Isolerede pancreas acini bevarer deres in vivo morfologi og aktivitet og tilbyde effektive måder til at overvåge og manipulere sekretion. Dette arbejde viser, hvordan acini kan isoleres fra muse-bugspytkirtlen, og hvordan deres sekretoriske kapacitet kan vurderes.
Pancreas acinære celler producerer og udskiller fordøjelsesenzymer. Disse celler er organiseret som en klynge, der danner og deler en fælles lumen. Dette arbejde viser, hvordan sekretorisk kapacitet af disse celler kan vurderes ved dyrkning af isolerede acini. Opsætningen er en fordel, da isolerede acini, som bevarer mange egenskaber intakte exokrin bugspytkirtlen kan manipuleres og overvåges lettere end i hele dyret. Korrekt isolering af pancreas acini er et centralt krav, således at ex vivo kultur vil repræsentere in vivo natur acini. Protokollen viser, hvordan man isolere intakt acini fra muse bugspytkirtlen. Efterfølgende to komplementære metoder til evaluering pancreassekretion fremlagt. Den amylasesekretion analysen fungerer som et globalt mål, mens direkte billeddannelse af pancreassekretion tillader karakterisering af sekretion ved en sub-cellulær opløsning. Kollektivt, de teknikker Presented her muliggøre et bredt spektrum af forsøg for at studere eksokrine sekretion.
Den exokrine pancreas udgør det meste af massen af pattedyr bugspytkirtel og er dedikeret til produktion og sekretion af fordøjelsesenzymer 1. Den funktionelle enhed af eksokrine bugspytkirtlen, acinus, er en klynge af epitelceller, som danner og deler en fælles lumen. Ved hormonal og neuronal stimulation er vesikler fyldt med enzymer, transporteres til den apikale celleoverfladen, sikring med det og uddrive deres indhold ind i hulrummet 1-3. De udskilte enzymer derefter drænes af sammensmeltende sæt af kanaler i tyndtarmen, hvor de katalyserer nedbrydningen af fødevarer i næringsstoffer.
Denne video viser, hvordan intakt acini isoleres fra hele bugspytkirtlen, og hvordan deres sekretorisk kapacitet kan vurderes. Ved hjælp af denne opsætning er pancreassekretion kvantificeres ved at måle den relative mængde amylase, der blev udgivet efter stimulering. Alternativt kan sekretion skal afbildes direkte ved anvendelse af forskelligesensorer og farvestoffer.
Ex vivo opsætning af pancreas-acini er fordelagtig, eftersom isoleret acini, som bevarer mange karakteristika af de intakte bugspytkirtlen, kan manipuleres og overvåges lettere end i hele dyret 4-6. Denne opsætning blev oprindelig udviklet i slutningen af 1970'erne og var siden forlænget til undersøgelse af flere exokrine væv, såsom spyt og mælkekirtler 3-7. Især det giver studiet af sekretion med minimal indblanding på de komplekse cellulære organisationer i disse polariserede epithel.
Udover ex vivo kultur, alternative opstillinger til studiet af eksokrine sekretion omfatter intravital mikroskopi og måling af væsker fra pankreasgangen. Intravital mikroskopi blev vist sig at fungere godt i mus spytkirtler 10. Denne metode kan optage sekretion i realtid i det intakte dyr, men er begrænset i sin beslutning og midlerne til at manipulere exokrine væv. Vurdering sekretion ved at samle fluider fra pankreasgangen blev opnået i bedøvede rotter 11. Men da kanylering af pank…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev finansieret af en bevilling fra US-Israel BSF til BS og EDSBS er en etableret af Hilda og Cecil Lewis professoratet i molekylær genetik.
ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |