גוונים Passaging האדם עובריים לתאי גזע קווי עם טריפסין

Summary

בסרטון הזה אנחנו מדגימים איך במעבדה שלנו שגרתי קטעים בגוונים האדם עובריים קווי גזע עם טריפסין.

Abstract

בסרטון הזה אנחנו מדגימים איך במעבדה שלנו שגרתי קטעים בגוונים האדם עובריים קווי גזע עם טריפסין. בתאי גזע עובריים אנושיים הם חפצים של תרבית תאים, והם נוטים לרכוש ליקויים karyotypic עם הכפלות אוכלוסין גבוהה. Passaging נכונה חיונית לשמירה על בריא, מובחן, גוונים נורמלי karyotypically האדם גזע עובריים תרבות. ראשית, תרבות הרחבת נשטף ב PBS להסיר התקשורת שיורית ופסולת תאים, אז התאים מעולף עם נפח מינימלי של% 0.05 חם טריפסין-EDTA. טריפסין נשאר על התאים לתקופה של עד חמש דקות, ואז התאים וחילצה בעדינות עם טפטפת סרולוגיות 2ml. השעיית התא נאספים ומעורבבים עם כמויות גדולות של אמצעי התקשורת גוונים, אז התאים נאספים על ידי צנטריפוגה עדין. התערובת מומת טריפסין המדיה מוסר, ותאי resuspended מראש חימם התקשורת גוונים. יחס ראוי לפצל מחושב (בדרך כלל 1:10-01:20), ותאי מחדש מצופה לצלחת הישן 1-2 יום המכיל monolayer של מוקרן עובריים בעכבר תאים פיברובלסטים מזין. הגוונים החדשים seeded צלחת תרבות נותר ללא הפרעה במשך 48 שעות, אז התקשורת משתנה כל יום לאחר מכן. חשוב לא trpsinize עד ההשעיה תא בודד, כמו זה מגביר את הסיכון של החדרת ליקויים karyotypic.

Protocol

כללי אנו ממליצים הפשרה לא יותר מדגם אחד בזמן נתון, כדי להבטיח טיפול קל. המטפל צריך לדאוג שלא להשאיר תרבויות בטמפרטורת החדר CO2 נמוכה במשך תקופות זמן ארוכות. כל צנטריפוגה של תאים חיים נעשית XG 500-600 5 דקות בטמפרטורת החדר. <p class="jove_title" sty…

Discussion

בסרטון הזה הראינו איך אנחנו שגרתי גוונים מעבר אדם בתאי גזע עובריים קווי במעבדה שלנו. פיצול יעיל רגיל passaging חיונית לשמירה על תאים עובריים של אדם בריא קו גזע. מעבר טריפסין בתיווך היא יתרון משמעותי של קווים בגוונים התא, עם זאת, חשוב שלא לאורך trypsinize תרבויות או יש אחוז גדול של תאים בוד?…

Materials

HuES media 651.5 ml KO-DMEM 500 ml PenStrep 6.5 ml GlutaMAXTM 6.5 ml NEAA 6.5 ml 2‐mercaptoethanol 0.5ul KO Serum Replacement 65 ml Plasmanate 65 ml bFGF2 (10 ng/mL final) 0.65 ml