I denne protokol, w e identificeret en ny population af melanocytstimulerende lignende celler (også kendt som kardiale melanocytter) i hjerterne på mus og mennesker, der bidrager til atriearytmien udløser i mus.
Vi identificerede en ny population af melanocytstimulerende lignende celler (også kendt som kardiale melanocytter) i hjerterne på mus og mennesker, der bidrager til atriearytmien triggers i mus. For at undersøge de elektriske og biologiske egenskaber kardiologiske melanocytter vi udviklet en procedure for at isolere dem fra mus hjerter, vi stammer fra dem, designet til at isolere neonatale murine kardiomyocytter. For at opnå sundere kardiale melanocytter er egnede til mere omfattende patch clamp eller biokemiske undersøgelser, har vi udviklet en raffineret fremgangsmåde til isolering og forkromning kardiale melanocytter baseret på dem, der oprindeligt designet til at isolere kutane melanocytter. Den raffinerede procedure påvises i denne anmeldelse og producerer større mængder af sunde melanocytstimulerende-lignende celler, som kan være belagt som en ren population eller med kardiomyocytter.
Vi har for nylig identificeret en ny celle population i hjertet af mus og mennesker, der udtrykker melanin syntese enzymer og morfologisk ligner kutane melanocytter. Vi kaldes disse cellers kardiale melanocytter 'og fundet de er til stede i anatomiske steder, hvorfra atriearytmien udløser ofte oprindelse i mennesker. Vi fandt også kardiologiske melanocytter bidrage til atrial arytmi i mus med germlinie sletning af DCT. Hjerte melanocytter er tyndt fordelt i hele musen atrium, hvor de omfatter mindre end 0,1% af alle atrielle celler. For at undersøge de elektriske og biologiske egenskaber kardiologiske melanocytter vi udviklet en procedure for at isolere dem fra muse-hjerte ved hjælp af Cre-inducerbare melanocytstimulerende specifikke markører. Vores indledende procedure blev udviklet fra dem, der anvendes til at isolere neonatale murine cardiomyocytter og gav meget lille antal celler, der er egnede til patch clamp optagelser eller PCR-analyse. For at forbedre helbredeth og levedygtighed af hjerte melanocytter, for mere dybtgående elektrofysiologiske analyser eller biokemiske undersøgelser, har vi udviklet en raffineret procedure fra dem, designet til at isolere kutane melanocytter. Den beskrevne og demonstreret i denne anmeldelse fremgangsmåde har den fordel at producere sundere kardielle melanocytter, der kan være belagt som en ren population eller med kardiomyocytter.
Hjerte melanocytter er til stede i anatomiske steder i hjertet, der almindeligvis giver anledning til atriearytmien udløsere. Disse regioner omfatter lungevenerne, atrioventrikulær ringformede, bageste venstre forkammer og foramen ovale (figur 4). For at forstå den rolle, disse celler spiller i arrhythmogenesis udvikler vi teknikker til at isolere dem og studere deres fysiologi. Vi erkendte dog, at forbedring af denne teknik til at give sundere og større mængder af kardiologiske melanocytter ville …
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af National Institutes of Health award R01 HL105734 til VVPMDL understøttes delvist af National Institutes of Health Research Career Award K08 HL094748. VVP er en innovativ forsker i American Heart Association støttet af tilskud 11IRG900384.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comment |
MCDB 153 | Sigma-Aldrich | M7403 | Dissolve in: Water |
DPBS, no calcium no magnesium | Invitrogen | 14190136 | Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Sodium Bicarbonate, or Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% | Sigma-Aldrich | S5761 or S8761 | Water Stock Conc.: 1X Working Conc.: 1X |
Penicillin-streptomycin | Invitrogen | 15140163 | Stock Conc.: 100X Working Conc.: 1X |
Fetal Bovine Serum | Life Technology | Certified | Working Conc.: 4% |
TPA | Sigma-Aldrich | P1585 | DMSO Stock Conc.: 3.2 μM Working Conc.: 32 nM |
Transferrin | Sigma-Aldrich | T8158 | DPBS Stock Conc.: 0.1 mg/ml Working Conc.: 1 μg/ml |
Dibutyryl cyclic AMP | Sigma-Aldrich | D0627 | DPBS Stock Conc.: 0.5 mM Working Conc.: 5 μM |
Insulin | Sigma-Aldrich | I6634 | 10 mM
acetic acid Stock Conc.: 1 mg/ml Working Conc.: 5 μg/ml |
Basic FGF | BD Biosciences | 354060 | Water Stock Conc.: 4 ng/μl Working Conc.: 4 ng/ml |