Synthese en de fabricage van electrospun lange vezels verspreid over een grotere storting gebied via een nieuw ontworpen verzamelaar uit een roman biologisch afbreekbaar polymeer genoemd poly (glycerol-dodecanoaat) (PGD) werd gemeld. De vezels waren in staat de groei van cellen afkomstig van muizen pluripotente stamcellen ondersteunen.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Electrospun Stapel Stellingen van Poly (glycerol-dodecanedioate) voor Engineering zenuwweefsel Van muis embryonale stamcellen
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Voor tissue engineering toepassingen, de bereiding van biologisch afbreekbaar en biocompatibel steigers is het meest wenselijk, maar uitdagende taak. Van de verschillende fabricagemethoden, electrospinning is het meest aantrekkelijk door zijn eenvoud en veelzijdigheid. Daarnaast electrospun nanovezels na te bootsen de omvang van de natuurlijke extracellulaire matrix zorgen voor extra ondersteuning voor de overleving en groei. Deze studie toonde de levensvatbaarheid van de vervaardiging van lange vezels verspreid over een groter stortterrein voor een nieuw biologisch afbreekbaar en biocompatibel polymeer genoemd poly (glycerol-dodecanoaat) (PGD) 1 met een nieuw ontworpen collector voor electrospinning. PGD vertoont unieke elastische eigenschappen met vergelijkbare mechanische eigenschappen aan zenuwweefsel, dus het is geschikt voor zenuwweefsel technische toepassingen. De synthese en fabricatie set-up voor het maken van vezelige steigermateriaal was eenvoudig, zeer reproduceerbaar, en goedkoop. In biocompatibiliteittesten, kunnen cellen uit muis embryonale stamcellen hechten aan en groeien op de electrospun PGD vezels. Kortom, dit protocol voorzien in een veelzijdige vervaardigingswerkwijze voor het vervaardigen PGD electrospun vezels om de groei van muis embryonale stamcellen afgeleide neurale stam cellen ondersteunen.
Inleiding
Electrospinning is een van de effectieve verwerkingsmethoden micro naar nanometer vezel steigers produceren. Het basisprincipe van electrospinning omvat een Taylor kegel oplossing die bij de opening van de naald wordt vastgehouden door toepassing van hoge spanning tussen de punt van de naald en een geaarde collector. Wanneer de elektrostatische afstoting in de oplossing overwint de oppervlaktespanning, wordt een geladen fluïdumstraal uitgeworpen uit de naald tip, reizen door de lucht met oplosmiddel verdamping, en wordt uiteindelijk afgezet op de geaarde collector. De spuitpomp verschaft een continue stroom van de oplossing die uit de spindop en dus meerdere kopieën ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Protocol
1. Electrospinning Collector Setup
- Snijd de aluminiumfolie in een rechthoekig stuk.
- Vouw het rechthoekig stuk in een rechthoekige strook, en bevestig deze loodrecht op een vlakke metalen plaat met tape (Figuur 1). Opmerking: De grootte van de vezelmat afhankelijk van de lengte en breedte van de strook. Zo kan de strook afmetingen aangepast indien nodig.
2. Polymeer Oplossing Voorbereiding
- Meng glycerol en dodecaandizuur (DDA) in 1:1 molverhouding in een beker bij 120 ° C gedurende 100 uur PGD polymeer te verkrijgen.
- Los poly (ethyleenoxide) (PEO) en gelatine in 65% ethanol m....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Resultaten
De belangrijkste componenten van de electrospinning worden getoond in Figuur 1. Een groot formaat vezelmat werd meestal verkregen via loodrecht bijgevoegde aluminiumfolie strippen en een vlakke metalen plaat. Figuur 2 toont het ontwerp en de collector electrospinning vezelmat. De breedte en lengte kan worden aangepast voor verschillende toepassingen. De lengte van de vezel die met PGD polymeer en basale oplossing mengsel wordt tot 10 cm. De morfologie van electrospun vezels wordt getoon.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
De beperkingen van collectoren of de complexiteit van roterende verzamelaars die momenteel worden gebruikt voor elektrospinning verhogen de beperking van het verkrijgen van de gewenste lengte en grootte vezelmat voor sommige toepassingen. Bovendien, het overbrengen van vezels van de grond collector naar de cultuur schotel of andere substraten is een uitdaging 5. In dit verslag, een nieuw ontworpen verzamelaar eenvoudig gemaakt door het aanbrengen van een aluminium foliebaan de geaarde collector, kon vergroot .......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
Geen belangenconflicten verklaard.
Dankbetuigingen
Dit werk werd uitgevoerd met behulp van de faciliteiten van de faculteit Biomedische Technologie aan de Florida International University.
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| Glycerol | Sigma-Aldrich | G7757 | |
| Dodecanedioic acid | Sigma-Aldrich | D1009 | |
| Gelatin | Sigma-Aldrich | D1890 | |
| Poly(ethylene oxide) (PEO) | Sigma-Aldrich | 182028 | |
| Riboflavin | Sigma-Aldrich | 132350250 | 0,10% |
| Mouse embryonic stem cells | GlobalStem | GSC-5002 | |
| Matrigel | Becton Dickinson | 356234 | |
| DMEM/F12 | Thermo Scientific | SH30272.02 | |
| N2 supplement | Invitrogen | 17502048 | 1% |
| FGF2 | Stemgent | 03-0002 | 10 ng/ml |
| Accutase | Invitrogen | A11105-01 | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | Invitrogen | 10010-031 | |
| Resazurin fluorescence dye | Sigma-Aldrich | 62758-13-8 | |
| SV Total RNA Isolation System | Promega | Z3100 | |
| GoScript Reverse Transcription System | Promega | A5000 | |
| GoTaq qPCR Master Mix | Promega | A6001 | |
| Syringe pump | Fisher scientific | 14-831-200 | |
| High voltage power source | Spellman High Voltage Electronics Corporation | SL30 | |
| UV light | Philips | 308643 | 15W/G15T8 |
| Synergy HT Multi-Mode Microplate Reader | BioTek | ||
| Perkin Elmer GeneAmp PCR System 9600 | Perkin Elmer | 8488 | |
| StepOne Real-time PCR System | Applied Biosystems | 4376357 |
Referenties
- Migneco, F., Huang, Y. -C., Birla, R. K., Hollister, S. J. Poly (glycerol-dodecanoate), a biodegradable polyester for medical devices and tissue engineering scaffolds. Biomaterials. 30, 6479-6484 (2009).
- Reneker, D. H., Yarin, A. L. Electrospinning jets and polymer ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
