Taze İzole glomerulusların Podositler Tek kanallı Analizi ve Kalsiyum Görüntüleme

Daria V. Ilatovskaya; Oleg Palygin; Vladislav Levchenko; Alexander Staruschenko

doi:10.3791/52850

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Taze İzole glomerulusların Podositler Tek kanallı Analizi ve Kalsiyum Görüntüleme

10.9K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/52850

⸱

27 Haziran 2015

Daria V. Ilatovskaya¹ , Oleg Palygin¹ , Vladislav Levchenko¹ , Alexander Staruschenko¹

¹Department of Physiology, Medical College of Wisconsin

Bu makalede

Özet

Podositlerdeki hücre içi kalsiyum seviyelerindeki değişiklikler, glomerüllerin filtrasyon fonksiyonunu kontrol etmenin en önemli yollarından biridir. Burada, yeni izole edilmiş glomerüllerin podositlerinde gerçek zamanlı kalsiyum işlemenin ve tek iyon kanalları aktivitesinin tespit edilmesini sağlayan yüksek verimli bir yaklaşımı açıklıyoruz.

Özet

Podositlerin (renal glomerüler epitel hücreleri) glomerüler geçirgenliği düzenlediği ve glomerüler yapıyı koruduğu bilinmektedir; Podosit hasarının proteinüriye ve ayak sürecinin silinmesine yol açması nedeniyle bu hücrelerin çeşitli böbrek hastalıklarının patogenezinde anahtar bir rol olduğu belirlenmiştir. Daha önce, çeşitli endojen ajanların podositlerde hücre içi Ca^{2 +}konsantrasyonunda dramatik bir aşırı yüklenmeye neden olabileceği ve muhtemelen albüminüriye yol açabileceği ve bunun muhtemelen kalsiyum ileten iyon kanalları yoluyla meydana geldiği bildirilmişti. Bu nedenle, hem normal koşullar altında hem de çeşitli patolojik durumlarda podositlerde kalsiyum işlemeyi incelemek önemli görünmektedir. Bununla birlikte, mevcut deneysel yaklaşımlar, kültürlenmiş ve transfekte edilmiş hücrelerle biraz sınırlı kalmıştır. Bu tür çalışmalar için iyi bir temel modeli temsil etseler de, esasen glomerulusun doğal ortamından çıkarılırlar. Burada, yeni izole edilmiş bütün glomerulusun bir parçası olarak podositleri inceleme metodolojisini açıklıyoruz. Bu hazırlık, hala kılcal damarlara bağlı olan podositlerin fonksiyonel potansiyelini korur; Bu nedenle, podositler, glomerül filtrasyon aparatının ana kısımlarını koruyan ortamda kalır. Bu el yazması, 1) oransal konfokal floresan mikroskobu yardımıyla kalsiyum konsantrasyonu değişikliklerinin gerçek zamanlı tespitine ve 2) yeni izole edilmiş glomerüllerin podositlerindeki tek iyon kanalları aktivitesinin kaydedilmesine izin veren iki deneysel yaklaşımı detaylandırmaktadır. Bu metodolojiler, araştırmacıların çeşitli ajanların uygulamalarına yanıt olarak hücre içi kalsiyum işlemedeki akut değişiklikleri çözmelerine, hücreler içindeki bazal kalsiyum konsantrasyonunu ölçmelerine (örneğin, hastalık ilerlemesini değerlendirmek için) ve tek iyon kanalları düzeyinde kalsiyum iletkenliğini değerlendirmelerine ve manipüle etmelerine olanak tanıyan glomerulusun doğal ortamının avantajlarını kullanır.

Giriş

Böbrekler, çeşitli maddeler için homeostatik dengeyi korumak ve toplam kan basıncını belirleyen bir şekilde kan hacmini düzenler. Hiper veya hipotansiyon arasında değişen renal filtrasyon, geri emiliminin veya salgı kurşun bozukluklar veya eşlik patolojik durumlar, sonunda böbrek nakli gerektiren son dönem böbrek hastalığı için. kapiller endotel, bazal membran ve epitel hücreleri tek-hücre tabakası - - yarık diyafram bütünlüğü ve işlevi ¹ korunmasında önemli bir rol oynamaktadır Podositler renal filtreleme birimi (glomerulus) üç tabakadan oluşur. Permselektif glomerüler filtre Disfonksiyon gibi proteinüri olarak makromoleküllerin, idrar kaybına neden olur.....