Milk Collection Metoder for Mus og Reeves 'muntjak Deer

Summary

Milk collection from animal models facilitates various research avenues: understanding passive immunity, identifying pathogens responsible for vertical transmission and, through the use of transgenic mice, even commercial production of proteins found in human breast milk. Here we illustrate a simple method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer.

Abstract

Animal models are commonly used throughout research laboratories to accomplish what would normally be considered impractical in a pathogen’s native host. Milk collection from animals allows scientists the opportunity to study many aspects of reproduction including vertical transmission, passive immunity, mammary gland biology, and lactation. Obtaining adequate volumes of milk for these studies is a challenging task, especially from small animal models. Here we illustrate an inexpensive and facile method for milk collection in mice and Reeves’ muntjac deer that does not require specialized equipment or extensive training. This particular method requires two researchers: one to express the milk and to stabilize the animal, and one to collect the milk in an appropriate container from either a Muntjac or mouse model. The mouse model also requires the use of a P-200 pipetman and corresponding pipette tips. While this method is low cost and relatively easy to perform, researchers should be advised that anesthetizing the animal is required for optimal milk collection.

Introduction

Dyremodeller gi innsikt i sykdoms patologi som ikke kan oppnås ved in vitro-analyse. For å gi den mest effektive resultater, er det viktig å bruke en dyremodell som er nært knyttet til sykdommen og arter av interesse. For eksempel, den Reeves 'muntjac (Muntiacus reevesi), en liten asiatisk hjort ^1,2, og transgene mus som uttrykker cervid prion protein (CerTgPrP) ³ er nyttige dyremodeller for cervid arter. Begge artene er polyestrous, slik året rundt avl, og derfor en konsekvent kilde for svangerskapsrelaterte vev og væske for å studere spesifikke mekanismer i cervid biologi. Studier av melk har et stort utvalg av programmer som er enklere (og billig) oppnådd i dyremodeller enn hos mennesker. Forskere kan undersøke melk og råmelk som en potensiell kilde til en) overføring av smittsomme sykdommer, 2) immunglobuliner overføres fra mor til avkom i utvikledepment av passiv immunitet ⁴ og 3) laktoferrin, et protein som finnes i morsmelk involvert i passiv immunitet at forskere er for tiden forsøker å kommersielt produsere ^fem.

Samle en vesentlig mengde av melk fra små dyr kan vise seg å være en vanskelig oppgave. Rogers foreslått en metode for å samle melk fra rotter ^6, som deretter ble benyttet i mus. DePeters og Hovey foreslått to fremgangsmåter for melk samling, en ved hjelp av en manuelt generert vakuum produsert av en gummi pipette lyskilde er festet til en Pasteur pipette, og en andre som krever bygging av en melkeenhet, som så blir festet til en vakuumkilde (f.eks som en kran) for å høste mus melk ^7. Her foreslår vi en enkel, rimelig metode for å samle melk fra både mus og Reeves 'muntjac hjort, noe som krever kun lett tilgjengelig laboratorieutstyr og grunnleggende tekniske ferdigheter. Vår metode gir tilstrekkelige volumer av melk for ulikeapplikasjoner.

Protocol

En. Mouse Melking Protocol Metodene som beskrives i denne protokollen ble godkjent av IACUC. En. Separering av Dam fra Avkom Velg demningen for å bli melket. Velg en demning med et kull på 4 eller flere valper som er 8-12 dager etter fødsel for å gi maksimal melk samling-selv om samlingen er mulig til enhver tid punkt innlegget fødsel opp til 21 dager. Separer demningen fra hennes kull minst to timer før melking. Merk: Dersom en øn…

Representative Results

Mus Fra våre forsøk har vi fastslått at det er mulig å samle omtrent 100-400 pl av melk fra en laboratoriemus, avhengig av flere variable. Disse variablene inkluderer 1) hvor mye tid avsatt til samling, 2) dosen av oxytocin administreres, 3) hvor mange valper demningen er for tiden sykepleie og 4) hvor lenge innlegget fødsel. Våre undersøkelser har vist at den høyeste utbytte oppnås når dammene er skilt fra deres avkom i minst 2 timer, og i minst 45 minutter til en…

Discussion

Mus

Det er flere faktorer å ta hensyn til når du samler inn melk fra en mus, inkludert en) hvor mye tid avsatt til samling, 2) dosen av oxytocin administreres, 3) hvor mange valper demningen er for tiden sykepleie og 4) beløpet av tiden som har gått siden fødsel på tidspunktet for samlingen. Ved hjelp av tidligere studier som retningslinjer, setter vi ut for å optimalisere forholdene for melkemengde.

Tidligere forskning har direkte korrele…

Materials

Materials-Mouse
Name of Material/Reagent	Vendor	Catalog Number	Comments
Ketamine (KetaVed 100 mg/mL) (dose: 80-100 mg/kg)	MWI/Vedco	011075
Xylazine (TranquiVed 100 mg/ml) (dose:5-10 mg/kg)	MWI/Vedco	NADA 139236
Eye lubricant	MWI/Apexa	701013
Oxytocin (2 IU/kg)	Vet One	501013
Materials- Muntjac
Name of Material/Reagent	Vendor	Catalog Number	Comments
Midazolam (1-2 mg/kg)	Amerisource Bergen Drug Corp	924326	optional: researcher can either use Midazolam on its own or BAM combination as an anesthetic
Butorphanol tartrate (Torbugesic) (0.45 mg/kg)	Fort Dodge Animal Health	NADA 135-780
Azaperone tartrate (0.25 mg/kg)	ZooPharm
Medetomadine HCl (0.07 mg/kg)	ZooPharm
Antipamezol hydrochloride (Antisedan) (dose: 0.25 mg/kg)	Orion Corporation	NADA 141-033
Oxytocin (10 IU/kg)	Vet One	501013
Equipment- Mouse
Name of Equipment	Vendor	Catalog Number	Comments
P-200 Pipetman	Gilson	F123601
200 μL pipette tips	Light Labs	B-2004-SH
1 ml syringes	MWI	005427
27 gauge needles	MWI	002031
Equipment- Muntjac
Name of Equipment	Vendor	Catalog Number	Comments
15 ml conical tubes	VWR	21008-918
22 gauge needles	MWI	873
3 ml luer lock syringes	MWI	001377