कार्बन ब्लैक इंक के Intravascular परफ्यूज़न सेरेब्रल वेसल्स के विश्वसनीय दृश्य की अनुमति देता है

Summary

Analysis of rodent cerebrovascular anatomy plays an important role in experimental stroke research. In this context, intravascular perfusion with colored latex has been considered as a standard tool for several years. However, this technique implies distinct technical limitations, which undermine its reproducibility. Here, we describe a simple method to visualize cerebral vessels in a reproducible manner. Injection of a mixture of two commercially available carbon black inks through the left myocardial ventricle results in adequate filling of cerebral vessels with high contrast visualization. We have successfully applied this technique to identify anastomotic points between cerebral vascular territories of mice with different genetic backgrounds. We finally give evidence that this novel and simple method for vessel staining can be combined with triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining – a widely used tool to observe and analyze infarct volumes in mice.

Abstract

मस्तिष्क वाहिकाओं के संरचनात्मक ढांचे मस्तिष्क hemodynamics के लिए एक महत्वपूर्ण निर्धारक के रूप में के रूप में अच्छी तरह से चोट के इस्कीमिक अपमान के बाद गंभीरता है. मस्तिष्क vasculature गतिशील विभिन्न pathophysiological राज्यों के लिए जवाब है और यह तनाव के बीच और आनुवंशिक जोड़तोड़ की शर्तों के तहत काफी मतभेद को दर्शाती है. मूलतः, intracranial पोत धुंधला के लिए एक विश्वसनीय तकनीक क्रम में ischemic स्ट्रोक के रोगजनन अध्ययन आवश्यक है. अभी हाल तक, विभिन्न तकनीकों का एक सेट कम चिपचिपापन राल, araldite एफ के इंजेक्शन सहित मस्तिष्क vasculature, जेलाटीन ² या ³ कार्बन ब्लैक के बिना विभिन्न ¹ (यानी कामैन लाल, भारत स्याही) या लाटेकस रंगों के साथ मिश्रित. कल्पना करने के लिए नियोजित किया गया है आरोही महाधमनी के माध्यम से सफेद लेटेक्स परिसर के परफ्यूज़न 1 Coyle और Jokelainen ³ द्वारा सूचित किया गया है. Maeda एट अल. ² कार्बो जोड़कर प्रोटोकॉल को संशोधित किया हैn मस्तिष्क के खारा छिड़काव के बाद जहाजों की सुधार विपरीत दृश्य के लिए लाटेकस परिसर काली स्याही. हालांकि, अक्षम छिड़काव और जहाजों के अपर्याप्त भरने अक्सर लाटेकस ⁴ परिसर के उच्च चिपचिपापन कारण अनुभव कर रहे हैं. इसलिए, हम एक सरल और लागत प्रभावी तकनीक दो व्यावसायिक रूप से उपलब्ध कार्बन ब्लैक स्याही (CB1 और CB2) का एक मिश्रण का उपयोग करने के लिए एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य ⁵ तरीके में मस्तिष्क vasculature कल्पना का वर्णन किया है. हम CB1 + चूहों परिणामों में CB2 साथ लाटेकस ⁵ छिड़काव की तुलना में एक उच्च घनत्व में काफी छोटे मस्तिष्क वाहिकाओं के धुंधला कि छिड़काव में दिखाया गया है. यहाँ, हम अपने प्रोटोकॉल (एसीए) पूर्वकाल और मध्य मस्तिष्क धमनियों (एमसीए) विभिन्न आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ चूहों में पोत विविधताओं का अध्ययन करने के लिए के बीच शाखामिलन संबंधी बिंदुओं की पहचान करने का वर्णन करता है. अंत में, हम CB1 संयोजन के द्वारा एक क्षणिक फोकल चूहों में मस्तिष्क ischemia मॉडल में हमारी तकनीक की व्यवहार्यता का प्रदर्शन +CB2 की मध्यस्थता इस्कीमिक चोटों के विभिन्न डिग्री में टीटीसी धुंधला के साथ पोत धुंधला हो जाना.

Protocol

1. पशु प्रयोगों प्रयोगशाला पशुओं की देखभाल और उपयोग के लिए NIH दिशा निर्देशों के अनुसार किए गए और स्थानीय अधिकारियों द्वारा मंजूरी दे दी है. सभी प्रयोगों के लिए, / C57BL6 जम्मू जंगली प्रकार चूहों, ApolipoproteinE – / …

Representative Results

यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल कृंतक मस्तिष्क vasculature की पारंपरिक लाटेकस आधारित दृश्य की तकनीकी सीमाओं पर काबू चित्रा 1A रंग लाटेकस कि निम्नलिखित छिड़काव से पता चलता है, केवल ventral सतह पर बड़े जहाजों दाग रहे ह?…

Discussion

CB1 + CB2 पुस्तिका इंजेक्शन द्वारा परफ्यूज़न बाहर किया जा सकता है सफलतापूर्वक द्वारा गहन प्रशिक्षण के बिना के रूप में यह किसी भी विशिष्ट डिवाइस के लिए कुछ दबाव ^2,3 मतलब शामिल नहीं करता है. हमारे प्रोटोकॉ?…

Materials

Name of reagent	Company Name	Catalog No.
Scribtol Schwarz (CB2)	Pelican, Germany	221 135
Stempelfarbe (CB1)	Herlitz PBS AG, Germany	10417202
Gedeo Latex	Pebeo, France	13042B