संवर्धित कोशिकाओं से क्रोमोजोम तैयारी
Summary
गुणसूत्रों ऐसे लिम्फोसाइट या त्वचा fibroblasts के रूप में जीवित कोशिकाओं से अलग, और मनुष्य या चूहों सहित जीवों से किया जा सकता है. ये गुणसूत्र तैयारी आगे दिनचर्या जी बैंडिंग और ऐसे स्वस्थानी संकरण (मछली) में प्रतिदीप्ति, तुलनात्मक जीनोमिक संकरण (CGH), और वर्णक्रमीय karyotyping (आकाश) के रूप में आणविक cytogenetic प्रक्रियाओं के लिए उपयोग किया जा सकता है.
Abstract
गुणसूत्र (cytogenetic) विश्लेषण व्यापक रूप से गुणसूत्र अस्थिरता का पता लगाने के लिए प्रयोग किया जाता है. जी बैंडिंग और ऐसे स्वस्थानी संकरण (मछली) में प्रतिदीप्ति के रूप में आणविक तकनीक के द्वारा पीछा किया जाता है, इस परख के लिए एक या अधिक गुणसूत्रों को शामिल जीनोम और rearrangements के अंश का लाभ या हानि शामिल है aberrations के लिए व्यक्ति की कोशिकाओं का विश्लेषण करने के लिए शक्तिशाली क्षमता है. मनुष्यों में गुणसूत्र असामान्यताओं लगभग 1 160 प्रति जीवित जन्मों 1,2, सभी गर्भपात की 60-80% में होते 3,4, मृत प्रसव का 10% 2,5, जन्मजात हृदय रोग 6, 3-6% के साथ व्यक्तियों के 13% बांझपन के मामलों की 2, और विकासात्मक देरी और जन्म दोष 7 के साथ कई रोगियों में. क्लोनल गुणसूत्र असामान्यताओं की टिप्पणियों दोनों नैदानिक और शकुन महत्व 8,9 के लिए दिखाया गया है के रूप में दुष्टता की cytogenetic विश्लेषण नियमित तौर पर, शोधकर्ताओं और चिकित्सकों द्वारा किया जाता है.60; क्रोमोजोम अलगाव जीन थेरेपी के लिए अमूल्य है और nonhuman primates और कृन्तकों 10-13 सहित जीवों की स्टेम सेल अनुसंधान.
गुणसूत्रों रक्त लिम्फोसाइटों, त्वचा fibroblasts, amniocytes, नाल, अस्थि मज्जा, और ट्यूमर नमूनों सहित रहते ऊतकों की कोशिकाओं से अलग किया जा सकता है. वे सबसे अधिक सघन और इसलिए अधिक स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे हैं जब गुणसूत्रों, पिंजरे का बँटवारा की मेटाफ़ेज़ स्तर पर विश्लेषण कर रहे हैं. गुणसूत्र अलगाव तकनीक की दिशा में पहला कदम बाद पश्चावस्था चरण के लिए आगे बढ़ने से कोशिकाओं को रोकने के लिए Colcemid साथ ऊष्मायन द्वारा धुरी फाइबर के विघटन, शामिल है. कोशिकाओं तो एक hypotonic समाधान के साथ इलाज किया और Carnoy लगानेवाला साथ उनके सूजन राज्य में संरक्षित कर रहे हैं. कोशिकाओं तो स्लाइड पर गिरा रहे हैं और उसके बाद की प्रक्रियाओं की एक किस्म के लिए उपयोग किया जा सकता है. जी बैंडिंग विशेषता प्रकाश और अंधेरे बैंड बनाने के लिए Giemsa साथ धुंधला हो जाना द्वारा पीछा trypsin उपचार शामिल है. एक ही जनसंपर्कगुणसूत्रों को अलग करने ocedure ऐसे स्वस्थानी संकरण (मछली) में प्रतिदीप्ति, तुलनात्मक जीनोमिक संकरण (CGH), और वर्णक्रमीय karyotyping (आकाश) 14,15 के रूप में प्रक्रियाओं के लिए कक्षों की तैयारी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
Introduction
क्रोमोजोम विश्लेषण गुणसूत्र अस्थिरता और आनुवंशिक विकारों और दुष्टता 1,2,8,9 के लिए अग्रणी rearrangements निदान करने के लिए दुनिया भर में उपयोग किया एक पारंपरिक तकनीक है. इसके अलावा, संवैधानिक और कैंसर का अधिग्रहण आनुवंशिक असामान्यताएं के निदान और अनुसंधान के लिए एक उच्च संकल्प ऐसे स्वस्थानी संकरण में प्रतिदीप्ति (मछली) के रूप में शास्त्रीय cytogenetic प्रक्रियाओं और आणविक cytogenetic के तरीके के संयोजन, तुलनात्मक जीनोमिक संकरण (CGH) के साथ प्राप्त किया जा सकता है , और वर्णक्रमीय karyotyping (आकाश) 14,15. हाल ही में, इन तकनीकों स्टेम सेल अनुसंधान के साथ जुड़े गुणसूत्र अस्थिरता के मूल्यांकन के लिए उपयोग किया गया है. इस तरह लंबे समय तक संवर्धित भ्रूण कोशिकाओं (ते) और विभिन्न जीवों के वयस्क स्टेम कोशिकाओं की aneuploidy रूप Karyotypic असामान्यताएं कई प्रयोगशालाओं द्वारा सूचित किया गया है. हाल ही में सबूत कुछ सेल लाइनों स्वाभाविक गुणसूत्र instabi के लिए इच्छुक हैं कि समर्थन करता हैपरवाह किए बिना संस्कृति की स्थिति की lity. स्थापना और / या मानव, माउस, या रीसस स्टेम सेल लाइनों को बनाए रखने के लिए जब इस कारण से, गुणसूत्र विश्लेषण गुणवत्ता नियंत्रण प्रक्रिया के हिस्से के रूप में सिफारिश की है. कई रिपोर्टों संस्कृति 10-13 में स्टेम कोशिकाओं और घातक कोशिकाओं या विभिन्न जीवों के गुणसूत्र स्थिरता पर नजर रखने के लिए नियमित और आणविक कोशिकाजननप्रकरण के उपयोग में बढ़ती रुचि का वर्णन. इन प्रोटोकॉल तेजी से अपने संवर्धित कोशिकाओं 13 की तेजी गुणसूत्र मूल्यांकन के लिए nongenetic प्रयोगशालाओं द्वारा इस्तेमाल किया जा रहा है. हम विभिन्न जीवों से निकाली नैदानिक और अनुसंधान प्रयोजनों और कोशिकाओं दोनों के लिए लागू किया जा सकता है, जो विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं से गुणसूत्र तैयार करने के लिए हमारी बुनियादी प्रक्रियाओं प्रस्तुत करते हैं.
Protocol
Representative Results
Discussion
हम विभिन्न मानव से प्राप्त प्रकार की कोशिकाओं, रीसस मकाक, चूहों, और चूहों 11,20-22 सहित विभिन्न जीवों की कोशिकाओं से गुणसूत्र अलगाव के लिए वर्तमान प्रक्रिया का उपयोग किया है. मानक प्रोटोकॉल प्रदान की जा…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस पांडुलिपि में वर्णित काम पैट्रिक एफ टेलर फाउंडेशन से धन के द्वारा संभव बनाया गया था.
Materials
| KaryoMAX Colcemid | Gibco | 15212-012 | |
| HBSS Buffer | Gibco | 24020-117 | |
| 0.5% Trypsin EDTA 10x | Gibco | 15400-054 | |
| Permount | Fisher Scientific | SP15-100 | |
| Buffer Tablets "GURR" | Gibco | 10580-013 | |
| Geimsa Stain | Ricca Chemical Company | 3250-16 | |
| Centrifuge 5810 | Eppendorf | ||
| Methanol | Caledon Laboratory Chemicals | 6700130 | |
| Glacial Acetic Acid | Krackeler Scientific Inc. | 11-9508-05 |
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