从小鼠心脏中分离主黑素细胞样细胞
Summary
在这个协议中，W E 发现了新的黑色素细胞样细胞群（也称为心源性黑色素细胞）的小鼠和人类中，有助于房性心律失常引发小鼠的心。
Abstract
我们确定了一个新的黑色素细胞样细胞群（也称为心源性黑色素细胞），在小鼠中导致房性心律失常触发小鼠和人类的心。调查心脏黑色素细胞的电特性和生物特性，我们开发了一种程序，从小鼠心脏，我们从这些设计以分离新生鼠心肌细胞衍生的隔离。为了获得适合于更广泛的膜片钳或生化研究健康心脏的黑素细胞，我们开发了一种精制方法分离和镀基于那些最初设计以隔离皮肤黑素细胞中黑素细胞的心脏。精致的过程证明了本次审查，并产生更大的健康黑色素细胞样细胞，可作为镀纯人口或心肌细胞的数量。
Introduction
我们最近发现在表达黑色素合成酶和形态上类似皮肤的黑素细胞的小鼠和人类的心脏了一种新的细胞群。我们称这些细胞的黑素心“，发现他们是存在于解剖位置，从该房性心律失常的触发往往起源于人类。我们还发现心脏黑色素细胞在小鼠生殖细胞缺失的DCT导致房性心律失常。心黑素细胞稀疏地分布在整个小鼠心房，他们包括所有心房细胞少于0.1％。调查心脏黑色素细胞的电特性和生物特性，我们开发了一种方法，从使用Cre重组酶诱导的黑素细胞特异性标记物的小鼠心脏隔离。我们的初始步骤，从那些用于分离新生鼠心肌细胞，并产生非常小的数值适用于膜片钳记录或PCR分析细胞的开发。然而，为了提高愈合日和心脏的黑色素细胞，进行更深入的分析，电生理或生化研究的可行性，我们制定了从那些旨在隔离皮肤的黑素细胞精致的过程。描述和展示了在本次审查的程序有生产，可作为镀纯人群或心肌与心脏健康的黑素细胞的优势。
Protocol
Representative Results
Discussion
心黑素细胞存在于心脏内的解剖位置中通常引起心律失常的触发器。这些区域包括肺静脉，房室瓣环，后左心房和卵圆孔（ 图4）。要理解中的作用，这些细胞在心律失常玩，我们开发的技术来隔离他们，研究他们的生理机能。但是，我们认识到，提高该技术以产生更健康，更大量的心脏黑色素细胞将允许进一步的研究，以探讨心脏黑色素细胞对外源性刺激的反应。此外，改进的…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由卫生部授予R01 HL105734到VVPMDL国家研究院赞助支持，部分是由健康研究事业奖K08 HL094748国家机构。 VVP是美国心脏协会的创新研究员被授予11IRG900384支持。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
| MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
| DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
| Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
| Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
| Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
| TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
| Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
| Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
| Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
| Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |
References
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