マウス胚性外胚葉顔と間葉の分離
Summary
胚顔面外胚葉と間充織を分離するためのプロトコルが記載されている。我々は、最初の全体の胚を扱う全体フェイシャルプロミネンスを解剖してから、顔の外胚葉と間充織を分離するためにディスパーゼIIを使用。
Abstract
口腔顔面裂は、世界中の千新生児1,2で1.5に影響を与える最も頻繁に顔面の欠陥である。口腔顔面分裂文形成が異常な顔の開発3によって引き起こされます。ヒトとマウスでは、顔の初期成長とパターン形成は、組織のいくつかの小さな芽、4,5顔面プロミネンスに依存しています。ペアの前頭鼻プロセス（FNP）、上顎プロミネンス（MXP）及び下顎プロミネンス（MDP）：顔が6メインプロミネンスから派生しています。これらのプロミネンスは、上面を覆う上皮に収められて間葉の腫れで構成されています。複数の種における研究では、顔の外胚葉と間充織間のシグナリングのクロストークが面6を形成するための重要であることが示されている。しかし、これらのシグナル伝達に関与する遺伝子のリレーに関する機序の詳細は不足している。一遺伝子発現の包括的な理解を得るための方法、結合転写因子、およびdeveloに関連付けられたクロマチンマーク顔面外胚葉と間充織にpingを実行すると、分離された組織区分を隔離し、特徴付けることである。
ここでは、胎生（E）は10.5、プロミネンスの融合の前にマウスの顔の形成に重要な発達段階で顔の外胚葉と間充織を分離するための方法を提示します。本手法は、我々が以前に顔のプロミネンス7を解剖に使用してきたアプローチから適応されている。この株は遺伝学、ゲノミクスおよび顔面形態8のための標準となっているように、この以前の研究では、近交系のC57BL / 6マウスを採用していた。ここでは、しかし、可能な組織のより数量限定のため、弊社では一切の近交系より腹あたり近交系のCD-1購入したほうが安い株を、畜産のためのより堅牢で、より多くの胚を生成する傾向がある（12-18）を利用してきたマウス系統8。胚の分離に続いて、中性プロテアーゼディスパーゼIIは、全胚を治療するために使用されていました。その後、顔のプロミネンスは解剖されたED出て、顔の外胚葉が間葉から分離した。この方法は、顔の外胚葉と間充織の両方をそのまま保持します。この方法論を用いて得られた試料は、タンパク質検出、クロマチン免疫沈降（ChIP）アッセイ、マイクロアレイ研究、およびRNA-seqを含む技術に使用することができます。
Protocol
Representative Results
Discussion
このプロトコルは、初期ディスパーゼIIの処理工程に基づいてマウス胎児顔面外胚葉と間充織を分離するための簡単な方法を提供します。以前の研究で、我々はディスパーゼIIの治療の前に顔のプロミネンスの解剖を行ったが、我々は一貫して間充織は "スティッキー"と操作することがより困難になることを発見した。私たちの新しいプロトコルは、この問題を回避できます。ピ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、胚の図1におけるヘッドやヘルプや議論のための研究室の他のメンバーを説明するためのアイリーン·チョイに感謝したいと思います。この作品は、NIHの助成金DE012728（TW）でサポートされています
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments | Dispase II (neutral protease, grade II) | Roche | 4942078001 | Make 10 mg/ml Dispase II stock solution in HBS. Aliquot and store at -20 °C . | RNAlater | Ambion | AM7021 |
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