膵臓腺房細胞の分泌能力を評価する
Summary
単離された膵臓腺房はそれらのインビボの形態および活性を保持し、監視し、分泌を操作するための強力な方法を提供します。この作品は、腺房、マウスの膵臓から単離することができ、それらの分泌能力がどのように評価することができる方法を示しています。
Abstract
膵臓腺房細胞が生産し、消化酵素を分泌する。これらの細胞は、関節腔を形成し、株式のクラスタで構成されています。この作品は、これらの細胞の分泌能力が孤立した腺房の文化によって評価することができる方法を示しています。無傷の外分泌膵臓の多くの特性を保持して孤立した腺房は、操作し、全動物におけるよりも容易に監視することができるため、セットアップが有利である。膵臓腺房の適切な分離は、ex vivo培養は腺房のin vivo性質を表現するように、重要な要件です。プロトコルは、マウスの膵臓から無傷の腺房を分離する方法を示します。続いて、膵臓の分泌を評価するための2つの相補的な方法が提示される。膵臓分泌の直接画像化は、サブセルラー解像度で分泌の特徴付けを可能にしながら、アミラーゼ分泌アッセイは、世界的な尺度として役立つ。総称して、技術はPRESENテッドは、ここで外分泌を研究するための実験の広いスペクトルを可能にする。
Introduction
外分泌膵臓は、哺乳動物の膵臓の質量の大部分を構成し、消化酵素1の産生および分泌に捧げられています。外分泌膵臓、腺房の機能ユニットは、関節腔を形成し、株式上皮細胞のクラスタである。ホルモンまたは神経刺激を受けると、酵素で満たされた小胞は、頂端細胞表面に輸送され、それと融合し、内腔1-3にその内容を追放。分泌された酵素は、それらが栄養素に食物の分解を触媒する小腸内へのダクトの合体セットによって排出される。
このビデオでは、全体の膵臓から単離され、それらの分泌能力がどのように評価することができる方法を無傷で腺房を示しています。このセットアップを使用して、膵臓の分泌が刺激後に放出されたアミラーゼの相対量を測定することによって定量される。あるいは、分泌は異なるの使用によって、ライブ画像化することができるセンサーや染料。
無傷の膵臓の多くの特性を保持して孤立した腺房は、操作し、全動物4-6よりも容易に監視することができるので、膵臓腺房のex vivoセットアップが有利で ある。このセットアップは、もともと1970年代後半に開発され、そのような唾液や乳腺3-7のようないくつかの外分泌組織の研究のために拡張されているためであった。注目すべきことに、これらの偏光の上皮の複雑な細胞組織への最小限の干渉分泌の研究を可能にする。
Protocol
Representative Results
Discussion
ex vivoでの文化だけでなく、外分泌の研究のための代替セットアップは膵管からの流体の生体顕微鏡や測定が含まれる。生体顕微鏡は、マウス唾液腺10で良好に動作することが示された。この方法は、無傷の動物において、リアルタイムでの分泌を記録することができますが、その解像度と外分泌組織を操作するための手段によってのみ制限される。膵管から流体を収集するこ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、米国·イスラエルのBSFからBSとEDSBSに助成金によって賄われていた分子遺伝学におけるヒルダとセシル·ルイス教授の椅子の責務であると信ずる。
Materials
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
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