Um Modelo de Rato Baixa Mortalidade para Avaliar vasoespasmo cerebral adiada após hemorragia subaracnóide Experimental

Summary

Hemorragia subaracnóide aneurismática (HAS) é o sangramento que ocorre no espaço subaracnóide, quando uma ruptura de aneurisma. Enquanto a morbidade e mortalidade por este evento foi em um declínio devido a abordagens de tratamento melhores, o risco de vasoespasmo após hemorragia subaracnóide continua a ser o mesmo que era há alguns anos. A importância de estabelecer um modelo animal abrangente e reprodutível para identificar eventos de iniciação de vasoespasmo cerebral tem sido o foco de pesquisa desde o primeiro uso de ratos em um modelo experimental vasoespasmo em 1979 por Barry<em> Et al.</em> Os trabalhos iniciais em ratos demonstraram que uma única injecção de sangue autólogo para a cisterna magna levou a aguda (dentro de minutos), mas não vasoespasmo cerebral atrasado^{3, 6, 14}. Aqui nós caracterizar uma baixa mortalidade ratos HAS que resulta em atraso vasoespasmo reprodutível.

Abstract

Objectivo: Para caracterizar e estabelecer um modelo reprodutível que demonstra atrasado vasoespasmo cerebral após hemorragia subaracnóide aneurismática (SAH) em ratos, de modo a identificar os eventos que iniciam, alterações fisiopatológicas e potenciais alvos para o tratamento.

Métodos: Vinte e oito ratos machos Sprague-Dawley (250-300 g) foram arbitrariamente atribuídos a um de dois grupos – HSA ou solução salina de controlo. Hemorragia subaracnóide rato no grupo HAS (n = 15) foi induzido por injecção dupla de sangue autólogo, 48 hr à parte, para a cisterna magna. Da mesma forma, uma solução salina normal (n = 13) foi injectado na cisterna magna do grupo de controlo de solução salina. Os ratos foram sacrificados no quinto dia após a injecção de segundo sangue e os cérebros foram conservadas para análise histológica. O grau de vasoespasmo foi medida utilizando-se secções da artéria basilar, medindo-se a área da secção transversal interna do lúmen utilizando NIH software Image J-. O significado eratestado utilizando Tukey / Kramer análise estatística.

Resultados: Após a análise de secções histológicas, artéria basilar área seccional transversal luminal foram menores no SAH do que no grupo de solução salina, de acordo com o vasoespasmo cerebral no primeiro grupo. No grupo HAS, basilar área da artéria interna (0,056 ± 3 uM) foram significativamente menores do vasoespasmo cinco dias após a injecção de sangue segundo (sete dias após a injecção inicial de sangue), em comparação com o grupo de controlo de solução salina com área interna (0,069 ± 3, p = 0,004). Não houve mortalidade de vasoespasmo cerebral.

Conclusão: O modelo do rato induz uma dupla HAS leve, sobrevivência, vasoespasmo da artéria basilar, que pode ser usado para estudar os mecanismos patofisiológicos de vasoespasmo cerebral num modelo de animal de pequeno porte. A baixa taxa de mortalidade e aceitável é um critério importante de ser satisfeita para um modelo ideal de animais SAH de modo que os mecanismos de vasoespasmo pode ser Elucidated ^{7, 8.} Outras modificações do modelo pode ser feita para ajustar a gravidade aumentada de vasoespasmo e as alterações neurológicas.

Protocol

1. Cirurgia de rato para Assunto HAS injetado com 0,15 ml de sangue autólogo Arterial O rato é anestesiado utilizando 0,1 mg / kg de Cetamina / Xilazina cocktail roedor e deixada em repouso durante 5 min. Anestesia adequada é confirmado pela redução no reflexo membro posterior. Usando um barbeador eletrônico um pescoço com nariz área de cabelo em torno da sub-região occipital é raspada. O animal é colocado em decúbito dorsal sobre a mesa de cirurgia e a cauda é esfre…

Representative Results

Dentro dos protocolos descritos acima, há vários passos que acreditamos que requerem uma melhor caracterização do modelo do que o que foi anteriormente descrito na literatura. Aqui vamos focalizar os passos que são essenciais para atingir um reprodutível baixa mortalidade cerebral vasoespasmo modelo animal pequeno e evitar as armadilhas potenciais associados com este modelo se não for feito corretamente. 1. Coleta de sangue autólogo da artéria da cauda: Col…

Discussion

Primatas, que tem uma composição mais semelhante genética e características anatómicas para o ser humano, imitar mais de perto os acontecimentos de vasoespasmo cerebral retardado e pode mais facilmente ser submetido a não-invasivo (RNM e angiografia) para monitorar as alterações arteriais, do que os roedores ^8. No entanto, os modelos de primatas são um custo proibitivo e associada aos cuidados mais complexos e questões éticas, que os modelos animais de pequeno porte. Modelos animais pequenos SAH qu…

Materials

Name of equipment / reagent	Company	Catalogue Number
Male SD rats (250-300 g)	Taconic	SD-M
26 G Catheters	Webster	8416683
25 G Needles	Buffalo	305122
1 cc Syringes	Central stores	54245
Ketamine/Xylazine cocktail	Animal Care (SUNY)*	–
Betadine	Central stores	51458
Sucrose	Sigma	S9378-1kg
Paraformaldehyde	Sigma	P6148-500G
Phosphate buffer solution	Fisher	BP-399-4
Surgical Table	Harvard	PY2 72-2590
OCT Compound (cryoprotection)	VWR	25608-930
Superfrost Slides	Fisher	12-550-15

* Synthesized at Department of Laboratory Animal Care, SUNY Upstate Medical University. Add 1 cc [100 mg/ml] of Xylazine to 10 ml [100 mg/ml] of Ketamine.