Summary

Karbon Siyah Mürekkep İntravasküler Perfüzyon Serebral Gemiler Güvenilir Görselleştirme verir

Published: January 04, 2013
doi:

Summary

Kemirgen serebrovasküler anatomi Analiz deneysel inme araştırmalarında önemli bir rol oynar. Bu çerçevede, renkli lateks ile intravasküler perfüzyon birkaç yıldır standart bir araç olarak kabul edilmiştir. Ancak, bu tekniğin tekrarlanabilirliği zayıflatmak farklı teknik sınırlamaları, ifade eder. Burada, tekrarlanabilir bir şekilde beyin damarlarının görselleştirmek için basit bir yöntem tarif. Yüksek kontrast görselleştirme ile beyin damarlarının yeterli dolgu sol ventrikül miyokard sonuçları ile iki ticari karbon siyah mürekkepler karışımı Enjeksiyon. Biz başarıyla farklı genetik geçmişleri olan farelerin serebral vasküler ülkelerle arasındaki anastomoz noktaları belirlemek için bu tekniği uyguladık. Farelerde infarkt hacimleri gözlemlemek ve analiz etmek için yaygın olarak kullanılan bir araçtır – Sonunda geminin boyanması için bu yeni ve basit bir yöntemdir Triphenyftetrazoliumchlorid (TTC) boyama ile kombine edilebilir olduğunu ifade vermek.

Abstract

Beyin damarlarının anatomik yapısı beyin hemodinami için önemli bir belirleyici yanı sıra iskemik hakaret takip yaralanma şiddeti olduğunu. Beyin damarlarında dinamik çeşitli patofizyolojik devletler yanıt verir ve suşları arasındaki genetik manipülasyon koşullarında önemli farklılıklar sergilemektedir. Esasen, intrakraniyal damar boyama için güvenilir bir tekniktir iskemik inme patogenezinde çalışmak için esastır. Yakın zamana kadar, farklı teknikler bir dizi düşük viskoziteli reçine, araldit F enjeksiyonunu içeren beyin damarlarında, jelatin 2 veya siyah 3 karbon olmadan çeşitli boyalar 1 (yani karmin kırmızı, çini mürekkebi) veya lateks ile karıştırılır. Görselleştirmek için istihdam edilmiştir Asendan aorta yoluyla beyaz lateks bileşik Perfüzyon ilk Coyle ve Jokelainen 3 tarafından rapor edilmiştir. Maeda et al. 2 karbo ekleyerek değiştirilmiş olan protokolbeynin fizyolojik perfüzyon sonrası damarlarının gelişmiş kontrast görselleştirme için lateks bileşik n siyah mürekkep. Ancak, verimsiz perfüzyon ve gemilerin yetersiz dolum sık lateks bileşik 4 yüksek viskozitesi nedeniyle yaşanmaktadır. Bu nedenle, bir tekrarlanabilir bir şekilde 5 beyin damarlarında görselleştirmek için ticari olarak satılan iki karbon siyah mürekkep (CB1 ve CB2) oluşan bir karışım kullanılarak bir basit ve düşük maliyetli bir teknik tarif var. Biz lateks perfüzyon 5 ile karşılaştırıldığında daha yüksek bir yoğunlukta önemli ölçüde daha küçük beyin damarlarının boyama farelerde sonuç CB1 + CB2 ile bu perfüzyon göstermiştir. Burada, anterior (ACA) ve farklı genetik geçmişleri olan farelerde damar değişikliklerin incelenmesi orta serebral arter (MCA) arasındaki anastomoz noktaları belirlemek için protokol açıklar. Son olarak, CB1 birleştirerek farelerde bir geçici fokal serebral iskemi modelinde, bizim teknik olarak uygulanabileceğini göstermek +Iskemik yaralanma çeşitli derecelerde TTC boyama ile CB2-aracılı damar boyama.

Protocol

1. Hayvanlar Deneyler laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için NIH kılavuzunda göre yürütülen ve yerel otoriteler tarafından onaylanmıştır. Tüm deneyler için, C57Bl6 / J yabani tip fareler, Apolipoprotein – / – (ApoE KO) ve (12-16 haftalık, 26-30 g vücut ağırlığı, deneysel grup başına 5-6 hayvan) SV129 fareler kullanılmıştır. 2. Renkli Latex ile Serebral Gemiler Boyanması EP bir tüp içinde bir 01:20 oranında …

Representative Results

Burada açıklanan protokol kemirgen beyin damarlarında geleneksel lateks bazlı görselleştirme teknik kısıtlamaların üstesinden gelmektedir. Şekil 1A renkli lateks bu aşağıdaki perfüzyon göstermektedir, ventral yüzeyi üzerinde sadece büyük damarlarda tüm dorsal yüzeyini renksiz bırakarak boyanmıştır. Sonuç da oldukça değişkendir. Beyin (veriler gösterilmemiştir) dorsal yüzeyinde görünür ACA ve MCA kısmi boyama altı gösterileri dışında sadece bir hayvan. Tersine, C…

Discussion

Bu belli bir basınç 2,3 ima için herhangi bir özel cihaz içermeyen manuel olarak enjeksiyon ile CB1 + CB2 perfüzyon yoğun bir eğitim olmadan ile başarılı bir şekilde gerçekleştirilebilir. Bizim protokol perfüzyon sonuçların heterojenliği azdır. 20 iskemik hayvanlar üzerinden sadece 1 16 iskemik olmayan hayvanların üzerinden hayvan ve 3 yetersiz perfüzyon göstermiştir. Bu durumlarda, damarların tıkanması neden tuzlu perfüzyon sırasında kabarcıklarının eklenmesi başarısız so…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Biz video çekimi hazırlık düzenlemek için onu mükemmel teknik destek ve Mahesh Kumar Teli için Britta kaltwasser teşekkür etmek istiyorum.

Materials

Name of reagent Company Name Catalog No.
Scribtol Schwarz (CB2) Pelican, Germany 221 135
Stempelfarbe (CB1) Herlitz PBS AG, Germany 10417202
Gedeo Latex Pebeo, France 13042B

References

  1. Meng, H., Peng, Y., et al. Nuclear contrast angiography: A simple method for morphological characterization of cerebral arteries. Brain Research. 1261, 75-81 (2009).
  2. Maeda, K., Hata, R., et al. Differences in the cerebrovascular anatomy of C57black/6 and SV129 mice. Neuroreport. 9 (7), 1317-1319 (1998).
  3. Coyle, P., Jokelainen, P. T. Dorsal cerebral arterial collaterals of the rat. The Anatomical Record. 203, 397-404 (1982).
  4. Coyle, P. Dorsal cerebral collaterals of stroke-prone spontaneously hypertensive rats (SHRSP) and Wistar Kyoto rats (WKY). The Anatomical Record. 218, 40-44 (1987).
  5. Hasan, M. R., Herz, J., et al. Visualization of macroscopic cerebral vessel anatomy—A new and reliable technique in mice. Journal of Neuroscience Methods. 204, 249-253 (2012).
  6. Doeppner, T. R., Nagel, F., et al. TAT-Hsp70-mediated neuroprotection and increased survival of neuronal precursor cells after focal cerebral ischemia in mice. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 29, 1187-1196 (2009).
  7. Todo, K., Kitagawa, K., et al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor enhances leptomeningeal collateral growth induced by common carotid artery occlusion. Stroke. 39 (6), 1875-1882 (2008).
  8. Sugiyama, Y., Yagita, Y., et al. Granulocyte colony-stimulating factor enhances arteriogenesis and ameliorates cerebral damage in a mouse model of ischemic stroke. Stroke. 42 (3), 770-775 (2011).
  9. Busch, H. J., Buschmann, I. R., et al. Arteriogenesis in hypoperfused rat brain. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 23 (5), 621-628 (2003).
  10. Maeda, K., Hata, R., et al. Regional metabolic disturbances and cerebrovascular anatomy after permanent middle cerebral artery occlusion. in C57black/6 and SV129 mice. Neurobiology of Diseases. 6, 101-108 (1999).
  11. Wang, Y., Kilic, E., et al. VEGF overexpression induces post-ischaemic neuroprotection, but facilitates haemodynamic steal phenomena. Brain. 128 (1), 52-63 (2005).
  12. ElAli, A., Doeppner, T. R., et al. Increased blood-brain barrier permeability and brain edema after focal cerebral ischemia induced by hyperlipidemia: Role of lipid peroxidation and calpain 1/2, matrix metalloproteinase-2/9, and RhoA overoxidation. Stroke. 42, (2011).
  13. Coyle, P., Jokelainen, P. T. Differential outcome to middle cerebral artery occlusion in spontaneously hypertensive stroke-prone rats (SHRSP) and Wistar Kyoto (WKY) rats. Stroke. 14, 605-611 (1983).
  14. Coyle, P. Diameter and length changes in cerebral collaterals after middle cerebral artery occlusion in the young rat. The Anatomical Record. 210 (2), 357-364 (1984).
check_url/4374?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Hasan, M. R., Herz, J., Hermann, D. M., Doeppner, T. R. Intravascular Perfusion of Carbon Black Ink Allows Reliable Visualization of Cerebral Vessels. J. Vis. Exp. (71), e4374, doi:10.3791/4374 (2013).

View Video