Rapides à haut débit amylose Détermination dans lyophilisé échantillons de pommes de terre de tubercules
Summary
Ce protocole décrit un procédé colorimétrique haut à travers mettre qui repose sur la formation d'un complexe entre l'iode et les chaînes de molécules de glucose de l'amidon. Iode forme des complexes avec les deux amylose et l'amylopectine dans de longues chaînes. Après l'addition d'iode à un échantillon d'amidon, l'absorption maximale de l'amylose et de l'amylopectine se produit à 620 et 550 nm, respectivement. Le ratio amylose / amylopectine peut être estimé à partir du rapport des valeurs d'absorbance 620 nm et 550 et en les comparant à une courbe standard dans laquelle les concentrations connues spécifiques sont tracées en fonction des valeurs d'absorption. Ce débit élevé, méthode peu coûteuse est fiable et reproductible, permettant l'évaluation des grandes populations de clones de pommes de terre.
Abstract
Ce protocole décrit un procédé colorimétrique haut à travers mettre qui repose sur la formation d'un complexe entre l'iode et les chaînes de molécules de glucose de l'amidon. Iode forme des complexes avec les deux amylose et l'amylopectine dans de longues chaînes. Après l'addition d'iode à un échantillon d'amidon, l'absorption maximale de l'amylose et de l'amylopectine se produit à 620 et 550 nm, respectivement. Le ratio amylose / amylopectine peut être estimé à partir du rapport des valeurs d'absorbance 620 nm et 550 et en les comparant à une courbe standard dans laquelle les concentrations connues spécifiques sont tracées en fonction des valeurs d'absorption. Ce débit élevé, méthode peu coûteuse est fiable et reproductible, permettant l'évaluation des grandes populations de clones de pommes de terre.
Introduction
Environ 80% du poids frais d'un tubercule de pomme de terre est de l'eau; la quasi-totalité de la matière sèche restante est l'amidon 1. La plupart de l'amidon (70%) est composé d'amylopectine, tandis que le reste est de l'amylose. Le rapport entre l'amylose et l'amylopectine est la propriété la plus importante influence sur les propriétés physiques de l'amidon. L'amylose est un alpha 1-4 chaîne linéaire de glucose, tandis que l'amylopectine est un linéaire alpha 1-4 chaîne alpha 1-6 branches 2. Des méthodes telles que la liaison de l'iode, calorimétrie différentielle à balayage (DSC), la Chromatographie d'exclusion stérique haute performance (HPSEC) et les interactions de la concanavaline A a été développée pour la détermination de l'amidon de différentes espèces de plantes cultivées 3,4. Chaque protocole exige des compétences et des équipements spéciaux, ce qui rend difficile à l'échelle à quantifier de nombreux échantillons à la fois. La méthode que nous présentons ici est un protocole modifié à partir de Hovenkamp-Hermelink et al. 5, qui est une longueur d'onde double liaison de l'iodeméthode basée sur les granules d'amidon colorés. Les avantages de ce procédé par rapport à d'autres comprennent la détermination de la teneur en amylose de l'amidon brut sans le purifier et l'utilisation du système à double longueur d'onde pour augmenter la précision de la méthode 4,6.
Protocol
Representative Results
Discussion
La teneur en amylose dans les tubercules de pomme de terre est généralement comprise entre 20-35% 7,8. Si la plupart des valeurs sont en dehors de cette gamme, tenir compte de ces erreurs possibles: 1) les données brutes ont été utilisés à la place des données masquées pour la construction de la courbe standard amylose / amylopectine; 2) les données brutes ont été utilisés à la place des données masquées pour la détermination de la teneur en amylose ratios / amylopectine à partir des échant…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Le financement de cette recherche a été assuré en partie par le Comité des cultures de matériel génétique USDA programme et associé de recherche de l'USDA-ARS.
Materials
| Reagents | |||
| Amylose | Sigma | 859656 | |
| Amylopectin | Sigma | A8515 | |
| Perchloric Acid 60% | Sigma | 311413 | Very hazardous to skin and eyes |
| Iodine | Sigma | 23214TD | |
| Potassium iodide | Sigma | 08625JE | |
| Equipment | |||
| Plate Reader | Bio Tek | ELx800 |
References
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