Trykk myography brukes til å vurdere vasoactivity av små arterier som utvikler vedvarende innsnevring når trykk. Dette manuskriptet gir en detaljert protokoll for å vurdere i isolerte segmenter av små mesenteriske arterier fra rotte, vasoactivity og effekten av intraluminal press på vaskulær diameter.
Liten motstand arterier seg sammen og utvider seg henholdsvis i respons til økt eller redusert intraluminale trykk; Dette fenomen kjent som myogenisk reaksjon er en viktig regulator for lokal blodstrøm. I isobariske betingelser liten motstand arterier utvikler vedvarende innsnevring kjent som myogenisk tone (MT), som er en viktig determinant for systemisk vaskulær resistens (SVR). Derfor ex vivo trykk preparater av små motstandsarterier er viktige verktøy for å studere mikrovaskulær funksjon i nær-fysiologiske tilstander. For å oppnå dette, er en nylig isolert intakt segment av en liten motstand arterie (diameter ~ 260 mikrometer) som er montert på to små glass kanyler og trykk. Disse arterielle forberedelser beholde mest in vivo egenskaper og tillatelse vurdering av vaskulær tone i sanntid. Her gir vi en detaljert protokoll for vurdering vasoactivity i trykk små motstand tarmens arterier fra rotter; disse arteriene utviklervedvarende vasokonstriksjon – ca 25% av maksimal diameter – når trykksatt til 70 mmHg. Disse arterielle preparater kan anvendes for å studere effekten av investigational forbindelser på forholdet mellom intra-arterielt trykk og vasoactivity og bestemme endringer i mikrovaskulær funksjon i dyremodeller av ulike sykdommer.
Liten motstand arterier er viktige determinanter av SVR og spiller en viktig rolle i patofysiologien av mange sykdommer 1,2. Tilstander som diabetes 3, graviditet 4, ischemi-reperfusjon 5, fedme og høyt blodtrykk 6,7 er ofte assosiert med endret mikrovaskulær funksjon. Vaskulær myography kan ikke bare gi viktig innsikt i endringer i mikrovaskulær funksjon i ulike sykdommer, men også bidra til å identifisere terapeutiske mål og evaluere effekten av vasoaktive forbindelser. Vaskulær funksjon har blitt undersøkt ved hjelp av isolerte små arterier henhold isometriske eller isobariske fartøyet forhold åtte. Detaljert beskrivelse av isometrisk myography er gitt andre steder ni. Men det er forskjeller i data innhentet fra isometrisk versus isobariske forberedelser 10-12. Siden trykk arterielle preparater tillater studiet av mikrovaskulær funksjon i nær fysiologiske forhold,innhentet funn kan korrelere bedre med in vivo oppførselen til karseng 8,13.
I 1902 Bayliss først beskrevet effekten av transmural press på vaskulær diameter 14. Han observerte i liten motstand arterier fra forskjellige vaskulære sjikt av kaniner, katter og hunder som en reduksjon i trykk ble etterfulgt av vasodilatasjon, og en økning i trykket ble etterfulgt av vasokonstriksjon. Dette fenomenet er kjent som myogenic respons. Bayliss og påfølgende etterforskere observert at i isobariske forholdene liten motstand arterier utvikle vedvarende innsnevring kjent som MT 15,16. Både myogenisk respons og MT kan vurderes ved hjelp av trykk myography (PM) teknikk. PM er først og fremst brukes til å bestemme vasoactivity av små arterier, vener og andre fartøy. I tillegg til å vurdere effekten av vasoaktive forbindelser på vaskulær diameter, PM – som navnet indikerer – brukes for å vurdere intravaskulære trykk-mediert changes på vaskulær diameter. I løpet av de siste tiårene fremskritt innen programvare, som forbedret videomikroskopi og glass pipette trekke, har gjort PM lettere å utføre. Men disseksjon av levedyktige intakte segmenter av små blodkar forblir kjedelig og noen ganger utfordrende. Her vil vi skissere en detaljert protokoll for å studere myogenic respons i små mesenteriske motstand arterier isolert fra rotter.
Kritisk trinn, feilsøking og modifikasjoner
I et typisk fartøy isobar preparatet, blir arterien under trykk ved 70 mm Hg mellom to glass kanyler perfundert med varm (37 ° C) PSS. Etter 30-45 min, arterier utvikle MT, karakterisert ved spontan reduksjon i diameter som stabiliserer i 20-30 min. Motstands arterier fra ulike vaskulære senger utvikle variabel MT. For eksempel rotte motstand tarmens arterier utvikle MT ~ 25% av PD, mens cremastric arterier kan oppnå MT ~ 40% av PD. Arterier som …
The authors have nothing to disclose.
Sandeep Khurana er støttet av NIH (K08DKO81479). Vikrant Rachakonda er støttet av (T32DK067872).
Chemical | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Acetylcholine | Sigma Aldrich | A6625 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Calcium chloride (CaCl2) | Sigma Aldrich | 223506 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
D-(+)-Glucose | Sigma Aldrich | G5767 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N’,N’-tetra acetic acid (EGTA) | Sigma Aldrich | E3889 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA) | Sigma Aldrich | E9884 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
HEPES | Sigma Aldrich | H3784 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Magnesium sulfate (MgSO4) | Sigma Aldrich | M7506 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
MOPS | Sigma Aldrich | M5162 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Phenylephrine | Sigma Aldrich | P6126 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Potassium chloride (KCl) | Sigma Aldrich | P3911 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Potassium phosphate (KH2PO4) | Sigma Aldrich | P5655 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium bicarbonate (NaHCO3 ) | Sigma Aldrich | S6014 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium chloride (NaCl) | Sigma Aldrich | S7653 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium hydroxide (NaOH) | Sigma Aldrich | S5881 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium nitroprusside | Sigma Aldrich | 13451 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4) | Sigma Aldrich | S9638 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sodium pyruvate | Sigma Aldrich | P8574 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Table 1. | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Table 2. Composition of Experimetnal solutions | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Equipment | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
CCD Monochrome Camera | The imaging Source | DMK 21AU04 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Single inline solution heater | Warner Instruments | 64-0102 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Thermistor | Warner Instruments | 64-0108 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Dual automatic temperature controller | Warner Instruments | TC-344B | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Flaming/Brown micropipette puller | Sutter Instruments | P-97 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Fluorescence System Interface | IonOptix | model FSI-700 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Forceps and scissors | World Precision Instruments | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ion Wizard-Core and Analysis | IonOptix | Ion Wizard 6.0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Laboratory tubing | Silastic | 508-005 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Male Sprague Dawley rat | Harlan Laboratories | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Master flex console drive | Cole-parmer | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Milli-Q Plus Ultrapure Water System | Millipore | ZD5211584 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ophthalmic monofilament nylon suture | Ethicon | 9007G | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Photometry and Dimensioning Microscope | Motic | AE31 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer | Living Systems Instrumentation | PS-200 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Stereomicroscope | Nikon Instruments Inc | SMZ660 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Vessel Chamber | Living Systems Instrumentation | CH-1 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Dissection dish | Living Systems Instrumentation | DD-90-S | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Thin Wall Glass Capillaries | World Precision Instruments | TW120-6 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Microforge | Stoelting | 51550 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Table 3. |