인두 아치 전의 VIVO 문화는 심장과 근육 전구 세포와 그 틈새를 연구
Summary
Here, we present a protocol to culture pharyngeal arches to study the biology of heart and muscle progenitor cells and their microenvironment.
Abstract
개발 배아의 인두 중배엽은 머리와 심장 근육의 넓은 지역에 기여한다. 우리는 (또한 아가미 아치로 알려진) 인두 아치와 머리와 심장 전구 세포 개발 생체를 연구하는 새로운 방법을 개발했다. 이 방법을 사용하여, 우리는 최근 두 번째 인두 아치 자기 갱신 심장 전구 세포를 포함하고 마우스 심장 개발하는 동안 조상의 확장을위한 미세 역할을한다는 설명했다. 전구 세포는 아치 내부 분화와 광대 남아 있지만 신속하게 아치에서 마이그레이션 할 기능 심근된다. 우리는 또한 첫 번째 인두 아치는 아치를 떠난 후 myotubes에 상승을주는 근육 전구 세포를 포함보고했다. 여기, 우리는 해부와 마우스 배아 개발에서 제 1 및 제 2 인두 아치의 체외 배양 과정을 보여줍니다. 이 방법은 머리와 심장 전구 / 근육 dev에 공부를 할 수 있습니다심근 및 세부 생체에 myotube 형성을 포함 elopment.
Introduction
인두 중배엽 세포는 심장의 부분과 인두 근육 일으킨다. 배아 개발하는 동안, 두 번째 심장 분야에서 다 능성 심장 전구 세포는 인두 중배엽에서 마이그레이션 및 심장 유출 관과 우심실을 채우고, 그 이상 개발은 밀접하게 출생 결함과 출생 defect-의 선천성 심장 질환의 주요 원인과 관련된 인간 1-3 관련 사망. 최근의 연구는 인두 중배엽은 중배엽 심장 – 두개 안면 개발 4의 중요한 부분 만들기, 마음뿐만 아니라, 근육을 머리에 기여하고 있음을 증명하고있다. 따라서, 유도, 증식 및 인두 중배엽에서 머리와 심장 전구 세포의 분화를 포함하여 개발 프로세스가 활성화 조사 5-7 받고있다.
최근까지, 심장 전구 세포가 팽창 witho를 받아야하는지 여부 알려지지그들의 셀룰러 환경에 대한 정보의 부족으로 인해 부분적 UT 분화. 우리의 최근의 연구는 인두 아치가 심장과 근육 조상의 갱신을위한 미세 역할을하고 몇 주에 걸쳐 8 생체 전 배양 될 수 있음을 시사한다. 이 이식편 방법은 심장 – 두개 안면 전구 세포 생체의 개발을 연구하는 새롭고 독특한 기회를 제공합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
이 비디오에서는, 우리는 분리하고 9.5 일 이전 마우스 배아의 첫 번째 문화와 두 번째 인두 아치하는 방법을 보여줍니다. 인두 아치, 첫 번째 아치 8에서 두 번째 아치와 머리 근육 전구 세포 -in 배아 10, 11시에 마음을 만들기 위해 멀티 강력한 심장 전구 세포 – 빌딩 블록을 포함하는 개발 배아 (9)의 craniolateral 측면에 표시 부푼를 과도 분할된다 .
인두 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We thank Kwon laboratory members for helpful discussions. This work was supported by grants from NHLBI/NIH (R01HL111198) and Maryland Stem Cell Research Fund (MSCRF).
Materials
| FBS | Hyclone | SH30071.03 | |
| PBS + Ca2 + Mg2 | Corning | 21-030-CV | |
| 10cm petri plates | Fishersci | FB0875712 | |
| Scissor | |||
| Dissection forceps | |||
| Serum Free Media: | |||
| IMDM | Cellgro | 15-016-CV | |
| Ham’s F12 | Cellgro | 10-080-CV | |
| N2-SUPPLEMENT | Gibco | 17502-048 | |
| B27-retinoic acid | Gibco | 12587-010 | |
| 10% BSA (in PBS) à (Invitrogen Cat#. P2489) | Life Sciences | P2489 | |
| 100X Glutamine (Gibco Cat.# 25030-081) | Gibco | 35050-61 | |
| 100X Pen/Strep (Gibco Cat#. 15070-063) | Gibco | 15140-122 | |
References
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