في هذا الفيديو كيف نظهر مختبرنا الممرات بشكل روتيني الأشكال البشرية خطوط الخلايا الجذعية الجنينية مع التربسين.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الأشكال الركض الجذعية الجنينية البشرية خلية خطوط مع التربسين
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
في هذا الفيديو كيف نظهر مختبرنا الممرات بشكل روتيني الأشكال البشرية خطوط الخلايا الجذعية الجنينية مع التربسين. الخلايا الجذعية الجنينية البشرية والفنية للثقافة الخلية ، وتميل الى اكتساب شذوذ karyotypic الأضعاف مع الكثافة السكانية العالية. الركض السليم أمر ضروري للحفاظ على ، غير متمايزة صحية ، والأشكال الطبيعية karyotypically الخلايا الجذعية الجنينية البشرية الثقافة. أولا ، يتم غسلها ثقافة التوسع في برنامج تلفزيوني وسائل الإعلام لإزالة بقايا وحطام الخلايا ، ثم يتم مضافين الخلايا مع الحد الأدنى من حجم 0.05 ٪ دافئة التربسين - EDTA. ترك التربسين على الخلايا لمدة تصل إلى خمس دقائق ، ثم يتم فكها بلطف مع خلايا ماصة a 2mL المصلية. يتم جمع نظام التعليق الخلية ومختلطة مع كمية كبيرة من الاشكال وسائل الإعلام ، ثم يتم جمع الخلايا بواسطة الطرد المركزي لطيف. تتم إزالة المعطل خليط سائل الإعلام التربسين ، وخلايا معلق في وسائل الاعلام الأشكال السابقة للحرارة. ويتم احتساب نسبة تقسيم المناسب (1:10 عموما 1:20) ، وخلايا إعادة مطلي على طبق من العمر 1-2 اليوم تحتوي على أحادي الطبقة من الماوس الجنينية الخلايا المغذية المشع الليفية. تبقى الثقافة الأشكال المصنفة حديثا لوحة دون عائق لمدة 48 ساعة ، ثم يتم تغيير وسائل الاعلام كل يوم بعد ذلك. فمن المهم عدم trpsinize الى تعليق خلية واحدة ، لأن ذلك يزيد من مخاطر إدخال karyotypic شذوذ.
البروتوكول
عام
نوصي ذوبان لا يزيد عن عينة واحدة في وقت معين لضمان سهولة التعامل. ينبغي للمعالج الحرص على عدم ترك الثقافات في درجة حرارة الغرفة وCO2 منخفضة لفترات طويلة من الزمن. ويتم ذلك عن الطرد المركزي من الخلايا الحية على 500-600 XG لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
MEFs (خلايا الفأر الجنينية الطاعم)
- قبل وسائل الاعلام الحارة MEF إلى 37 درجة مئوية. إزالة MEF قنينة من -80 درجة مئوية ، وعلى الفور يغرق في النصف السف....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا الفيديو كيف أننا أثبتنا الأشكال مرور روتينية الإنسان خطوط الخلايا الجذعية الجنينية في المختبر لدينا. تقسيم فعالة ومنتظمة والركض أمر ضروري للحفاظ على صحة الإنسان الخلايا الجذعية الجنينية الخط. التربسين مرور توسط هو ميزة كبيرة من خطوط الخلايا الأشكال ، ومع ذلك ، فمن المهم أن لا يعرض للتريبسين عبر الثقافات أو الحصول على نسبة كبيرة من الخلايا واحدة خلال إعادة platting.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
الأشكال وسائل الاعلام 651.5 مل KO - DMEM 500 مل 6.5 مل PenStrep GlutaMAXTM 6.5 مل 6.5 مل NEAA 2 - المركابتويثانول 0.5ul استبدال المصل KO 65 مل 65 مل Plasmanate bFGF2 (10 نانوغرام / مل النهائي) 0.65 مل
المراجع
- Edmond, M. B. Nosocomial bloodstream infections in United States hospitals: a three-year analysis. Clin. Infect. Dis. 29, 239-244 (1999).
- Ramage, G., Bachmann, S., Patterson, T. F., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
