Определение Rapid высокую пропускную способность Амилоза в сублимированного образцов клубней картофеля
Summary
Этот протокол описывает высокая через положить колориметрическим методом, который опирается на формирование комплекса между йодом и цепей молекул глюкозы в крахмал. Йод образует комплексы с обеих амилозы и длинных цепей внутри амилопектина. После добавления йода в образце крахмала, максимальное поглощение амилозы и амилопектина происходит при 620 и 550 нм, соответственно. Соотношение амилозы / амилопектина можно оценить из соотношения значений абсорбции нм 620 и 550 и их сравнения со стандартной кривой, при которых определенные известные концентрации показаны в зависимости от значений поглощения. Такая высокая пропускная способность, недорогой метод является надежным и воспроизводимым, позволяя оценку крупных популяций клонов картофеля.
Abstract
Этот протокол описывает высокая через положить колориметрическим методом, который опирается на формирование комплекса между йодом и цепей молекул глюкозы в крахмал. Йод образует комплексы с обеих амилозы и длинных цепей внутри амилопектина. После добавления йода в образце крахмала, максимальное поглощение амилозы и амилопектина происходит при 620 и 550 нм, соответственно. Соотношение амилозы / амилопектина можно оценить из соотношения значений абсорбции нм 620 и 550 и их сравнения со стандартной кривой, при которых определенные известные концентрации показаны в зависимости от значений поглощения. Такая высокая пропускная способность, недорогой метод является надежным и воспроизводимым, позволяя оценку крупных популяций клонов картофеля.
Introduction
Приблизительно 80% свежего веса клубней картофеля является вода, почти все из оставшегося сухого вещества составляет крахмал 1. Большинство из крахмала (70%) состоит из амилопектина, а остаток амилозы. Соотношение между амилозы и амилопектина является наиболее важным свойством влияния на физические свойства крахмала. Амилоза представляет собой линейный альфа 1-4 цепь глюкозы, а амилопектин представляет собой линейный альфа 1-4 цепь с альфа 1-6 ветвей 2. Методы, такие как йод связывания, дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC), размер высокая производительность эксклюзионной хроматографии (HPSEC) и взаимодействия конканавалином были разработаны для определения крахмала в различных видов культур 3,4. Каждый протокол требует специальных навыков и оборудования, что делает его трудно расширить количественно многочисленные образцы одновременно. Метод, который мы приводим здесь представляет собой модифицированный протокол от Hovenkamp-Hermelink др.. 5, которая является двойной йода волны связыванияМетод, основанный на окрашенных гранул крахмала. Преимущества этого метода по сравнению с другими включать определение амилозы от исходного крахмала без его очистки и использование системы двойной длины волны, чтобы увеличить точность метода 4,6.
Protocol
Representative Results
Discussion
Содержание амилозы в клубней картофеля обычно составляет от 20-35% 7,8. Если большинство значения вне этого диапазона, рассмотреть эти возможные ошибки: 1) необработанные данные были использованы вместо отображаться данные для построения калибровочной кривой амилозы / амилопектина,…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Финансирование для этого исследования была предоставлена частично научный сотрудник программы USDA-ARS и Комитета Растениеводство зародышевой плазмы USDA.
Materials
| Reagents | |||
| Amylose | Sigma | 859656 | |
| Amylopectin | Sigma | A8515 | |
| Perchloric Acid 60% | Sigma | 311413 | Very hazardous to skin and eyes |
| Iodine | Sigma | 23214TD | |
| Potassium iodide | Sigma | 08625JE | |
| Equipment | |||
| Plate Reader | Bio Tek | ELx800 |
References
- Composition Hoover, R. molecular structure, and physicochemical properties of tuber and root starches: a review. Carbohydr. 45 (3), 253-267 (2001).
- Bertoft, E., Blennow, A. Structure of Potato Starch. Advances in Potato Chemistry and Technology. , 83-98 (2009).
- Campbell, M. R., Yeager, H., Abdubek, N., Pollak, L., Glover, D. Comparison of methods for amylose screening in maize starches from exotic backgrounds. Cereal Chem. 79, 317-321 (2002).
- Zhu, T., Jackson, D. S., Wehling, R. L., Geera, B. Comparison of amylose determination methods and the development of a dual wavelength iodine binding technique. Cereal Chem. 85, 51-58 (2008).
- Hovenkamp-Hermelink, J., Devries, J., Adamse, P., Jacobsen, E., Witholt, B., Feenstra, W. Rapid estimation of the amylose amylopectin ratio in small amounts of tuber and leaf tissue of the potato. Potato Res. 31, 241-246 (1988).
- Shannon, J. C., Garwood, D. L., Boyer, C. D. Genetics and Physiology of Starch Development. Starch. , 23-82 (2009).
- Haase, N. U., Plate, J. Properties of potato starch in relation to varieties and environmental factors. Stärke. 48 (5), 167-171 (1996).
- Johnston, F. B., Urbas, B., Khanzada, G. Effect of storage on the size distribution and amylose/amylopectin ratio in potato starch granules. Am. Pot. J. 45, 315-321 (1968).
- Gibson, T. S., Solah, V. A., McCleary, B. V. A procedure to measure amylose in cereal starches and flours with concanavalin A. J. Cereal Sci. 25 (2), 111-119 (1997).
- Sun, S., Matheson, N., Yun, S. -. H. Estimation of amylose content of starches after precipitation of amylopectin by concanavalin A. Starch. 42, 302-305 (1990).
