이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법
Summary
A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.
Abstract
마우스는 종종 때문에 가능한 형질 전환 마우스 및 시약의 넓은 범위에 이식 면역학의 연구에서 심장 이식 기증자와받는 사람으로 사용됩니다. 어려움으로 인해 동물의 작은 크기와 심장 이식에 포함 된 미세의 상당한 기술적 과제로 제시된다. 특히, 초기 이식 후 기술적 인 실패의 높은 비율은받는 사람의 죽음과 같은 뒷다리 마비 또는 비 심장 박동 같은 수술 후 합병증이 발생할 수 있습니다. 여기에, 이소성 마우스 심장 이식을위한 완전한 기술은받는 사람 마우스로 기증자의 마음과 그 이후의 주입을 수확 포함, 보여줍니다. 기증자의 심장은 바로 상행 대동맥과 폐동맥의 차가운 헤파린 식염수와 절개와 현장 관류에 다음 수확한다. 받는 사람의 동작은 다음에, 복부 대동맥과 하대 정맥 (IVC)의 준비를 포함단일 실행 10-0 microsuture 사람과받는 사람 IVC와 기증자 폐동맥 비슷한 문합을 사용하여받는 사람의 대동맥을 가진 기증자의 대동맥의 엔드 – 투 – 측 문합. 수술 후 동물은 0.6 ㎖의 생리 식염수를 피하 주사하고 37 ° C에서 가열 패드에 복구 할 수 있습니다. 227 마우스의 심장 이식의 결과는 86.8 %의 48 시간에서 성공률 요약되어있다. 15 (6.6 %)이 48 시간 이내에 사망하는 동안 48 시간 내에 13.2 %의 실패, 5 (2.2 %), 허혈성 손상 및 / 또는 혈전증 접목에 의한 비 심장 박동을했다 뒷다리 마비, 10 (4.4 %)을 경험 .
Introduction
장기 이식 동물 모델은 임상 이식 환자의 치료를 개선하기위한 가치있는 정보를 제공 할 수있다. 마우스 모델에 의한 유전자 변형 쥐와 다른 동물 모델 1-3을 사용할 수 없습니다 생쥐의 특정 시약의 넓은 범위에 장기 이식 거부 나 수용의 면역 메커니즘을 연구하는데 특히 유용하다. 이식 마우스 모델 도전은 만족스러운 결과를 달성하기 위해 상당한 전문적인 기술을 필요로하는 기증자와받는 사람의 작은 크기입니다.
기술은 첫 번째 이후 코리 등 (5)에 의해 마우스의 심장 이식을 위해 적응 된 쥐 4 마음의 이소성 이식에 대해 설명했다. 이 기술은 전에 기증자의 작업에 대한받는 사람과 이식 된 심장 또는 t의 생존을 손상 할 가능성이 둘 중 기증자의 심장, 전혀 살포를 준비하고 참여그가받는 사람. 원래 이식 거부와 관용 6-8의 메커니즘을 조사하는 바와 같은 절차는 널리 사용되어왔다. 기타 마우스 9,10 심장 이식 오노와 린지의 원래 쥐의 심장 이식 절차를 적용했다. 최근 기술은 코리 등 11의 방법과 관련된 몇 가지 문제를 극복 마우스 심장 이식 출판되었다. 프로토콜은 여기에 설명 포함 모트 람 등 (12)의 방법에 따라 트립 변형, 통합 : 시츄 관류 차가운 헤파린 식염수로 즉시 개흉술 후 수신자 동작 시간을 최소화하기 위해받는 운전 이전 도너 동작을 수행한다. 또한, 우리는 작은 atraumatic 혈관 클램프 대신 6-0 실크 넥타이를 사용합니다. 혈관 클램프가 더 많은 공간을 복용의 단점이 있지만 그들은 너무 빡빡하거나 느슨하게해서는 안되는, 넥타이보다 제어하기가 쉽습니다및 클램프보다 제거 덜 간단합니다. 초기 학습에 대한 대안이 봉합의 균일 성을 보장하고, 따라서 문 합의 개통하는 근위 및 원위 모서리에 숙박 봉합사를 사용하는 스테이지 있지만, 우리의 방법은, 혈관 문합을위한 실행중인 하나의 봉합사를 사용합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
마우스 심장 이식 마스터에 상당한 수술 기술을 필요로하는 어려운 미세 수술 방법입니다. 가장 어려운 부분은 혈관의 작은 직경이다. 또, 수신자 동작 시간 및 출혈을 제한하는 것이 필요하다. 마우스의 심장 이식에 대한 기술은 첫 번째 코리 등으로 설명했다. 1973 년 이후에 모트 람 등 (12)에 의해. 우리의 수정은 다음 사항을 포함한다. 첫째, 곧 관류 후 대동맥과 폐동맥 번?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 Microsearch 호주의 재단, 및 Myee 코드 링턴 의학 연구 재단에 의해, 호주 프로젝트 그랜트 1,029,205의 국립 보건 의학 연구위원회 (NHMRC)에 의해 지원되었다.
Materials
| Operating microscope | Leica, Heerbrugg, Switzerland | M651 | 10x – 25x magnification |
| Anesthetic machine | Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia | Vett3 | Capable of delivering a mixture of isoflurane and oxygen in air |
| Operating board | Hardware store or office supplier | Dense cork or synthetic capable of taking pins | |
| Heparinised saline (5 U/ml, 4oC) | Pfizer, USA | FW25 | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice |
| Normal saline (37oC) | AstraZeneca Pty Ltd, Australia | 4538 | In 1ml syringe with 23 gauge needle on warm pad |
| Sutures 10- nylon, 5-0 Vicryl | Ethicon, Inc. NJ, USA | 2870G/J421H | |
| Buprenorphine (0.05mg/kg in 0.1ml saline) | Reckitt Benckiser, Sydney, Australia | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice | |
| Ampcillin (5mg/kg in 0.1 ml saline) | Aspen, Sydney, Australia | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice | |
| Gel Foam | Pharmacia & Upjohn Co. USA | 801289304 | Cut into small pieces |
| High temperature cautery device | Medtronic, USA | 8444000 | |
| Microsurgery instruments: | Shanghai Medical Instruments Co. Ltd., | ||
| micro-needleholders | Shanghai, China | WT2020 | |
| micro scissors | " " " | WT1020 | |
| micro-forceps (straight tip) | " " " | WA3010 | |
| micro-forceps (curved tip) | " " " | WA3020 | |
| micro-mosquito clamps (1 pair) | " " " | W40350 | |
| micro-vessel atraumatic clamps (1 pair) | " " " | W40130/W40150 | |
| Heating Pad/Right Temp | Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790 | ||
References
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