Un basso Rat modello di mortalità per valutare ritardata vasospasmo cerebrale dopo emorragia subaracnoidea sperimentale

Summary

Emorragia subaracnoidea aneurismatica (SAH) è il sanguinamento che si verifica nello spazio subaracnoideo quando una rottura dell'aneurisma. Mentre la morbilità e la mortalità di questo evento è stato su un declino a causa di migliori approcci terapeutici, il rischio di vasospasmo dopo emorragia subaracnoidea continua ad essere la stessa che era diversi anni fa. L'importanza della creazione di un modello animale completo e riproducibile per identificare gli eventi scatenanti di vasospasmo cerebrale è stato al centro di ricerche sin dal primo utilizzo di ratti in un modello sperimentale di vasospasmo nel 1979 da Barry<em> Et al.</em> I primi lavori nei ratti ha dimostrato che una singola iniezione di sangue autologo nella cisterna magna portato a acuta (entro pochi minuti), ma non in ritardo vasospasmo cerebrale^{3, 6, 14}. Qui caratterizzare una bassa mortalità modello di ratto SAH che si traduce in riproducibili vasospasmo ritardato.

Abstract

Obiettivo: caratterizzare e stabilire un modello riproducibile che dimostra in ritardo vasospasmo cerebrale dopo emorragia subaracnoidea aneurismatica (SAH) nei ratti, al fine di individuare gli eventi scatenanti, i cambiamenti fisiopatologici e target potenziali per il trattamento.

Metodi: Ventotto maschi Sprague-Dawley (250-300 g) sono stati arbitrariamente assegnati ad uno dei due gruppi – SAH o controllo salino. Emorragia subaracnoidea ratto nel gruppo SAH (n = 15) è stata indotta mediante doppia iniezione di sangue autologo, 48 hr a parte, nella cisterna magna. Analogamente, soluzione salina normale (n = 13) è stato iniettato nella cisterna magna del gruppo di controllo salina. Ratti sono stati sacrificati al giorno cinque dopo l'iniezione e sangue secondo i cervelli sono stati conservati per l'analisi istologica. Il grado di vasospasmo è stata misurata utilizzando sezioni dell'arteria basilare, misurando l'area in sezione trasversale interna luminale utilizzando NIH Image-J software. Il significato eratestato con Tukey / Kramer 's l'analisi statistica.

Risultati: Dopo l'analisi delle sezioni istologiche, basilare superficie luminale dell'arteria sezione trasversale erano più piccole in SAH rispetto al gruppo salina, coerente con vasospasmo cerebrale nel primo gruppo. Nel gruppo SAH, zona interna dell'arteria basilare (0,056 micron ± 3) erano significativamente più piccole da vasospasmo cinque giorni dopo l'iniezione di sangue secondo (sette giorni dopo l'iniezione di sangue iniziale), rispetto al gruppo di controllo salina con area interna (0,069 ± 3, p = 0,004). Non ci sono stati casi di mortalità da vasospasmo cerebrale.

Conclusione: Il doppio ratto induce una lieve emorragia subaracnoidea, capaci di mantenersi, vasospasmo dell'arteria basilare che può essere utilizzato per studiare i meccanismi fisiopatologici di vasospasmo cerebrale in un modello animale di piccole dimensioni. Un tasso di mortalità basso e accettabile è un criterio significativo per essere soddisfatti per un ideale modello animale SAH in modo che i meccanismi di vasospasmo può essere elucidated ^{7, 8.} Ulteriori modifiche del modello può essere fatto per regolare la maggiore gravità del vasospasmo e gli esami neurologici.

Protocol

1. Chirurgia per Rat Oggetto SAH iniettato con 0,15 ml di sangue autologo arteriosa Il ratto è anestetizzato con 0,1 mg / kg di ketamina / TMA cocktail roditore e lasciata riposare per 5 min. Anestesia adeguata è confermato dalla riduzione di riflesso degli arti posteriori. L'utilizzo di un rasoio elettronico un collo al naso zona di capelli intorno al sub-occipitale è rasata. L'animale viene posto supino sul tavolo operatorio e la coda è deterso con Betadine per gara…

Representative Results

Entro i protocolli descritti sopra, ci sono diversi passaggi che riteniamo richiedono una migliore caratterizzazione del modello di quello che è stato descritto precedentemente in letteratura. Qui ci concentriamo sui passi che sono essenziali al fine di ottenere una bassa mortalità riproducibile cerebrale modello animale piccolo vasospasmo ed evitare potenziali problemi associati a questo modello se non effettuate correttamente. 1. Il sangue autologo Draw dal Arteria Tail: <p class="jove_…

Discussion

Primati, con una composizione più simile genetica e caratteristiche anatomiche per l'umano, più strettamente imitare gli eventi di ritardo vasospasmo cerebrale e possono più facilmente subire non invasiva per immagini (risonanza magnetica e angiografia) per monitorare i cambiamenti delle arterie, che roditori ^8. Tuttavia, i modelli di primati sono un costo proibitivo e associato con cura più complessa e le questioni etiche, di modelli animali di piccole dimensioni. Piccoli animali SAH modelli che sono…

Materials

Name of equipment / reagent	Company	Catalogue Number
Male SD rats (250-300 g)	Taconic	SD-M
26 G Catheters	Webster	8416683
25 G Needles	Buffalo	305122
1 cc Syringes	Central stores	54245
Ketamine/Xylazine cocktail	Animal Care (SUNY)*	–
Betadine	Central stores	51458
Sucrose	Sigma	S9378-1kg
Paraformaldehyde	Sigma	P6148-500G
Phosphate buffer solution	Fisher	BP-399-4
Surgical Table	Harvard	PY2 72-2590
OCT Compound (cryoprotection)	VWR	25608-930
Superfrost Slides	Fisher	12-550-15

* Synthesized at Department of Laboratory Animal Care, SUNY Upstate Medical University. Add 1 cc [100 mg/ml] of Xylazine to 10 ml [100 mg/ml] of Ketamine.