Valutare la capacità secretoria delle cellule pancreatiche acinari
Summary
Isolato acini pancreatici mantengono la loro morfologia e l'attività in vivo ed offrono modi potenti per il controllo e la manipolazione della secrezione. Questo lavoro dimostra come acini possono essere isolate dal pancreas del mouse, e come le loro capacità di secrezione possono essere valutati.
Abstract
Cellule acinose pancreatiche producono e secernono enzimi digestivi. Queste cellule sono organizzate come un gruppo che forma e condivide un lume congiunta. Questo lavoro dimostra come la capacità secretoria di queste cellule può essere valutata mediante coltura di isolati acini. La configurazione è vantaggiosa in quanto acini isolato, che conservano molte caratteristiche del pancreas esocrino intatto può essere manipolata e controllata più facilmente che in tutta animali. Isolamento corretto di acini pancreas è un requisito chiave in modo che la cultura ex vivo rappresenterà la natura in vivo degli acini. Il protocollo dimostra come isolare acini intatti dal pancreas del mouse. Successivamente, due metodi complementari per la valutazione della secrezione pancreatica sono presentati. Il dosaggio secrezione dell'amilasi serve come misura globale, mentre l'imaging diretto della secrezione pancreatica permette la caratterizzazione della secrezione ad una risoluzione sub-cellulare. Collettivamente, le tecniche Presented qui consentono un ampio spettro di esperimenti per studiare la secrezione esocrina.
Introduction
Il pancreas esocrino costituisce la maggior parte della massa del pancreas mammiferi ed è dedicata alla produzione e secrezione di enzimi digestivi 1. L'unità funzionale del pancreas esocrino, l'acino, è un ammasso di cellule epiteliali che formano e condivide un lume congiunta. Dopo stimolazione ormonale o neuronale, vescicole piene di enzimi vengono trasportati alla superficie della cellula apicale, si fondono con esso ed espellono il loro contenuto nel lume 1-3. Gli enzimi secreti vengono poi svuotati da una serie coalescenza di condotti nel piccolo intestino, dove si catalizzano la ripartizione del cibo in sostanze nutritive.
Questo video dimostra come acini intatti sono isolate dal pancreas intero e come la loro capacità secretoria può essere valutata. Utilizzando questa impostazione, la secrezione pancreatica viene quantificato misurando la quantità relativa di amilasi che è stato rilasciato dopo stimolazione. In alternativa, la secrezione può essere realizzata live dall'uso di differentisensori e coloranti.
L'ex vivo installazione di acini pancreatici è vantaggiosa in quanto acini isolato, che conservano molte caratteristiche del pancreas intatti, può essere manipolata e controllata più facilmente che in tutta animali 4-6. Questa configurazione è stato originariamente sviluppato alla fine degli anni 1970 ed è stato dato prorogato per lo studio di diversi tessuti esocrine, come salivari e ghiandole mammarie 3-7. In particolare, consente lo studio della secrezione con la minima interferenza alle complesse organizzazioni cellulari di questi epiteli polarizzati.
Protocol
Representative Results
Discussion
Oltre alla cultura ex vivo, configurazioni alternative per lo studio della secrezione esocrina includono la microscopia intravitale e la misurazione di fluidi dal dotto pancreatico. Microscopia intravitale ha dimostrato di operare bene nel topo ghiandole salivari 10. Questo metodo può registrare la secrezione in tempo reale nel intatta di un animale, ma è limitato nella sua risoluzione e dai mezzi per manipolare il tessuto esocrino. Valutare la secrezione attraverso la raccolta di fluidi dal dotto …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato finanziato da una sovvenzione della BSF USA-Israele a BS e EDSBS è un incombente della cattedra Hilda e Cecil Lewis in Genetica Molecolare.
Materials
| ICR mice | Harlan | Any strain will do | |
| HBSS | Sigma Aldrich | H8264 | Can substitude for KRB |
| BSA | Sigma Aldrich | A7906 | Fraction V |
| Trypsin inhibitor | Sigma Aldrich | T9003 | |
| Collagenase XI | Sigma Aldrich | C0130 | |
| Nylon mesh | BD Falcon | 352360 | 70-100µm |
| Amylase infinity reagent | Thermo | TR25421 | |
| CCK | Sigma Aldrich | C2175 | |
| FM4-64 | Lifetechnologies | F34653 | Diluted to 16µM |
| 20mL scintillation vial | Sigma Aldrich | Z190527 | |
| DeltaVision system | Applied Precision | Consisting of an inverted microscope IX71 equipped with 60x/1.4 or 100x/1.3 objectives (Olympus) | |
| Zeiss 510 or 710 confocal microscope | Zeiss | 60x/1.4 or 100x/1.4 objectives | |
| Ultra Microplate reader | BioTek | ELx808 |
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