إعداد عامل نمو الخلايا T من Splenocytes الجرذ
Summary
وصفنا إعداد الخلايا التائية عامل النمو المستخدمة في المختبر في التوسع من الفئران محددة مستضد خطوط تي اللمفاوية.
Abstract
صيانة خطوط محددة مستضد الخلايا التائية أو استنساخ في الثقافة يتطلب جولات من مستضد التي يسببها تفعيل مفصولة مراحل التوسع 1،2 الخلية. إضافة انترلوكين 2 إلى وسائل الإعلام الثقافة خلال مرحلة التوسع ضروري لمنع موت الخلايا وكافية للحفاظ على المدى القصير خطوط الخلايا T ولكن ثبت لزيادة الاستقطاب TH1 3. استبدال انترلوكين 2 بواسطة الخلايا التائية عامل النمو (TCGF) الذي يحتوي على مزيج من السيتوكينات هو أكثر فعالية من انترلوكين 2 في الحفاظ على المدى الطويل خطوط الخلايا التائية في المختبر 3. وعلاوة على ذلك ، يمكن بسهولة TCGF تكون مستعدة بكميات كبيرة في المختبر ، وأرخص بكثير من المؤتلف انترلوكين 2.
هنا ، وتبين لنا كيفية تحضير TCGF من الفئران supernatants ثقافة خلية طحالية. لهذا الإجراء ، ونحن الحصاد الطحال من الفئران لويس السذاجة الموت الرحيم لجمع الدم والغدة الصعترية. نحن نستعد وحيدة الخلية الحذف من الطحال ، lyze خلايا الدم الحمراء من صدمة ناضح ، والبذور splenocytes في المتوسط الثقافة. يتم تحفيز الخلايا مع كونكانافالين A ، وهو أن mitogen غير انتقائي تنشيط الخلايا اللمفية تي جميع الفئران ، الأمر الذي أدى إلى إنتاج السيتوكينات. يتم جمع supernantant الثقافة بعد 48 ساعة كونكانافالين andexcess منضما إلى mannoside الميثيل ألفا لمنعها من تفعيل خطوط الخلايا التائية التي ستضاف TCGF. وTCGF غير معقمة ، ثم تمت تصفيتها ، aliquoted ، وتخزينها في -20 درجة مئوية.
Protocol
Discussion
نحن نستعد TCGF من splenocytes الفئران لويس لأننا الموت ببطء بانتظام الفئران ساذج من هذه السلالة لحصاد المصل والتوتة لتحفيز خلايا الفئران خطوط لويس تي في المختبر. ويمكن استخدام هذا TCGF لتعزيز النمو والبقاء على قيد الحياة من خطوط الخلايا التائية من سلالات الفئران الأخرى. ويمكن أيضا أن تك?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS, 1x, sterile | Reagent | Gibco / Invitrogen | 14040-182 | |
| Penicillin / Streptomycin 100x | Reagent | Sigma | P0781 | Add 5 ml of 100x solution to 500 ml PBS to prepare PBS-PS |
| Cell strainer, 70 um diameter | Tool | Fisher | 08-771-2 | |
| Ammonium Chloride (NH4Cl) | Reagent | Sigma | A0171 | Prepare a 0.15 M solution in sterile distilled water, keep cold |
| RPMI 1640 | Reagent | Gibco / Invitrogen | 21870-092 | |
| Fetal Bovine Serum (FCS, FBS) | Reagent | Gibco / Invitrogen | 16140-071 | Heat-inactivated |
| Penicillin / Streptomycin / L-Glutamine | Reagent | Cambrex / Biowhittaker | 17-718R | PSG |
| RPMI vitamins, 100x | Reagent | Sigma | R7256 | |
| Sodium pyruvate, 100x | Reagent | Sigma | S8636 | |
| Non-essential amino acids, 100x | Reagent | Sigma | ||
| Beta-mercaptoethanol | Reagent | Sigma | M7522 | |
| alpha methyl mannoside | Reagent | Sigma | M6882 | |
| Concanavalin A | Reagent | Sigma | M6882 |
References
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 166, 936-944 (2001).
- Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).
- Mor, F., Cohen, I. R. Propagation of Lewis rat encephalitogenic T cell lines: T-cell-growth-factor is superior to recombinant IL-2. J. Neuroimmunol. 123, 76-82 (2002).
