从农业土壤使用静态钱伯斯温室气体流量测量

Protocol

1，硐室施工和安装锚

1. 设计和构建腔 - 每一个组成，其插入到土壤并在磁通测量被放置在锚的顶部上的盖子的锚 - 满足试验要求。
   1. 在设计室的形状和大小，考虑空间因素如作物行距，化肥或有机肥带，和株高。因为锚土壤表面上的突起可以促进小气候效应及积水，考虑具有盖子坐低到土壤表面的可能。因为腔室高度和检测灵敏度之间存在折衷，设计的盖，以尽可能短，是可行的，所研究的系统。
   2. 建立的坚固，非反应性材料室，如不锈钢或PVC，并包括一种机制，用于密封所述盖体上的锚。绝缘盖，盖上浅色或反光材料，以防止热量积聚在测量。包括隔膜，使样品的采集和通风管，以防止室的部署和样品拆卸过程中压力扰动。如需更多详细信息请参考材料表，帕金和Venterea ^8，和克拉夫等^[10]。
2. 至少1天前取样，安装室锚在土壤中的所需站点。安装方法将取决于腔室的设计，但在一般情况下，即使应用压力在所有点使得锚不翘曲或扭曲的土壤结构。沉锚的2.5-13厘米，取决于土壤类型，部署时间和室容积^6,11的深度。留下尽可能少（不超过5厘米）突出到土壤表面以上。

2，校准和实验设计

注：在开始实验，请按照下列步骤来确定一个合适的采样时间过程，使数据被装配到适当的线性或非线性的磁通模型（参见Parkin 等人 ^12）。这将需要使用在步骤3-5（现场采样，样品分析和数据分析）中描述的技术。最佳时机是两个系统进行研究和腔室所使用的尺寸的函数。一些试验和错误可能参与。见Venterea ¹³替代方法。

1. 标定取样和分析
   1. 在预期产生比较高的痕量气体通量的环境或管理条件下，进行密集采样按照第3条所述的技术。使用紧密间隔的采样时间点，填充时间序列比将被视为典型的持续时间较长。通过抽样从几个有代表性的商会开始在5-10个多小时的过程中均匀分布的时间点。
   2. 用气相色谱法以下第4分析样品。
2. 校准Interpretati上
   1. 对于每一个校准的时间序列和每种气体的利益，情节时间由浓度。
   2. 验证通量率都在预期范围的高端。见第5节对通量计算。请参考故障排除提示2.3节。
   3. 检查图形为非线性的迹象，或者更具体地说，plateauing气体的浓度随着时间的推移。
      注意：在该浓度开始由气体种类对高原是不同的，并且是气体的生产或消耗的土壤内的速率，气体在腔室顶部空间中的浓度，这两个区域之间的扩散的功能的要点。因此，强烈受到室高度，用更短的腔高原之前产生更短的时间。
   4. 使用校准设置，以确定实验系统最优室部署时间。如果线性回归将在数据分析中使用（如这里的第5节），选择时机是保持尽可能接近线性重lationship尽可能的时间和浓度的感兴趣的所有气体/系统之间，同时允许一个最小3，优选为4的，时间序列⁶内的采样次数。对于用于CO ₂和N _{2 O}测量，时间序列腔10-30厘米高的范围通常为20-60分钟^8,14。
3. 校准故障排除
   1. 如果有低分化和/或难以挑剔的线性或高原，使用更严格的校准时间点或更长的校​​准时间序列，并检查浓度范围内检测限。对于通量率较低，在积累率的降低可能不会被测试的时间框架内观察到。这不应该引起关注。
   2. 如果通量是不是在预期的实验范围的高端，重复校准，改变治疗或环境条件诱导高通量（通过施肥和灌溉，例如）。另外，我们E的至少4个时间点中的实验设计，使得如果实验通量高于校准和plateauing期间观察到的显著更高确实发生，稍后的时间点，可以在保持线性回归至少3个时间点排除。曲线回归的方法也可以采用。
4. 实验设计
   1. 根据在第2.2.4节确定的最佳时机，制定一个总体抽样计划以捕捉所有相关网站，治疗和/或重复，并允许移动通过室网站人员有效。如果需要的话，隔膜腔室网站成几个“回合”进行采样一前一后。
      1. 如果测量结果将被视为代表了一整天，样品在一天的时间当气温适中相对于日常极端。在典型的温带作物系统，理想的窗口中后期，早晨。
      2. 如果样品被收集在连续两轮时，小心不要被在每天的同一时间重复取样相同的处理引入的偏差。构建完善了重复的块，而不是治疗，通过治疗。
      3. 包括时间，采取无论是在两轮或之前/之后（如适用）任何必要的辅助措施。 （见典型的配套措施3.3节。）
      4. 可选，包括时间收集空气样本中的非线性通量模型的使用，或作为原料的近似值（时间为零，“T _0”）浓度（此处不作讨论）的。
      5. 任选地，包括时间，用于加载的参考气体到小瓶中在采样的时间来评估取样和分析之间可能的样品降解。看到帕金和Venterea ⁸样品储存注意事项。
   2. 确定通量测量的频率，是否适用于研究目的。这个范围可以从一个单一的测量吨Ø每天，数月或数年的过程中每周或定期测量。请参阅罗切特等人对¹⁴的实验设计方面的考虑进行了深入探讨。
   3. 如果样本被收集在寒冷条件下，计划列入的加热装置，如热敷带小瓶，防止隔变脆的。

3，现场取样

注：在每个取样日期，遵循既定在2.4节的抽样方案，使用下面描述的技术。设备和样品量可以根据所采用的收集和传输方法和样品所需要的气相色谱分析⁸金额有所不同。该协议利用5.9毫升收集瓶和30毫升注射器，用样品转移的冲洗方法。见讨论的替代方法。

1. 准备
   1. 如果从每回合多室取样，准备的时间点参考资料，希望能帮rence网格（ 见图2）可以轻松地跟踪何时何地品尝。另外，安排采样时，记录每个时间点。
   2. 预标签，并安排最大效率和混乱的可能性最小采样过程中收集瓶。
   3. 为了采样过程中节省时间，请事先准备好所有的材料和设备。包括任何可能破坏或很容易丢失（针头，注射器，旋塞等），并将其放置在一个随身携带的手提包，水桶或其他容器演员。
   4. 准备记录任何延迟的时间点可能会发生因设备故障或其他不可预见的情况，并且可以在数据分析，通过调整具有一定的采样所需的时间很容易纠正。
2. 样品采集
   1. 连接和密封腔盖的预装室锚，并启动秒表。这是T _0。
   2. 立即密封盖子后Ç从相邻的腔室中的位置ollect的环境空气样品，在腔室顶部的近似高度：用空30毫升注射器装有一个针和活栓在所述打开位置，绘制在30ml空气样品，并关闭旋塞阀。这是对T ₀的样本。另外，搭T ₀从样品室^6。
      注：权衡两种方法之间存在 - 评价空间（离现场或外部微气候对外部样本）与时间（盖子封闭和样品采集之间的延迟内样本）的考虑和确定最合适的技术所使用的设备和系统正在研究中。
   3. 用注射器针头，刺破，已经有另一个针戳通过隔膜的边缘附近的一个5.9毫升收集瓶的隔膜。
   4. 打开注射器活塞注入大约20毫升样品放入小瓶（这将导致的以前的内容小瓶通过额外的针被开除，由样品代替）。
   5. 在一个平滑的运动，移除额外的针，同时继续注入尽可能多的剩余的样品（约10ml）中的可能的，轻微超额加压小瓶，以确保样品的完整性，并允许多个样品的分析，如果需要^8。
   6. 关闭活塞，并从隔撤出注射器针头。打开小瓶装满颠倒从悬空小瓶区分。
   7. 继续下一个腔，重复步骤3.2.1-3.2.6，密封的盖子上正确的预定波₀的时间点。
   8. 继续重复步骤3.2.1-3.2.7，直到在圆室都已经封存和T ₀的样本被收集。
   9. 返回到所述第一腔室中。
   10. 随着时间接近10秒，直到T ₁来说，刺穿隔膜腔室顶部的注射器针头。
   11. 在t _1，机智的10秒的范围内从室内hdraw 30ml的空气样品，并关闭水龙头。从隔室中取出注射器针头。
   12. 将样品转移到收集瓶以下步骤3.2.3-3.2.6。
   13. 继续收集样本以下步骤3.2.10-3.2.12，根据既定的2.4节中的采样方案。
3. 配套措施
   1. 为了气体的浓度转换为质量，测量空气温度在取样时间。根据研究目标，记录或执行其他配套措施，如在每个位置和/或时间，日降雨量，土壤容重，土壤硝态氮和铵浓度等土壤温度和土壤水分含量的各种方法的存在是为了获取这些措施 - 遵循标准协议。
   2. 或者，搜集已知浓度的环境空气样品和/或负载领域的标准装到小瓶中，评估环境温室气体浓度和潜在的存储小瓶降解我n个采样和分析期间（见第2.4.1.4和2.4.1.5）。

4，样品分析

1. 确定感兴趣的气体的各样品的浓度用气相色谱法，使用的设备配有一个电子捕获检测器为N _{2 O，}红外气体分析仪或热导检测器的CO _2，而对于CH ₄的火焰电离检测器。
   注：关键是要获得访问该正确配置了温室气体的分析，具有足够的可用运行时间的工具。原则和气相色谱的方法在别处^5,15,16说明。
2. 用理想气体定律微量气体浓度转换为体积质量：

PV = NRT

其中P =压力V =容积中，n =气体，R =气体常数，和T =温度的摩尔数。因此：

5。数据分析

1. 对于每一个时间序列，剧情时间由浓度和评估线性度。评价使用拟合优度或通过视觉检查，但不包括后面的时间点表示从进一步分析高原的迹象。用最少的三个时间点包括T ₀的通量计算（T _{0，T 1，T 2} ......）。建立一致的协议，并拒绝任何时间序列不符合该协议的标准线性度。看到帕金和Venterea ⁸错误，偏差，方差通量计算进行了深入探讨。
2. 进行线性回归。
3. 使用回归的斜率来计算流量：

F =秒•V•A ^-1

其中，F =通量，S =斜率的回归，V =室容积，且A =室区域。因此：

注：请参阅讨论与帕金等^[12]对非线性方法通量计算。

Representative Results

在此之前开始的一个研究项目，静态室，了解整个工作流程是非常重要的，而在硅片的组织，现场和实验室为基础的元素（ 图1）。提供精心的实验设计和系统校准（ 图2），数据分析一般是相对简单的。通量的速率被确定为使用适当的系统预先确定的磁通模型（ 图3），每个腔室和采样时间的时间回归由浓度。然而，即使下面的最佳实践，困难可能会遇到，和原始数据的质量控制是至关重要的。例如，一个腔室密封或泄漏的样品瓶失败可能会导致异常的浓度值。这些工作是通过对时间序列浓度重复目视检查（ 图4），与CO ₂的时间序列常常作为特别usefu容易地识别L指示由于CO ₂的通常更强大和持续的通量相比，有时可以忽略不计，接近检测限，甚至是负的N ₂ O或CH ₄通量。一旦数据质量得到了确认，结果可用于比较治疗之间或在一个赛季中（ 图5）气体流量动态。正如从五月和六月光通量值和误差线可以看出，造成通量的空间异质性的变化可能会显著，而且产生的通量率很高的条件下更加明显。这种变异是不寻常的，并强调了在这一技术复制足够的重视。

图1：工作流概述。这个协议的各种元素将开展在规划阶段，在该领域，在实验室里，和我Ñ ​​硅片。箭头表示工作流程的顺序，与腔体设计（及施工必要时）开始，并与数据分析总结。野外采样和样品分析之间的多盒/箭头代表超过一个实验的过程中多次采样日期的可能性。

图2样品的时机。样品的同时从多个室的集合的一个例子时序方案。商会数字显示在左边，时间点在顶部，与网格内的整分钟数列的采样时间。在这个例子中，四个单独的时间序列的各36分钟（每一个腔室）中进行，46分钟的空间内，以时间点之间的12分钟间隔内的一个序列，和腔室之间的2分钟的步行时间。对于这个假设的例子中，绥36分钟的时间序列tability会被事先标定来确定。而均匀间隔开的时间是没有必要的，它往往简化了采样方案。另外，研究人员可以单独记录每个采样时间点来确定采样间隔。

图3。流量计算，一个典型的静态室的时间序列，由N ₂在四个时间点过了36分钟采样周期过程中进行测定ø的浓度。显示的线性回归，其中的斜率得到通量率。

图4。质量控制。配对时间序列从相同的一组样品，但不同的气体都显示在WHI的CH瓶泄漏已被确定通过目测（红点）。A）CO ₂浓度随着时间的推移，B）N _{2 O}的浓度随着时间的推移。

从农田图5。合成的结果。N _{2 O}通量率在一个生长季节的过程。磁通值代表的6室中的平均值，采用四点的时间序列。误差线为标准误差。

Discussion

这里所描述的静态室为基础的方法是用于从土壤系统温室气体通量的测量的有效方法。它的组成部分的相对简单性使得它特别适合于条件或系统，其中多个基础设施密集的方法是不可行的。为了生成高质量的数据，但是，静态箱的方法，必须进行严格的注重实验设计^6。必须考虑的一个重要的考虑因素是土壤气体通量的空间变异，这可能会导致高变异重复室为基础的测量中。在设计的实验，因此，它是重要的，包括足够的重复，以进行统计分析提供足够的电力。权衡可能的，可以在维持足够的复制，并至少每处理4个重复的一般准则¹⁴进行研究处理的数量之间存在。

ontent“>如果测量的通量将被用于估算每天的排放量，空气温度，土壤温度和气体排放日变化必须被考虑在内。如果研究目标要求的测量将在早盘中段时获得的温度反映日常平均值，采样限制窗口可能会影响，可以切实进行监控室的数量。进行评估另外一个考虑是冲击，列入植物根系和地上部生物量或排除将会对气体通量。相对商会放置植物组织会影响通量数据的解释，特别是在_二氧化碳这里不仅微生物呼吸也根冠呼吸作用和光合作用必须是适当的平衡，对于这些因素的更多讨论，请参阅帕 ​​金和Venterea ⁸的情况下。

如前面所指出的，这一方法存在许多差异，包括腔室设计和采样体积。一种这样的变化是在采用注射器和收集瓶之间传送样品的方法。这里所描述的技术首先冲收集瓶与样品填充小瓶正压⁵之前。一种更常用的方法是样品从注射器转移到已用真空泵预抽空小瓶中，并采用非真空瓶无冲洗还报道了^8,17。另一个显著地步了一系列的办法是存在于数据分析和最适合所研究的系统的通量模型的选择。除了这里描述的线性回归法，非线性模型也可以采用，尤其是当使用较长的部署时间。这些模型包括由Hutchinson和莫西尔¹⁸开发的算法和推导它们的^19,20，由Wagner 等 ²¹所述的二次程序，以及非稳定由利文斯顿等人描述²²国家扩散通量估算。对于非线性通量模型的详细讨论，请参阅Parkin 等人 ¹² Venterea 等^[23]。

方法类似于静态箱的方法包括使用流量通过测量系统的与傅里叶变换红外（FTIR）光谱法作为备用注射器，采样和气相色谱法，以及腔室盖和采样的自动化通过各种手段。自动化系统启用更频繁的测量，减少了人员，而且还需要额外的基础设施投资。格雷斯等 ²⁴提供的选择和权衡自动化室为基础的N _{2 O}测量了广泛的总结。

从管理的和自然系统是很重要的通知基于过程的模型，了解管理EAST的影响，温室气体通量表征NT的做法，并告知减灾战略，并支持全球会计和气候变化模型。因此，虽然个别研究是信息在当地的规模，多少额外的价值是通过促进，并且从，对景观和大气之间的气体交换知识的一个全球性机构绘制而得。这是关键，因此，这些数据被收集和报告，确保长寿和互操作性与更广泛的知识基础的方法。这包括以下最佳实践，以确保数据质量，以及收集的配套措施和元数据的综合报告，以允许扩展名的调查结果超出了离散研究。可从GRACEnet项目和GRA ²⁵数据汇报优秀的指引。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
5.9 ml soda glass flat bottom 55 x 15.5 mm	Labco Limited	719W	Collection vials
16.5 mm screw caps with pierceable rubber septum	Labco Limited	VC309	Caps for  vials
90-well plastic vial rack, 17.1 mm well I.D.	Wheaton	868810	Rack for organizing vials
Regular bevel needles 23 G x 1"	BD	305193	Needles for sample collection
Stopcocks with luer connections, 1-way, male slip	Cole-Parmer	EW-30600-01	Stopcocks for syringes
30 ml syringe, slip tip	BD	309651	Syringes for sample collection
Stopwatch or timer	Various	N/A	For timing field sampling
Stainless steel or galvanized utility pans with rim, or fabricated stainless steel or PVC chambers and lids, dimensions as appropriate to experimental system	Various	N/A	Chamber anchor and lid - bottom cut out of anchor, holes for septum and vent tubing bored in lid
Gray butyl stoppers 20 mm	Wheaton	W224100-173	Chamber septa for syringe sampling - insert into hole bored in lid top
Tygon tubing 4.0 mm I.D. x 5.6 mm O.D.	Sigma-Aldrich	Z685623	Chamber vent tubing - insert in hole bored in lid side, flush with exterior, approximately 25 cm coiled in lid interior (a 1 ml syringe tip may be used as an attachment mechanism)
Adhesive foam rubber tape or HDPE O-ring	Various	N/A	Chamber sealing mechanism - fastened to underside of lid rim
Reflective  insulation, 0.3125" thickness	Lowe's	409818	Insulating and reflective coating - affix to exterior of chamber lid
Large metal binder clips, 2" size with 1" capacity, or manufactured draw latch as appropriate	Staples / McMaster	831610 (Staples) / 1863A21 (McMaster)	Lid attachment mechanism - for clamping lid to anchor during sampling
Gas chromatography equipment fitted with electron capture detector for nitrous oxide, infrared gas analyzer or thermal conductivity detector for carbon dioxide, flame ionization detector for methane	Various	N/A	For sample analysis