Mikrofabrikation af Nanoporøse Gold Patterns for Celle-materiale interaktion Studies

Summary

Vi rapporterer om teknikker til at micropattern nanoporøse guld tynd film via stencil trykning og fotolitografi, samt metoder til kultur celler på microfabricated mønstre. Herudover beskriver vi billed analysemetoder at karakterisere morfologi af materialet og de dyrkede celler ved hjælp af scanning elektron og fluorescensmikroskopi teknikker.

Abstract

Nanostrukturerede materialer med funktionen størrelser i snesevis af nanometer har forbedret ydeevne af flere teknologier, herunder brændselsceller, biosensorer, biomedicinske enhed belægninger, og drug delivery værktøjer. Nanoporous guld (NP-Au), produceret af en nano-skala selvsamling proces er et relativt nyt materiale, der udviser stort effektiv overflade høj elektrisk ledningsevne og katalytisk aktivitet. Disse egenskaber har gjort NP-Au et attraktivt materiale til videnskabelige samfund. De fleste undersøgelser af np-Au ansætte makro-skala prøver og fokusere på grundlæggende videnskab af materialet og dets katalytiske og sensor applikationer. De makro-skala prøver begrænser np-Au potentiale i miniaturiserede systemer, herunder biomedicinsk udstyr. For at løse disse problemer, vi i første omgang beskriver to forskellige metoder til micropattern NP-Au tynde film på stive underlag. Den første metode anvender manuelt producerede stencil masker til at skabe millimeter skala NP-Au mønstre, while den anden metode bruger lift-off fotolitografisk til mønster sub-millimeter-skala mønstre. Som NP-Au tynde film opnås ved sputter-belægning proces, de er forenelige med konventionelle microfabrication teknikker, derved gøres til genstand for facile integration i mikrosystemer. Disse systemer omfatter elektrisk adresserbare biosensor platforme, nyder godt af høje effektive overfladeareal, elektrisk ledningsevne, og guld-thiol-baseret overflade bioconjugation. Vi beskriver cellekultur, immunfarvning, og billedbehandling teknikker til at kvantificere NP-Au samspil med pattedyrceller, hvilket er en vigtig ydeevneparameter for nogle biosensorer. Vi forventer, at de teknikker, illustreret her, vil lette integrationen af ​​np-Au i platforme på forskellige længde-skalaer og i en lang række applikationer, herunder biosensorer, energi lagersystemer, og katalysatorer.

Introduction

<p class="jove_content"> Materialer med nano-skala funktioner har vist lovende i styrkelsen forskellige applikationer, herunder brændselsceller¹, Sensorer^2,3 Og biomedicinsk udstyr^4,5. Et forholdsvis nyt materiale er nanoporøse guld (NP-Au), som er produceret af en nano-skala selvsamling proces. Forløberen til NP-Au er en guldlegering som oftest består af sølv på 60% til 80% af atomprocentdelen. Kort fortalt karakteristiske open-pore nanostruktur er resultatet af omlejringen af ​​guld atomer i klynger som sølv opløses af en stærk syre (<em> Fx</em> Salpetersyre 70%) eller i henhold til en elektrokemisk potentiale^6-8. NP-Au fordele fra flere ønskelige egenskaber, herunder store effektive areal, høj elektrisk ledningsevne, veletablerede overflade funktionalisering teknikker og biokompatibilitet⁹. Selvom der har været en hurtig udvidelse af undersøgelser af np-Au, de fleste af dem fokuserer på NP-Au mekaniske egenskaber^10,11, Katalytisk aktivitet¹², Og biomolekylaer sensing ydeevne^13-15. Mens de ønskelige egenskaber er meget nyttige til adskillige biomedicinske værktøjer^16,17, Har programmerne i dette område været begrænset. En mulig årsag til dette er, at de fleste undersøgelser har overvejende anvendte makro-skala enheder (<em> Fx</em> Ark, folier og barrer) samt teknikker til at indarbejde np-Au i miniaturiserede systemer har været utilstrækkelige. I virkeligheden er der kun en håndfuld eksempler ved hjælp af konventionelle microfabrication teknikker, der beskæftiger NP-Au-film^16-20. Med fremkomsten af ​​miniaturisering teknologi og behovet for nye biomedicinske værktøjer, er det blevet afgørende at være i stand til at integrere nye materialer i enheder. Det kræver typisk, at materialerne kan deponeres og mønstret med konventionelle microfabrication teknikker. Desuden er hurtig kvantificering af celle-materiale interaktioner almindeligvis nødvendigt at evaluere biokompatibilitet af et nyt materiale. Målet med dette oplæg er at demonstrere grundlæggende teknikker til micropattern NP-Au-film og kvantificere både nanostruktur og celle-materiale interaktion via digital billedbehandling.</p

Protocol

1.. Nanoporous Gold Fabrication Rene substrater i Piranha-løsning Der tilsættes 25 ml hydrogenperoxid (30%) til 100 ml svovlsyre (96%) i en krystallisering skål og blandingen opvarmes til 65 ° C på en varmeplade. ADVARSEL: Væskerne er ekstremt ætsende og skal håndteres med omhu. Den brugte opløsning bør ikke opbevares i en forseglet beholder, da de kan eksplodere. Sted 1-tommer med 3-tommer mikroskopobjektglas i blandingen ved hjælp af syre-resistente tænger og rense dem i 10 mi…

Representative Results

Figur 1 skitserer de vigtigste proceduremæssige skridt, herunder oprettelse af NP-Au mønstre, dyrkning af celler, kvantificere nanostrukturen, og karakterisere celle morfologier. Elastomeren stencil er vist i figur 2a (øverst) bruges til at oprette NP-Au mønstre, der vises i billederne nedenunder. Figur 2b er et fotografi af porcelæn båd til batchbehandling prøver. Figur 2c viser farveændring af de deponerede metal mønstre før og efter dealloy…

Discussion

Vi viser to forskellige teknikker til micropattern NP-Au film til at udvide anvendelsen af ​​disse film i mikrosystemer og biologiske undersøgelser. Katodeforstøvningscoatingsproces guld og sølv er en alsidig metode til at skabe NP-Au mønstre, som katodeforstøvning er forenelig med konventionelle microfabrication processer og legeringen sammensætning og tykkelse kan let kontrolleres ved at variere de enkelte sputtering pistol beføjelser (for guld og sølv mål) og deposition tid hhv. Typiske np-Au filmtykkels…

Materials

Name of Reagent/Material	Company	Catalog Number	Comments
Gold target	Lesker	EJTAUXX403A2	Precursor to alloy for producing np-Au
Chrome target	Lesker	EJTCRXX353A2	Adhesive layer
Silver target	Lesker	EJTAGXX403A2	Precursor to alloy for producing np-Au
Porcelain boat	Thomas Scientific	8542E40	Used for processing small samples
Nitric acid	Sigma-Aldrich	43873	Used at 70% for dealloying
Sulfuric acid	J.T Baker	7664-93-9	Used at 96% for piranha cleaning
Hydrogen peroxide	J.T Baker	7722-84-1	Used at 30% for piranha cleaning
Biopsy punches	Ted Pella	150xx	Available in several sizes
Silicone elastomer sheets	Rogers Corporation	HT 6240	Available in several thicknesses
Hexamethyldisilazane	Sigma-Aldrich	440191-100ML	Used as adhesion promoter for positive resist
Microposit MF CD26	Shipley	38490	Positive photoresist developer
PRS 3000	J.T Baker	JT6403-5	Positive photoresist stripper
Circular glass coverslips (12 mm)	Ted Pella	26023	Used as substrate for metal patterns and cell culture
Glass slides (1 x 3 inch)	Ted Pella	26007	Used as substrate for metal patterns
Kapton polyimide tape	VWR	82030-950	Used for securing elastomer
Transparency masks	Output City		Used in photolithography http://www.outputcity.com/
Plasma cleaner	Harrick Plasma	PDC-32G	Used for activating glass surfaces
Sputtering machine	Kurt J. Lesker	LAB18	Used for depositing metals