरह के रूप में autoimmune एलर्जी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 3 की शुरुआत में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं.
DCs और फेफड़ों 4 पर्यावरण की सेटिंग में सहिष्णुता के प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया प्रेरण के दोनों दीक्षा में एक आवश्यक भूमिका निभाते हैं. फेफड़ों के वातावरण काफी हद तक tolerogenic, पर्यावरण 5 प्रतिजनों के विशाल सरणी के लिए जोखिम के कारण है. हालांकि, कुछ व्यक्तियों में सहिष्णुता में एक को तोड़ने, जो एलर्जी और अस्थमा की प्रेरण की ओर जाता है. इस अध्ययन में, हम एक रणनीति है, जो airway के डीसी परिपक्वता और मिग की निगरानी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है का वर्णनसंवेदीकरण के लिए इस्तेमाल किया प्रतिजन के जवाब में राशन. airway के डीसी परिपक्वता और प्रवास की माप की airway एलर्जी सूजन प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के कैनेटीक्स के दौरान मूल्यांकन के लिए अनुमति देता है और भी अंतर्निहित तंत्र के साथ साथ बाद में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की भयावहता को समझने में मदद करता है.
हमारी रणनीति एक संवेदनशील एजेंट के रूप में ovalbumin के उपयोग पर आधारित है. Ovalbumin प्रेरित एलर्जी अस्थमा एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया airway के eosinophilia, फेफड़े सूजन और ऊंचा IgE 6,7 अस्थमा के दौरान पाया स्तर को पुन: पेश करने के लिए मॉडल है. संवेदीकरण के बाद, चूहों FITC लेबल ovalbumin intranasal वितरण, जो airway के जो तेज ovalbumin DCs के विशिष्ट लेबलिंग के लिए अनुमति देता है के द्वारा चुनौती दी है. अगला, कई डीसी विशिष्ट मार्कर का उपयोग करते हुए, हम इन DCs की परिपक्वता का आकलन और भी draining के लिम्फ नोड्स के लिए अपने प्रवास कर सकते हैं प्रवाह cytometry को रोजगार से आकलन कर सकते हैं.
Protocol
1. Ovalbumin साथ चूहे की संवेदीकरण ओवीए (ग्रेड वी, सिग्मा, एमओ) की एक समाधान तैयार बाँझ पीबीएस में 1 मिलीग्राम / एमएल की एकाग्रता में (समाधान -80 डिग्री सेल्सियस पर भंडारित किया जा सकता है). आदेश में ओवीए – फिट…
Discussion
यहां प्रस्तुत विधि फेफड़े DCs, ओवीए – FITC की airway के चुनौती के लिए वितरण पर आधारित विश्लेषण के लिए एक प्रवाह cytometry आधारित दृष्टिकोण प्रदान करता है. यह फेफड़े DCs, जो ले ओवीए FITC और इसलिए डीसी आबादी है, जो निगरानी कर रह?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम के CIHR और सीएफ़ डॉ. जिम हू कनाडा अनुदान और पीएचडी छात्रवृत्ति सीएफ़ कनाडा राहुल कुशवाह द्वारा सम्मानित किया गया द्वारा वित्त पोषित किया गया.
Kushwah, R., Hu, J. Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation. J. Vis. Exp. (65), e4014, doi:10.3791/4014 (2012).