Etablering en orthotopic blære tumor modell for å vurdere antitumor effekter av intravesikalt levert Sarna og overvåking tumorvekst ved ultralyd og Bioluminescent bildebehandling.
Abstract
Vi presenterer en ny metode for behandling av blærekreft med intravesikalt levert liten aktiverende RNA (Sarna) i en orthotopic xenograft mus blære svulst modell. Musen modellen er etablert ved urethral kateterisering etter inhalert narkose. Kjemisk forbrenning blir så introdusert til blæren slimhinnene hjelp intravesikal sølvnitrat løsning å forstyrre blæren glycosaminoglycan laget og tillater celler å feste. Etter flere vask med sterilt vann, menneskelig blærekreft KU-7-luc2-GFP cellene er innpodet gjennom kateteret inn i blæren for å bo i 2 timer. Påfølgende vekst av blæretumorer bekreftes og overvåkes av in vivo blære ultralyd og Bioluminescent bildebehandling. Svulstene blir deretter behandlet intravesikalt med Sarna formulert i lipid nanopartikler (LNPs). Tumorvekst overvåkes med ultralyd og bioluminesens. Alle trinnene i denne fremgangsmåten er demonstrert i den medfølgende videoen.
Protocol
Prosedyrer som involverer dyr fag har blitt godkjent av det institusjonelle Animal Care og bruk Committee (IACUC) ved University of California, San Francisco. 1. Celleforberedelsen Den menneskelige blærekreft celle linje KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) dyrkes i RPMI-1640 media supplert med 10% fosterets bovint serum og 50 mikrogram / ml gentamicin. Kulturer er opprettholdt ved 37 ° C, 5% CO 2 med media endres hver to til tre dager. …
Discussion
Vi presenterer en protokoll for etablering av en mus orthotopic xenograft blære tumor modell etterfulgt av intravesikal behandling av svulster med LNP formulert Sarna som er rettet mot arrangøren av P21 CIP1/WAF1 (P21) for transcriptional aktivering. 2, 3 Den resulterende svulster kan være bekreftet og overvåkes med Bioluminescent bildebehandling og blære ultralyd. Orthotopic modeller kan være overlegen intraperitoneal, subkutane eller intravenøse modeller ved å gi et miljø av urin og urot…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denne forskningen er finansiert av AACR Henry Shepard blærekreft Research Grant (09-60-30-LI).
Kang, M. R., Yang, G., Charisse, K., Epstein-Barash, H., Manoharan, M., Li, L. An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment. J. Vis. Exp. (65), e4207, doi:10.3791/4207 (2012).