Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem
Summary
A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.
Abstract
Fareler nedeniyle sık sık mevcut transgenik fareler ve reaktiflerin geniş transplant immünoloji çalışmalarda kalp nakli verici ve alıcı olarak kullanılır. Bir zorluk nedeniyle hayvanın küçük boyutu ve kalp nakli dahil mikrocerrahi önemli teknik sorunlar sunulmaktadır. Özellikle, erken transplantasyon sonrası teknik başarısızlık oranının yüksek alıcı ve ölüm gibi arka ekstremite felci ya da olmayan bir kalpte post-operatif komplikasyonlar oluşabilir. Burada, heterotopik fare kalp nakli için tam teknik bir alıcı fare içine donör kalp ve sonraki implantasyonu hasat içeren gösterilmiştir. Donör kalp derhal çıkan aort ve pulmoner arter soğuk heparinli serum fizyolojik ve kesisi ile in situ perfüzyon takip hasat edilir. Alıcı işlemi takiben, abdominal aorta ve vena kava (IVC) hazırlanmasını gerektirirçalışan tek 10-0 mikrodikiş ve alıcı VKİ ile donör pulmoner arter benzer bir anastomoz kullanarak alıcı aort ile aort donör uç-yan anastomoz. Ameliyattan sonra hayvanlar, 0.6 ml normal tuzlu su, deri altından enjekte edildi ve 37 ° C bir ısıtma pedi üzerine geri bırakılır. 227 fare kalp nakli gelen sonuçlar% 86.8 48 saatte bir başarı oranı ile özetlenmiştir. 15 (% 6.6) 48 saat içinde ölürken, 48 saat içinde% 13.2 arızaları, 5 (% 2.2), iskemik yaralanma ve / veya trombozu greft nedeniyle olmayan bir dayak kalbi vardı arka bacak felci, 10 (% 4.4) deneyimli .
Introduction
Organ nakli hayvan modelleri klinik transplant hastalarının tedavisini geliştirmek için değerli bilgiler sağlayabilir. Fare Modelleri Genetik olarak modifiye edilmiş fareler ve diğer hayvan modelleri 1-3 için geçerli değildir fareler için özel reaktiflerin geniş organ nakli reddi veya kabul bağışıklık mekanizmasını çalışmak için özellikle yararlıdır. Transplantasyonu fare modelleri ile bir meydan okuma tatmin edici sonuçlara ulaşmak için önemli teknik beceri gerektirir donör ve alıcı küçük boyutudur.
Bir teknik, ilk olarak daha sonra Corry ve arkadaşları tarafından 5 Fare kalp nakli için uyarlanmıştır sıçanlarda 4 kalplerin heterotopik nakli için tarif edilmiştir. Bu teknik, önce verici işlemi için alıcı ve transplante veya t hayatta tehlikeye sokabilecek her ikisi de donör kalbi, hiçbir perfüzyon hazırlanması dahilo alıcı. Ilk olarak transplant reddi ve tolerans 6-8 mekanizmalarını incelemek için anlatılan prosedür, yaygın olarak kullanılmaktadır. Diğerleri farelerde 9,10 kalp nakli için Ono ve Lindsey orijinal sıçan kalp nakli prosedürü adapte var. Daha yakın zamanlarda, bir teknik Corry et al 11'in yöntemi ile ilişkili sorunların üstesinden bir fare kalp nakli için yayınlanmıştır. Protokol, burada tarif edilen dahil Mottram ve ark 12 yöntemine dayalı değişiklikler, içerir: in situ perfüzyon soğuk heparinize tuzlu su ile hemen torakotomi sonra alıcı işlem süresini en aza indirmek için, alıcı işlemi için önce verici işlemi yapılması. Buna ek olarak, biz küçük atravmatik damar kelepçeler yerine 6-0 ipek bağları kullanabilirsiniz. Damar kelepçeler daha fazla yer alma dezavantajı olmasına rağmen onlar çok sıkı veya gevşek olmamalı, hangi bağları daha kontrol etmek daha kolaydırve kelepçeler daha çıkarmak için daha az açıktır. İlk öğrenme alternatif bir sütür düzgünlüğü sağlamak ve böylece anastomoz açıklığı için yakın ve uzak köşelerinde kalmak sütür kullanmak için sahneliyor rağmen bizim yöntem, damar anastomoz için çalışan tek bir dikiş kullanır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Fare kalp nakli master önemli cerrahi beceri gerektiren zorlu bir mikrocerrahi yöntemidir. En zor özelliği, kapların küçük çapıdır. Buna ek olarak, bu işlem zaman alıcı ve kanama sınırlamak için gereklidir. Fare kalp nakli için teknik ilk Corry ve diğerleri tarafından tarif edilmiştir. 1973 içinde ve daha sonra Mottram ve ark 12 ile. Bizim modifikasyonlar aşağıdaki noktaları içerir. Öncelikle, kısa bir süre sonra perfüzyon aort ve pulmoner arter demetinin torak…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Microsearch Avustralya Vakfı ve Myee Codrington Tıbbi Araştırma Vakfı tarafından tarafından, Avustralya Proje Grant 1029205 Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (NHMRC) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Operating microscope | Leica, Heerbrugg, Switzerland | M651 | 10x – 25x magnification |
| Anesthetic machine | Vet Quip Pty Ltd, Sydney, Australia | Vett3 | Capable of delivering a mixture of isoflurane and oxygen in air |
| Operating board | Hardware store or office supplier | Dense cork or synthetic capable of taking pins | |
| Heparinised saline (5 U/ml, 4oC) | Pfizer, USA | FW25 | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice |
| Normal saline (37oC) | AstraZeneca Pty Ltd, Australia | 4538 | In 1ml syringe with 23 gauge needle on warm pad |
| Sutures 10- nylon, 5-0 Vicryl | Ethicon, Inc. NJ, USA | 2870G/J421H | |
| Buprenorphine (0.05mg/kg in 0.1ml saline) | Reckitt Benckiser, Sydney, Australia | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice | |
| Ampcillin (5mg/kg in 0.1 ml saline) | Aspen, Sydney, Australia | In 1ml syringe with 23 gauge needle on ice | |
| Gel Foam | Pharmacia & Upjohn Co. USA | 801289304 | Cut into small pieces |
| High temperature cautery device | Medtronic, USA | 8444000 | |
| Microsurgery instruments: | Shanghai Medical Instruments Co. Ltd., | ||
| micro-needleholders | Shanghai, China | WT2020 | |
| micro scissors | " " " | WT1020 | |
| micro-forceps (straight tip) | " " " | WA3010 | |
| micro-forceps (curved tip) | " " " | WA3020 | |
| micro-mosquito clamps (1 pair) | " " " | W40350 | |
| micro-vessel atraumatic clamps (1 pair) | " " " | W40130/W40150 | |
| Heating Pad/Right Temp | Kent Scientific Corporation, Turrington, CT 06790 | ||
References
- Aramaki, O., et al. Interleukin-10 but not transforming growth factor-beta is essential for generation and suppressor function of regulatory cells induced by intratracheal delivery of alloantigen. Transplantation. 79, 568-576 (2005).
- Chen, R. H., Bushell, A., Fuggle, S. V., Wood, K. J., Morris, P. J. Expression of granzyme A and perforin in mouse heart transplants immunosuppressed with donor-specific transfusion and anti-CD4 monoclonal antibody. Transplantation. 61, 625-629 (1996).
- Poulin, L. F., et al. Interleukin-9 promotes eosinophilic rejection of mouse heart allografts. Transplantation. 76, 572-577 (2003).
- Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. J. Thorac. Cardiovasc. Surg. 57, 225-229 (1969).
- Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. Primarily vascularized allografts of heart in mice. Transplantation. 16, 343-350 (1973).
- Larsen, C. P., et al. CD40-gp39 interactions play a critical role during allograft rejection. Suppression of allograft rejection by blockade of the CD40-gp39 pathway. Transplantation. 61, 4-9 (1996).
- Saitovitch, D., Bushell, A., Mabbs, D. W., Morris, P. J., Wood, K. J. Kinetics of induction of transplantation tolerance with a nondepleting anti-Cd4 monoclonal antibody and donor-specific transfusion before transplantation. A critical period of time is required for development of immunological unresponsiveness. Transplantation. 61, 1642-1647 (1996).
- Callaghan, C. J., et al. Regulation of allograft survival by inhibitory FcgammaRIIb signaling. J. Immunol. 189, 5694-5702 (2012).
- Qian, S., et al. Impact of donor MHC Class I or Class II antigen deficiency on first- and second-set rejection of mouse heart or liver allografts. Immunology. 88, 124-129 (1996).
- Wang, C., et al. Spontaneous acceptance of mouse kidney allografts is associated with increased Foxp3 expression and differences in the B and T cell compartments. Transpl. Immunol. 24, 149-156 (2011).
- Liu, F., Kang, S. M. Heterotopic Heart Transplantation in Mice. J. Vis. Exp. , (2007).
- Mottram, P. L., et al. Electrocardiographic monitoring of cardiac transplants in mice. Cardiovasc. Res. 22, 315-321 (1988).
