快速高通量直链淀粉测定冻干马铃薯块茎样品
Summary
这个协议描述了通过一个依赖于碘和葡萄糖分子中淀粉的链之间的复合物的形成放比色法高。碘形成络合物与两个直链淀粉和支链淀粉中长链。加入碘的淀粉样品后，直链淀粉和支链淀粉的最大吸收出现在620和550nm处分别。直链淀粉/支链淀粉比例可以从620和550 nm处的吸光度值之比来估计并比较它们的标准曲线，其中特定的已知浓度作图的吸收值。这种高通量，廉价的方法可靠，重复性好，让土豆克隆的大量人口的评价。
Abstract
这个协议描述了通过一个依赖于碘和葡萄糖分子中淀粉的链之间的复合物的形成放比色法高。碘形成络合物与两个直链淀粉和支链淀粉中长链。加入碘的淀粉样品后，直链淀粉和支链淀粉的最大吸收出现在620和550nm处分别。直链淀粉/支链淀粉比例可以从620和550 nm处的吸光度值之比来估计并比较它们的标准曲线，其中特定的已知浓度作图的吸收值。这种高通量，廉价的方法可靠，重复性好，让土豆克隆的大量人口的评价。
Introduction
约80％的马铃薯块茎鲜重的是水，几乎所有的剩余的干物质是淀粉1。大多数淀粉（70％）的组成的支链淀粉，而其余部分是直链淀粉。直链淀粉和支链淀粉的比例是影响淀粉的物理性能的最重要的属性。直链淀粉是直链α1-4葡萄糖链，而支链淀粉是直链α1-4链与α1-6分支2。方法如碘结合，差示扫描量热法（DSC），高效体积排阻色谱法（HPSEC）和刀豆蛋白A相互作用已经制定了在不同的作物种类3,4淀粉的决心。每个协议需要特殊的技能和装备，使其难以扩大量化各种样品的时间。我们在这里介绍的方法是从Hovenkamp-Hermelink 等人的 5修饰的协议，它是一种双波长碘结合方法基于染色淀粉粒。该方法的相对其他的优点，包括从生淀粉的直链淀粉测定无需纯化和使用的双波长系统中，以增加该方法4,6的精度。
Protocol
Representative Results
Discussion
马铃薯块茎中直链淀粉含量一般为20-35％7,8。如果大部分值超出了这个范围，考虑这些可能的错误：1）原始数据被用来代替空白数据的直链淀粉/支链淀粉标准曲线的建设; 2）原始数据被用来代替空白数据的直链淀粉的测定/支链淀粉比例从马铃薯样品，或3）用于分析水不够纯净。我们注意到，通过使用蒸馏水和不超纯水在分析中，所获得的值分别为不可再现的。一个简单的方法来验证碘?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
由美国农业部研究员计划和美国农业部作物种质资源委员会部分提供了资助这项研究。
Materials
| Reagents | |||
| Amylose | Sigma | 859656 | |
| Amylopectin | Sigma | A8515 | |
| Perchloric Acid 60% | Sigma | 311413 | Very hazardous to skin and eyes |
| Iodine | Sigma | 23214TD | |
| Potassium iodide | Sigma | 08625JE | |
| Equipment | |||
| Plate Reader | Bio Tek | ELx800 |
References
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