흉터 상처 수리의 마우스 태아의 피부 모델
Summary
During mammalian development, early gestational skin wounds heal without a scar. Here we detail a reliable and reproducible model of fetal scarless wound healing in the cutaneous dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.
Abstract
Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs across species but is age dependent. The transition from a scarless to scarring phenotype occurs in the third trimester of pregnancy in humans and around embryonic day 18 (E18) in mice. However, this varies with the size of the wound with larger defects generating a scar at an earlier gestational age. The emergence of lineage tracing and other genetic tools in the mouse has opened promising new avenues for investigation of fetal scarless wound healing. However, given the inherently high rates of morbidity and premature uterine contraction associated with fetal surgery, investigations of fetal scarless wound healing in vivo require a precise and reproducible surgical model. Here we detail a reliable model of fetal scarless wound healing in the dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.
Introduction
태아 피부 상처 임신 1 늦게까지 신속하고 scarlessly 치유. 태아 흉터 상처 수리는 정상 조직의 구조와 기능의 재생이 특징입니다. 흉터 표현형에 흉터에서의 전환은 인간 및 마우스 2,3에 배아 일 18 (E18)의 주위에 임신의 세 번째 임신에서 발생합니다. 성인에 비해, 상처 복구 태아 급속한 상피화, 결합 조직의 증착, 및 섬유 아세포 이동을 특징으로한다.
많은 연구 초기 태아의 개발 기간 동안 흉터 상처 치유의 현상에 대한 가능한 설명을 제안했다. 염증은 성인 상처 수리의 기본 구성 요소입니다; 그러나, 태아의 상처는 급성 염증 (4)의 부족을 특징으로한다. 이 단계 동안 여부 태아 면역계의 작용 미성숙 결과는 불분명하다. 최근 연구 제안이 풍부, 매트의 차이urity 및 E18 태아의 피부 대 E15에서 비만 세포의 기능 이상 마우스 3 흉터 표현형으로의 전환에 대한 책임이 있습니다. 다른 연구는 속성과 태아와 성인 상처 대 식세포의 풍요 로움의 차이가 태아의 상처 수리 (5) 동안 정상 세포 외 기질 (ECM)의 개혁에 대한 책임이 있음을 가정하는.
태아 및 성인 개발시 환경 요인의 차이도 상처 복구에 영향을 미칠 수 있습니다. Longaker와 동료들은 태아의 상처 액이 6 유체 상처 성인 없음에 비해 히알루 론산 자극 활동의 높은 수준을 보유하고 있음을 보여 주었다. 따라서, 태아 상처 환경에서 히알루 론산, 세포 운동성 및 확산에 도움이 미세 환경을 촉진하는 글리코 사 미노 글리 칸, 높은 수준의 초기 태아의 개발 과정에서 볼 수있는 흉터의 표현형에 대한 책임을 할 수있다. 태아는 사실에 근거 포인트의 다른 라인L 상처 환경은 상대적으로 저산소증과 성장 인자 7 풍부한 무균 양수에 잠겨있다. 그러나, 확실한 대답은 섬유 성 수리에 흉터 재생으로의 전환을 트리거 배아 중 중요한 사건이나 요인에 제공 없습니다.
태아의 흉터 치유 메커니즘 책임을 이해하는 것은 정확하고 재현성 모델을 필요로한다. 여기 세부 E16.5 (흉터) 및 E18.5 (흉터) 마우스 배아의 배부 태아 흉터 상처 치유의 재현 모델. 또한,이 모델의 경미한 변화는 이러한 태아 피부 및 상처 8,9의 유전자 발현 분석과 같은 추가의 연구들을 수행하는데 이용 될 수있다. 정확하게 시간이 초과 임신이 태아의 흉터 상처 치유 모델의 성공적인 반복 설에 중요한 점을 감안, 우리 과배란 초과 임신에 대해서도 상세하게 우리의 프로토콜입니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 제시된 수술 프로토콜은 먼저 우리의 실험실 (10)에 의해 2006 년에 출판 된 태아 쥐의 흉터 치유 절제 모델에 대해 설명합니다. 절제 상처 (11)의 다른 모델의 확립 외에, 뮤린 태아 흉터, 창상 치유의 모델 (12, 13)뿐만 아니라 존재한다. 원숭이, 양, 토끼, 쥐, 쥐 태아 흉터 상처 치유의 조사는 14 ~ 17보고되었다. 그러나 마우스는 그들의 비교적 낮은 당 일일 케이…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 (HPL에) NIH 보조금 R01 GM087609, (MTL에) (HPL에) 안토니 슈, NIH 보조금 U01의 HL099776의 명예에 잉그리드 라이 빌 슈에서 선물, Hagey 연구소에 대한로부터 연구비 일부 지원 소아 재생 의학 및 (MTL과 HPL에) 오크 재단. GGW 의학의 스탠포드 대학, 스탠포드 의료 과학자 훈련 프로그램에 의해 지원되며, NIGMS 훈련 보조금 GM07365했다. MSH는 CIRM 임상 연구원 교육 그랜트 TG2-01159에 의해 지원되었다. WXH가 노프 심장 혈관 재단 기금에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| 7-O MONOSOF Suture | eSuture | SN-1647G | |
| Surgical Forceps | Kent Scientific | INS650916 | |
| Micro-scissors | Kent Scientific | INS600127 | |
| Autoclip 9mm | Texas Scientific Instruments | 205060 | |
| Insulin Syringe | Thermo Fisher Scientific | 22-272-382 | |
| Black Pigment | AIMS | 242 | |
| BD Safety-Lok 3ml Syringe | BD Biosciences | 309596 | |
| Phosphate Buffered Saline | Life Technologies | 10010-049 | |
| OPMI-MD Surgical Microscope | Carl Zeiss Surgical Inc | ||
| Pregnant Mares Serum (PMS) | Millipore | 367222 | |
| Human Chorionic Gonadotropin (HCG) | Sigma-Aldrich | CG10 | |
| Povidone Iodine Prep Solution | Dynarex | 1415 | |
| Nair (depilatory cream) | Church and Dwight Co. | 22600267058 |
References
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