Внутрисосудистое перфузии Ink Углерод позволяет надежно визуализации сосудов головного мозга
Summary
Анализ грызунов цереброваскулярных анатомии играет важную роль в экспериментальных исследованиях инсульта. В этом контексте внутрисосудистого перфузии с цветным латексом была рассмотрена в качестве стандартного инструмента в течение нескольких лет. Однако, этот метод предполагает различные технические ограничения, которые подрывают его воспроизводимости. Здесь мы рассмотрим простой способ для визуализации сосудов головного мозга в воспроизводимым образом. Инъекции смесь двух коммерчески доступных углерода черные чернила через левый желудочек инфаркт результатов в достаточном наполнении сосудов головного мозга с высоким визуализация контраста. Мы успешно применять эту технику, чтобы определить анастомоза между точками церебральных сосудистых территорий мышей с различным генетическим фоном. Мы, наконец, дать показания, что это новый и простой способ окрашивания судна могут быть объединены с трифенилтетразолий хлорид (TTC) окрашивание – широко используемый инструмент для наблюдения и анализа объемов инфаркта у мышей.
Abstract
Анатомического строения сосудов головного мозга является ключевым фактором для мозга гемодинамики, а также от степени серьезности травмы после ишемических инсультов. Церебральной сосудистой динамически реагирует на различные патофизиологические состояния и оно проявляет значительные различия между штаммами и в условиях генетических манипуляций. По сути, надежная техника для окрашивания внутричерепного судна необходимо в целях изучения патогенеза ишемического инсульта. До недавнего времени, множество различных методов был использован для визуализации мозговой сосудистой включая инъекции смола низкой вязкости, Araldite F, желатина смешивают с различными красителями 1 (т.е. карминно-красные, тушь) или латекса с 2 или без 3 сажи. Перфузии белого латекса соединение через восходящую аорту была впервые сообщил Койл и Jokelainen 3. Maeda и др. 2. Изменили протокол, добавив карбоп черные чернила на латекс соединения для улучшения визуализации контрастности сосудов после солевого перфузии головного мозга. Тем не менее, неэффективная и неадекватная перфузия заполнения сосудов часто испытывал из-за высокой вязкости соединения латекса 4. Таким образом, мы описали простой и экономически эффективный метод, используя смесь двух коммерчески доступных углерода черные чернила (CB1 и CB2) для визуализации мозговой сосудистой воспроизводимым образом 5. Мы показали, что перфузия CB1 + CB2 у мышей приводит к окрашиванию значительно меньших сосудов головного мозга в более высокую плотность по сравнению с латексом перфузии 5. Здесь мы описываем наш протокол для определения точки анастомоза между передней (ACA) и средней мозговой артерии (СМА), чтобы изучить судно изменений у мышей с различным генетическим фоном. Наконец, мы демонстрируем возможности нашей техники в переходном церебральной ишемии модели у мышей путем объединения CB1 +CB2-опосредованной судна окрашивания TTC окрашивания в различные степени ишемического повреждения.
Protocol
Representative Results
Discussion
Перфузии + CB1 CB2 ручной инъекций может осуществляться успешно без интенсивного обучения, поскольку оно не связано с каким-либо конкретным устройством, подразумевает определенное давление 2,3. Неоднородность перфузии результатов в нашем протоколе также незначительна. Только 1 живо…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить Бритта Kaltwasser за отличную техническую помощь и Махеш Кумар Тели организовать подготовку видеосъемки.
Materials
| Name of reagent | Company Name | Catalog No. |
| Scribtol Schwarz (CB2) | Pelican, Germany | 221 135 |
| Stempelfarbe (CB1) | Herlitz PBS AG, Germany | 10417202 |
| Gedeo Latex | Pebeo, France | 13042B |
References
- Meng, H., Peng, Y., et al. Nuclear contrast angiography: A simple method for morphological characterization of cerebral arteries. Brain Research. 1261, 75-81 (2009).
- Maeda, K., Hata, R., et al. Differences in the cerebrovascular anatomy of C57black/6 and SV129 mice. Neuroreport. 9 (7), 1317-1319 (1998).
- Coyle, P., Jokelainen, P. T. Dorsal cerebral arterial collaterals of the rat. The Anatomical Record. 203, 397-404 (1982).
- Coyle, P. Dorsal cerebral collaterals of stroke-prone spontaneously hypertensive rats (SHRSP) and Wistar Kyoto rats (WKY). The Anatomical Record. 218, 40-44 (1987).
- Hasan, M. R., Herz, J., et al. Visualization of macroscopic cerebral vessel anatomy—A new and reliable technique in mice. Journal of Neuroscience Methods. 204, 249-253 (2012).
- Doeppner, T. R., Nagel, F., et al. TAT-Hsp70-mediated neuroprotection and increased survival of neuronal precursor cells after focal cerebral ischemia in mice. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 29, 1187-1196 (2009).
- Todo, K., Kitagawa, K., et al. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor enhances leptomeningeal collateral growth induced by common carotid artery occlusion. Stroke. 39 (6), 1875-1882 (2008).
- Sugiyama, Y., Yagita, Y., et al. Granulocyte colony-stimulating factor enhances arteriogenesis and ameliorates cerebral damage in a mouse model of ischemic stroke. Stroke. 42 (3), 770-775 (2011).
- Busch, H. J., Buschmann, I. R., et al. Arteriogenesis in hypoperfused rat brain. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 23 (5), 621-628 (2003).
- Maeda, K., Hata, R., et al. Regional metabolic disturbances and cerebrovascular anatomy after permanent middle cerebral artery occlusion. in C57black/6 and SV129 mice. Neurobiology of Diseases. 6, 101-108 (1999).
- Wang, Y., Kilic, E., et al. VEGF overexpression induces post-ischaemic neuroprotection, but facilitates haemodynamic steal phenomena. Brain. 128 (1), 52-63 (2005).
- ElAli, A., Doeppner, T. R., et al. Increased blood-brain barrier permeability and brain edema after focal cerebral ischemia induced by hyperlipidemia: Role of lipid peroxidation and calpain 1/2, matrix metalloproteinase-2/9, and RhoA overoxidation. Stroke. 42, (2011).
- Coyle, P., Jokelainen, P. T. Differential outcome to middle cerebral artery occlusion in spontaneously hypertensive stroke-prone rats (SHRSP) and Wistar Kyoto (WKY) rats. Stroke. 14, 605-611 (1983).
- Coyle, P. Diameter and length changes in cerebral collaterals after middle cerebral artery occlusion in the young rat. The Anatomical Record. 210 (2), 357-364 (1984).
