细胞物质相互作用研究微细的纳米多孔金模式
Summary
我们报告的微细纳米多孔金薄膜，通过模版印刷，光刻法，以及培养细胞的微细加工图案的方法的技术。此外，我们描述的图像分析方法来表征形态的物质和培养的细胞，使用扫描电子显微镜和荧光显微镜技术。
Abstract
在几十纳米特征尺寸的纳米材料，增强了多种技术，包括燃料电池，生物传感器，生物医学设备涂料，药物输送工具的性能。纳米多孔金（NP-金），纳米尺度的自组装过程中所产生的，是一种相对较新的材料，具有大的有效表面积，高导电性，催化活性。这些特性NP-坳科学界的一个有吸引力的材料。 NP-金的大部分研究采用宏观尺度的标本，并侧重于基础科学的物质和其催化和传感器应用。宏观尺度的标本限制NP-金的潜力，在小型化的系统，包括生物医学设备。为了解决这些问题，我们初步描述了两种不同的方法在刚性基板上的微细NP-金薄膜。第一种方法是采用手工制作的模板创建毫米级NP-金模式的whIL口罩e的第二种方法是使用剥离光刻图案亚毫米级图案。作为NP金薄膜溅射沉积过程中获得的，它们与传统的微细加工技术，从而适合轻便整合成微兼容。这些系统包括电寻址的生物传感器平台，受益于高的有效表面积，导电性，和的金硫醇类表面生物耦合。我们描述了细胞培养，免疫组化技术和图像处理技术到量化NP-互惠与哺乳动物细胞中，这是一个重要的性能参数对某些生物传感器的交互。我们这里演示的技术将协助整合平台，各种长度尺度和众多的应用，包括生物传感器，储能系统和催化剂的NP-金。
Introduction
<p class="jove_content">材料的纳米尺度特征表明承诺在提高各种应用，包括燃料电池<sup> 1</sup>，传感器<sup> 2,3</sup>，和生物医学设备<sup> 4,5</sup>。一个相对较新的材料是纳米多孔金性（np-Au）的，它是由纳米尺度的自组装过程。 NP-互惠的前体是最常见的由以原子百分比计为60％至80％的银金合金。简单地说，开孔纳米结构特征是在集群中的金原子的重排的结果，银溶于强酸（<em>如</em>硝酸70％）的电化学电势或根据<sup> 6-8</sup>。 Np的金从几个理想的属性，包括大的有效表面积，高导电性，完善的表面官能化的技术，和生物相容性的好处<sup> 9</sup>。即使出现了快速扩张研究NP金，其中大部分集中于NP-金的机械性能<sup> 10,11</sup>，催化活性;<sup> 12</sup>，和生物分子传感性能<sup> 13-15</sup>。虽然理想的属性数的生物医学工具是非常有用的<sup> 16,17</sup>，在这方面的应用受到了限制。这种情况的一个可能的原因是，大多数的研究主要用于宏观尺度试样（<em>如</em>片材，金属箔，锭），将在小型化的系统中的NP-互惠的技术仍然不够。事实上，也有只有极少数的例子，使用传统的微细加工技术，采用NP-Au膜<sup> 16-20</sup>。随着小型化技术和新的生物医学工具的需要，它已成为关键的是能够集成到设备中的新材料。通常，这要求该材料可以与传统的微细加工技术，淀积和构图。此外，快速量化细胞材料的相互作用通常是要评估的一种新材料的生物相容性。本文的目的是要证明微细NP-Au膜的基本技术和量化纳米结构和细胞物质的相互作用，通过数字图像处理。</p
Protocol
1。制备纳米多孔金 Piranha溶液清洁基板 25毫升的过氧化氢（30％）加入到100毫升的硫酸（96％）的结晶皿和加热混合物至65℃的加热板上对。注意：液体是腐蚀性极强，必须小心处理。将使用了的溶液不应该被存储在一个密封的容器，因为它可能会引起爆炸。 放置1英寸×3英寸的显微镜载物片到该混合物中，用耐酸钳10分钟，并清除它们。 ，使用瓷免疫船小批量清洗盖玻片。治?…
Representative Results
图1概括了主要的程序步骤，包括创建NP-金模式，培养细胞，量化的纳米结构，细胞形态特征。 图2a中所示的弹性体的模具中（顶部）用于创建下面的图像中所示的np-互惠型态， 图2b是一个照片进行批量处理样品的瓷舟。 图2c显示所沉积的金属图案的颜色变化前后去合金。银色的完成（之前去合金）由于富银合金含量。膜去合金后，获得一个明显…
Discussion
我们表现出两种不同的技术来扩大使用这些薄膜微系统和生物研究微细NP-Au膜。溅射镀膜的金及银是一种多用途的方法来创建NP-互惠模式，溅射是与传统的微细加工工艺和合金的组成和厚度可以很容易地通过改变个别溅射枪功率控制（适用于黄金和银子目标）和兼容沉积时间。典型的NP-Au膜的厚度从200纳米到2微米的范围内。允许创建毫米尺度格局，规避光刻法需要使用活检冲头和手术刀的模?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
支持加州大学实验室费用研究发展计划奖12-LR-237197，O.库里图鲁斯D. Dimlioglu。 P. Daggumati是支持大学的加州Davis Research的投资在科学与工程（RISE）奖。支持CA查普曼系国家需要奖学金研究生教育援助领域。这项工作是支持由UC实验室费用研究发展计划，加州大学戴维斯分校的上升，和加州大学戴维斯分校工程的启动资金。
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Gold target | Lesker | EJTAUXX403A2 | Precursor to alloy for producing np-Au |
| Chrome target | Lesker | EJTCRXX353A2 | Adhesive layer |
| Silver target | Lesker | EJTAGXX403A2 | Precursor to alloy for producing np-Au |
| Porcelain boat | Thomas Scientific | 8542E40 | Used for processing small samples |
| Nitric acid | Sigma-Aldrich | 43873 | Used at 70% for dealloying |
| Sulfuric acid | J.T Baker | 7664-93-9 | Used at 96% for piranha cleaning |
| Hydrogen peroxide | J.T Baker | 7722-84-1 | Used at 30% for piranha cleaning |
| Biopsy punches | Ted Pella | 150xx | Available in several sizes |
| Silicone elastomer sheets | Rogers Corporation | HT 6240 | Available in several thicknesses |
| Hexamethyldisilazane | Sigma-Aldrich | 440191-100ML | Used as adhesion promoter for positive resist |
| Microposit MF CD26 | Shipley | 38490 | Positive photoresist developer |
| PRS 3000 | J.T Baker | JT6403-5 | Positive photoresist stripper |
| Circular glass coverslips (12 mm) | Ted Pella | 26023 | Used as substrate for metal patterns and cell culture |
| Glass slides (1 x 3 inch) | Ted Pella | 26007 | Used as substrate for metal patterns |
| Kapton polyimide tape | VWR | 82030-950 | Used for securing elastomer |
| Transparency masks | Output City | Used in photolithography http://www.outputcity.com/ | |
| Plasma cleaner | Harrick Plasma | PDC-32G | Used for activating glass surfaces |
| Sputtering machine | Kurt J. Lesker | LAB18 | Used for depositing metals |
References
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Cite This Article
Daggumati, P., Kurtulus, O., Chapman, C. A. R., Dimlioglu, D., Seker, E. Microfabrication of Nanoporous Gold Patterns for Cell-material Interaction Studies. J. Vis. Exp. (77), e50678, doi:10.3791/50678 (2013).