Una baja mortalidad modelo de rata para evaluar vasoespasmo cerebral retardado tras la hemorragia subaracnoidea experimental

Summary

Hemorragia subaracnoidea aneurismática (HSA) es la hemorragia que se produce en el espacio subaracnoideo cuando un aneurisma se rompe. Mientras que la morbilidad y la mortalidad por este evento ha estado en un declive debido a la mejora de los métodos de tratamiento, el riesgo de vasoespasmo después de la hemorragia subaracnoidea continúa siendo el mismo que era hace unos años. La importancia de establecer un modelo animal completo y reproducible para identificar sucesos iniciadores de vasoespasmo cerebral ha sido el foco de investigación desde el primer uso de ratas en un modelo experimental de vasoespasmo en 1979 por Barry<em> Et al.</em> El trabajo inicial en ratas demostraron que una única inyección de sangre autóloga en la cisterna magna llevó a aguda (en minutos), pero no con retraso vasoespasmo cerebral^{3, 6, 14}. Aquí caracterizar un modelo de rata de mortalidad baja SAH que da lugar a vasoespasmo retardado reproducible.

Abstract

Objetivo: Caracterizar y establecer un modelo reproducible que demuestre vasoespasmo cerebral retardada después de la hemorragia subaracnoidea por aneurisma (HSA) en ratas, con el fin de identificar los sucesos iniciadores, los cambios fisiopatológicos y objetivos potenciales para el tratamiento.

Métodos: Veintiocho ratas macho Sprague-Dawley (250 – 300 g) se asignaron arbitrariamente a uno de dos grupos – SAH o control de solución salina. Hemorragia subaracnoidea rata en el grupo HSA (n = 15) fue inducida por doble inyección de sangre autóloga, 48 hr aparte, en la cisterna magna. Del mismo modo, la solución salina normal (n = 13) se inyectaron en la cisterna magna del grupo de control de solución salina. Las ratas se sacrificaron en el día cinco después de la inyección de sangre segundos y los cerebros se conservan para el análisis histológico. El grado de vasoespasmo se midió utilizando secciones de la arteria basilar, midiendo el área en sección transversal interna luminal utilizando NIH Image J-software. La significación fueprueba utilizando Tukey / Kramer 's análisis estadístico.

Resultados: Tras el análisis de las secciones histológicas, área luminal de la arteria basilar de la sección transversal fueron más pequeños en la HSA que en el grupo de solución salina, de acuerdo con el vasoespasmo cerebral en el primer grupo. En el grupo de SAH, área basilar arteria interna (0,056 micras ± 3) fueron significativamente más pequeños de vasoespasmo cinco días después de la inyección de sangre segundos (siete días después de la inyección inicial de sangre), en comparación con el grupo control de solución salina con área interna (0,069 ± 3, p = 0,004). No hubo mortalidad de vasoespasmo cerebral.

Conclusión: El modelo de rata doble SAH induce una leve, vasoespasmo de supervivencia, arteria basilar que puede ser usado para estudiar los mecanismos fisiopatológicos de vasoespasmo cerebral en un modelo animal pequeño. Una baja tasa de mortalidad y aceptable es un criterio importante que se cumpla para un modelo animal ideal SAH para que los mecanismos de vasoespasmo puede ser ElucidATED ^{7, 8.} Otras modificaciones del modelo se puede hacer para ajustar por aumento de la severidad del vasoespasmo y exámenes neurológicos.

Protocol

1. Cirugía para Rat Asunto SAH inyectados con 0,15 ml de sangre autóloga Arterial La rata se anestesia con 0,1 mg / kg de cóctel roedor ketamina / xilazina y se dejó reposar durante 5 min. Anestesia adecuada es confirmado por la reducción de reflejo en la extremidad posterior. Usando una máquina de afeitar electrónico un cuello a la nariz área de pelo alrededor de la región sub-occipital se afeita. El animal se coloca en posición supina sobre la mesa de cirugía y la co…

Representative Results

Dentro de los protocolos descritos anteriormente, hay varios pasos que creemos que requieren una mejor caracterización del modelo de lo que se ha descrito previamente en la literatura. Aquí nos centramos en los pasos que son esenciales para lograr una baja mortalidad reproducible modelo vasoespasmo cerebral pequeño animal y evitar posibles dificultades asociadas con este modelo, si no se hace correctamente. 1. Extracción de sangre autóloga de la arteria de la cola: <p class="jove_conte…

Discussion

Primates, que tiene una composición genética similar y más características anatómicas de la humana, imitar más de cerca los acontecimientos del vasoespasmo cerebral retardado y es más fácil someterse no invasiva de imágenes (MRI y angiografía) para controlar los cambios arteriales, que los roedores ^8. Sin embargo, los modelos de primates son un costo prohibitivo y se asocia con una atención más compleja y los problemas éticos, que los modelos animales pequeños. Pequeños animales modelos de HSA …

Materials

Name of equipment / reagent	Company	Catalogue Number
Male SD rats (250-300 g)	Taconic	SD-M
26 G Catheters	Webster	8416683
25 G Needles	Buffalo	305122
1 cc Syringes	Central stores	54245
Ketamine/Xylazine cocktail	Animal Care (SUNY)*	–
Betadine	Central stores	51458
Sucrose	Sigma	S9378-1kg
Paraformaldehyde	Sigma	P6148-500G
Phosphate buffer solution	Fisher	BP-399-4
Surgical Table	Harvard	PY2 72-2590
OCT Compound (cryoprotection)	VWR	25608-930
Superfrost Slides	Fisher	12-550-15

* Synthesized at Department of Laboratory Animal Care, SUNY Upstate Medical University. Add 1 cc [100 mg/ml] of Xylazine to 10 ml [100 mg/ml] of Ketamine.