染色体制备培养细胞
Summary
染色体可以从活细胞如淋巴细胞或皮肤成纤维细胞中分离出来，并从生物体包括人或小鼠。这些染色体制剂可进一步用于常规G显带和分子细胞遗传学方法，如荧光原位杂交（FISH），比较基因组杂交（CGH）和光谱核型分析（SKY）。
Abstract
染色体（遗传学）分析被广泛用于染色体不稳定性的检测。当随后G显带和如荧光原位杂交（FISH）分子生物学技术，此法必须分析单个细胞对于涉及基因组重排，并涉及一个或多个染色体部分的收益或亏损畸变强大的能力。在人类中，染色体异常发生率约为每1 160个活产1,2，所有流产的60-80％3,4，死胎10％2,5，患有先天性心脏疾病6，3-6％个人13％不孕不育病例2，并在许多患者的发育迟缓和出生缺陷7。恶性肿瘤的细胞遗传学分析是经常使用的研究人员和临床医生，作为克隆性染色体异常的观测已经显示出具有诊断和预后意义8,9。60，染色体分离是非常宝贵的基因治疗和干生物，包括非人灵长类动物和啮齿动物10-13细胞研究。
染色体可以从活组织，包括外周血淋巴细胞，皮肤成纤维细胞，羊膜细胞，胎盘，骨髓和肿瘤样品的细胞中分离出来。染色体在有丝分裂的中期阶段进行分析，当它们被大部分冷凝并因此更加清晰可见。染色体分离技术的第一步涉及主轴纤维的破坏由孵化与秋水仙胺，以防止细胞从进到随后的后期阶段。然后将细胞用低渗溶液，并在其膨胀状态与卡诺固定液保存。的细胞，然后下降到幻灯片，然后可以用于各种各样的程序。 G显带包括胰蛋白酶处理，然后进行染色用姬姆萨打造特色光和暗带。同样的公关ocedure分离的染色体，可用于制备细胞对诸如荧光原位杂交（FISH），比较基因组杂交（CGH），和光谱核型分析（SKY）14,15程序。
Introduction
染色体核型分析是利用世界性诊断染色体不稳定和重排，导致遗传性疾病和恶性肿瘤1,2,8,9的常规技术。此外，对于宪法和癌症获得的遗传异常的诊断和研究更高的分辨率可与经典遗传学方法和分子细胞遗传学方法，如荧光原位杂交（FISH）的组合，比较基因组杂交（CGH）来实现和光谱核型分析（SKY）14,15。最近，这些技术已被用于与干细胞研究相关的染色体不稳定性的评价。核型异常如长期培养的胚胎干细胞（ES）和各种生物体的成体干细胞的非整倍体已经报道由多个实验室。最近的证据支持某些细胞系在本质上更倾向于染色体instabiLITY不管文化条件为此，建立和/或维持人，小鼠，或恒河猴干细胞系时，染色体分析，建议作为质量控制过程的一部分。许多报告描述了使用常规和分子细胞遗传学监测干细胞和恶性细胞或有机体的各种文化10-13的染色体的稳定性越来越大的兴趣。这些协议正越 来越多地使用非遗传实验室的培养细胞13染色体的快速评估。我们提出我们的基本程序，用于从不同的细胞类型，这可以应用于从多种生物衍生的临床和研究的目的和细胞染色体制备。
Protocol
Representative Results
Discussion
我们已经利用本程序为从各种生物体，包括从人获得的各种细胞类型，恒河猴，大鼠和小鼠11,20-22的细胞染色体隔离。标准协议提供的，但某些关键步骤和变量，可能需要调整细胞这些不同的类型。几个具体的步骤是关键的染色体制备和G带，以确保结果的可能的最佳质量两者。一种可影响测定的变量是秋水仙胺孵育时间。时间在秋水仙胺不足会产生更少的中期扩展和更长的，重叠的染色?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
在这个手稿中描述的工作成为可能，从帕特里克F.泰勒基金会的资助。
Materials
| KaryoMAX Colcemid | Gibco | 15212-012 | |
| HBSS Buffer | Gibco | 24020-117 | |
| 0.5% Trypsin EDTA 10x | Gibco | 15400-054 | |
| Permount | Fisher Scientific | SP15-100 | |
| Buffer Tablets "GURR" | Gibco | 10580-013 | |
| Geimsa Stain | Ricca Chemical Company | 3250-16 | |
| Centrifuge 5810 | Eppendorf | ||
| Methanol | Caledon Laboratory Chemicals | 6700130 | |
| Glacial Acetic Acid | Krackeler Scientific Inc. | 11-9508-05 |
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