<sub> 1</sub> F<sub> O</subSubmitochondrial 소포 막 패치 클램프 녹음을 공연> ATPase의 소포의 준비와 기술
Summary
쥐의 뇌에서 F1FO ATP 합성 효소 복합체 충실 submitochondrial 소포를 분리하는 방법이 설명되어 있습니다. 이 소포는 F1FO ATPase의 복잡하고 패치 클램프 녹음의 기술을 사용하여 변조의 활동의 연구를 할 수 있습니다.
Abstract
미토콘드리아는 신진 대사, 생존 1, 개발 및 칼슘 2 신호 등 많은 중요한 세포 기능에 참여하고 있습니다. 가장 중요한 미토콘드리아 기능의 두 ATP, 산화 인산화에 의한 세포의 에너지 통화 및 프로그램 된 세포의 죽음 3 신호 조정의 효율적인 생산에 관련되어 있습니다.
ATP의 생산을 주로 담당하는 효소는 ATP 합성 효소 4-5이라는 F1FO-ATP 합성 효소이다. 최근 몇 년 동안, 세포 자멸사 및 괴사 세포 죽음에서 미토콘드리아의 역할은 상당한 주목을 받고있다. 사멸 세포 죽음, 이러한 백스 같은 BCL-2 가족 단백질은 미토콘드리아 외막를 입력 올리고머 및 세포질 6에 직업 세포 사멸 인자를 방출, 외부 막을 permeabilize. 고전적인 괴사 된 세포의 죽음, 이러한 신경 세포의 허혈이나 excitotoxicity에,이 Larg에 의해 생성 된 것과매트릭스 칼슘 전자, 제대로 규제 증가는 내부 멤브레인 기공, 미토콘드리아 투과성 전이 기공 또는 MPTP의 개통에 기여하고 있습니다. 이 내부 막 탈분극 및 외부 막 파열, 직업 세포 사멸 인자의 릴리스 및 신진 대사 장애에 기여하고, 삼투압 변화가 발생합니다. BCL-XL 7을 (를) 포함하여 많은 단백질 F1FO ATP 합성 효소, 조절의 기능과 상호 작용합니다. BCL-XL은 F1FO ATP 합성 효소의 베타 소단위와 직접 상호 작용이 상호 작용 F1FO ATPase의 활성 8시 F1FO에 의한 H +의 그물 전송함으로써 증가하는 미토콘드리아의 효율성을 증가 F1FOATPasecomplex에서 누수가 전도성을 감소시킨다. ATP 합성 효소의 활동 및 변조를 연구하기 위해, 우리는 F1FO ATPase의를 포함한 설치류 뇌 submitochondrial의 소포 (연 소식 기화기)에서 분리. Alavian 등과 같이 연 소식 기화기는 F1FO ATPase의의 구조와 기능 무결성을 유지합니다. 여기, 우리는 방법을 설명우리는 쥐의 뇌에서 연 소식 기화기의 격리를 위해 성공적으로 사용하고 우리는 연 소식 기화기 (이온 누출 전도도) 채널의 활동을 분석 할 수있는 패치 클램프 기술을 묘사합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
방법에서와 같이 본 발명이 방법으로 phenotypes.SMVspurified 세포의 구별없이 뇌 전체에서 2 단계 이후 단계 1 submitochondrial 소포 (연 소식 기화기)의 끝에서 다른 세포 내 소기관에 의한 오염이 필수적으로 순수 미토콘드리아의 분리를하는 수 기술 그림 1과 우리의 이전 작업 (Alavian KN 등. 8)와 이전의 동결 구조적 및 기능적 무결성을 유지합니다. 냉동 및 해동 후, 미토콘드리?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name | Company | Catalogue number |
| Potter-Elvehjem Tissue Grinder withPTFEPestle | Krackeler Scientific, Inc. | 1-7725T-5 |
| Eppendorf Centrifuge 5424 | Eppendorf | 5424 000.410 |
| 4639 Cell Disruption Vessel | Parr Instrument Company | 4639 |
| Ficoll | Sigma-Aldrich | F5415 |
| Polycarbonate centrifuge tubes | Beckman Coulter | P20314 |
| SW-50.1 rotor | Beckman Coulter | |
| L8-70M Ultracentrifuge | Beckman Coulter | |
| Digitonin | Sigma-Aldrich | D5628 |
| Lubrol PX (C12E9) | Calbiochem | 205534 |
| Axopatch 200B | Axon Instruments | |
| Digidata 1440A | Molecular Device | |
| pClamp10.0 | Molecular Device | |
| Manipulator | Sutter Instrument | |
| Borosilicate glass capillary | World Precision Instruments | 1308325 |
| Flaming/Brown Micropipette Puller Model P-87 | Sutter Instrument |
References
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