En Orthotopic Blære Tumor Model og bedømmelse av intravesikal Sarna Treatment
Summary
Etablering en orthotopic blære tumor modell for å vurdere antitumor effekter av intravesikalt levert Sarna og overvåking tumorvekst ved ultralyd og Bioluminescent bildebehandling.
Abstract
Vi presenterer en ny metode for behandling av blærekreft med intravesikalt levert liten aktiverende RNA (Sarna) i en orthotopic xenograft mus blære svulst modell. Musen modellen er etablert ved urethral kateterisering etter inhalert narkose. Kjemisk forbrenning blir så introdusert til blæren slimhinnene hjelp intravesikal sølvnitrat løsning å forstyrre blæren glycosaminoglycan laget og tillater celler å feste. Etter flere vask med sterilt vann, menneskelig blærekreft KU-7-luc2-GFP cellene er innpodet gjennom kateteret inn i blæren for å bo i 2 timer. Påfølgende vekst av blæretumorer bekreftes og overvåkes av in vivo blære ultralyd og Bioluminescent bildebehandling. Svulstene blir deretter behandlet intravesikalt med Sarna formulert i lipid nanopartikler (LNPs). Tumorvekst overvåkes med ultralyd og bioluminesens. Alle trinnene i denne fremgangsmåten er demonstrert i den medfølgende videoen.
Protocol
Discussion
Vi presenterer en protokoll for etablering av en mus orthotopic xenograft blære tumor modell etterfulgt av intravesikal behandling av svulster med LNP formulert Sarna som er rettet mot arrangøren av P21 CIP1/WAF1 (P21) for transcriptional aktivering. 2, 3 Den resulterende svulster kan være bekreftet og overvåkes med Bioluminescent bildebehandling og blære ultralyd. Orthotopic modeller kan være overlegen intraperitoneal, subkutane eller intravenøse modeller ved å gi et miljø av urin og urot…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denne forskningen er finansiert av AACR Henry Shepard blærekreft Research Grant (09-60-30-LI).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| KU-7-luc-GFP cells | Caliper | 128091 | |
| thymic nude mice ( nu/nu) | Simonsen Laboratories | 6-7 weeks old | Sim:(NCr) nu/nu fisol |
| Ultrasound unit | Visualsonics | Vevo 770 | RMV-704 probe |
| Bioluminescence unit | Caliper | IVIS Spectrum | |
| Exel safelet catheter | Fisher | 14-841-21 | 24G X ¾” |
| Silver nitrate | Sigma | S8157 | |
| Hamilton syringe | Hamilton company | 80301 | |
| LNP-saRNA | Alnylam Pharmaceuticals |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
- Semple, S. C. Rational design of cationic lipids for siRNA delivery. Nature. 28, 172-176 (2010).
- Li, L. C. Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103, 17337-17342 (2006).
- Chen, Z. Antitumor effect of dsRNA-induced p21(WAF1/CIP1) gene activation in human bladder cancer cells. Molecular cancer therapeutics. 7, 698-703 (2008).
- Chancellor, M. B. Preliminary results of myoblast injection into the urethra and bladder wall: a possible method for the treatment of stress urinary incontinence and impaired detrusor contractility. Neurourology and urodynamics. 19, 279-287 (2000).
- Hadaschik, B. A. A validated mouse model for orthotopic bladder cancer using transurethral tumour inoculation and bioluminescence imaging. BJU international. 100, 1377-1384 (2007).
- Fu, C., Apelo, C. A., Torres, B., Thai, K. H., Hsieh, M. H. Mouse Bladder Wall Injection. J. Vis. Exp. (53), e2523 (2011).
- Dobek, G. L., Godbey, W. T. An Orthotopic Model of Murine Bladder. Cancer. J. Vis. Exp. (48), 2535 (2011).
- Dinney, C. P. Isolation and characterization of metastatic variants from human transitional cell carcinoma passaged by orthotopic implantation in athymic nude mice. The Journal of urology. 154, 1532-1538 (1995).
