Larval zebrafish are adapted to feed on zooplankton. It is possible to capitalize on this natural feature in the laboratory by growing first feeding fish together in the same system with live saltwater rotifers. This “polyculture” strategy promotes high growth and survival with minimal labor and disturbance to the larvae.
The zebrafish (Danio rerio) is a model organism of increasing importance in many fields of science. One of the most demanding technical aspects of culture of this species in the laboratory is rearing first-feeding larvae to the juvenile stage with high rates of growth and survival. The central management challenge of this developmental period revolves around delivering highly nutritious feed items to the fish on a nearly continuous basis without compromising water quality. Because larval zebrafish are well-adapted to feed on small zooplankton in the water column, live prey items such as brachionid rotifers, Artemia, and Paramecium are widely recognized as the feeds of choice, at least until the fish reach the juvenile stage and are able to efficiently feed on processed diets. This protocol describes a method whereby newly hatched zebrafish larvae are cultured together with live saltwater rotifers (Brachionus plicatilis) in the same system. This polyculture approach provides fish with an “on-demand”, nutrient-rich live food source without producing chemical waste at levels that would otherwise limit performance. Importantly, because the system harnesses both the natural high productivity of the rotifers and the behavioral preferences of the fish, the labor involved with maintenance is low. The following protocol details an updated, step-by-step procedure that incorporates rotifer production (scalable to any desired level) for use in a polyculture of zebrafish larvae and rotifers that promotes maximal performance during the first 5 days of exogenous feeding.
zebrafish (Danio rerio), वैज्ञानिक विषयों की एक बढ़ती हुई संख्या में उपयोग एक पूर्व प्रख्यात प्रयोगशाला जानवर है लेकिन सहित विकास आनुवंशिकी, विष विज्ञान, व्यवहार, मत्स्य पालन, पुनर्योजी जीव विज्ञान, और कई मानव विकारों 1 की मॉडलिंग के लिए ही सीमित नहीं – 5। प्रजातियों प्रयोगशाला में बनाए रखने के लिए अपेक्षाकृत आसान है, उनकी संस्कृति 6 के साथ जुड़े प्रबंधन की चुनौतियों का एक नंबर रहे हैं। इनमें से सबसे प्रमुख मछली पहले गैस मूत्राशय मुद्रास्फीति 7 के लिए बाद में खिलाने के लिए शुरू हो, खासकर जब लार्वा पालन है। विकास के 5 दिनों के विशेष रूप से महत्वपूर्ण 7 जा रहा है – सामान्य, नियंत्रित परिस्थितियों में, इस विकास घटना के बाद 3 से 5 ~ में दिन बाद निषेचन (DPF), होता है। फ़ीड आइटम, diges उचित आकार का होना चाहिए – इस चरण के दौरान केंद्रीय तकनीकी कठिनाई पर्याप्त रूप से पहले खिला लार्वा की पोषण संबंधी मांगों को पूरा करने के लिए हैसंवर्धन के टैंक में अत्यधिक बर्बादी बनाने के बिना लगभग एक सतत आधार पर आकर्षक है, और उपलब्ध tible,। ऐतिहासिक दृष्टि से इस दिनचर्या पानी विनिमय 8,9 के साथ-साथ, टैंक में मछली के लिए चारा की कई छोटी मात्रा में देने से आम तौर पर हासिल किया गया है। इन तरीकों में कुछ हद तक सफल रहे हैं, वे, अक्षम हैं उच्च श्रम आदानों की आवश्यकता होती है, और केवल चर और विकास और अस्तित्व के 10 के सीमित दरों वापसी।
प्रकृति में, zebrafish लार्वा संभवतः पानी कॉलम 11 में प्रचुर मात्रा में छोटे प्राणीमन्दप्लवक वर्तमान पर खिलाओ। इस कारण से, इस तरह के Paramecium, रोटीफर्स, और Artemia के रूप में रहते फ़ीड शामिल है कि larviculture प्रोटोकॉल आम तौर पर 7 सबसे कुशल हैं। 2010 में, सबसे अच्छा और सह लेखक यह बहिर्जात खिला 12 के पहले 5 दिनों के लिए खारे पानी रोटीफर्स के साथ स्थिर, खारे पानी में लार्वा zebrafish विकसित करने के लिए संभव था कि प्रदर्शन किया। दोहन जो यह दृष्टिकोण,तों rotifer संस्कृतियों के प्राकृतिक उच्च उत्पादकता कम श्रम इनपुट 12,13 साथ लार्वा विकास और अस्तित्व की पैदावार बहुत ऊंची दरों, पानी प्रदूषण के बिना पर्याप्त, बेहद पौष्टिक शिकार प्रदान करने के लिए। हाल के वर्षों में दुनिया भर में प्रयोगशालाओं की संख्या बढ़ रही इस प्रोटोकॉल के रूपांतरों को गोद लिया है, और कई अब नर्सरी प्रणालियों 14 का समर्थन करने के लिए एक सतत फैशन में रोटीफर्स संवर्धन कर रहे हैं।
पिछले कई वर्षों से, rotifer / zebrafish polyculture और rotifer उत्पादन के लिए दोनों तरीकों का परिष्कृत और अधिक मानकीकृत और आसानी से स्केलेबल बनने के लिए सुधार किया गया है। यह लेख एक के लिए कदम-दर-कदम निर्देश) सतत और मजबूत rotifer उत्पादन और 2) बहिर्जात खिलाने के पहले 5 दिनों के लिए मछली के मजबूत विकास का समर्थन करने के लिए इस्तेमाल rotifer / zebrafish polyculture प्रणाली की स्थापना प्रदान करता है।
एक ही टैंक में रोटीफर्स के साथ zebrafish लार्वा पहले खिला मछली खिलाने के लिए एक सतत rotifer संस्कृति प्रणाली की स्थापना और रखरखाव, और संवर्धन: जल्दी लार्वा zebrafish के भोजन के लिए rotifer polyculture विधि के सफल क्रियान्वयन प्रभाव…
The authors have nothing to disclose.
देखभाल और इस प्रोटोकॉल में वर्णित प्रतिनिधि परिणामों के लिए उत्पन्न मछली का उपयोग बोस्टन बच्चों के अस्पताल, प्रोटोकॉल # 14-05-2673R संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा निर्धारित दिशा निर्देशों के साथ पूर्ण अनुसार प्रदर्शन किया गया था।
Rotifer Culture Infrastructure | |||
100 Liter Culture Vessel | Aquaneering | Custom | Polycarbonate culture vessel, conical bottomed, with drain valve |
5 Gallon Culture Bucket Kit | Reed Mariculture | CCS Starter Kit | Small volume culture vessel for small facilities |
Rigid Clear Tubing 1/2" O.D., 36” | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Rigid clear tubing for air delivery |
Mesh tube | Pentair Aquatic Ecosystems | RT444X | Mesh tube support for floss filter |
Rotifer Floss | Reed Mariculture | Rotifer floss 12” x 42” | Particulate waste trap |
Peristaltic Metering Timer Pump, 5 GPD | Grainger | 38M003 | Metering pump with timer for dosing feed to rotifers |
Peristaltic Metering Timer Pump, 1-100 mL/h (for smaller-scale culture) | Coral Vue | SKU: IC-LQD-DSR | Metering pump with timer for dosing feed to rotifers |
Silicone Tubing | Cole Parmer | Tubing for algae delivery to rotifer vessel | |
Rigid Clear Tubing " O.D.,36” | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Rigid clear tubing for air delivery to algae paste |
Rigid Clear Tubing O.D., 36” | Pentair Aquatic Ecosystems | 16025 | Rigid clear tubing for algae delivery |
Rotifers | |||
Live Rotifers Brachionus plicatilis Type L | Reed Mariculture | Type L 5 million | Rotifer stock culture for system startup |
Rotifer Feed | |||
Sodium hydroxymethylsulfonate | Reed Mariculture | ClorAm-X® 1lb tub | Ammonia reducer for algae feed mix |
Sodium Bicarbonate | Fisher Scientific | S25533B | pH buffer for algae feed mix |
Microalgae concentrate | Reed Mariculture | Rotigrow Plus® 1 liter bag | Nutritionally optimized rotifer feed |
Water Preparation | |||
Reef Crystals Reef Salt | That Fish Place | 198210 | Salt for making culture water (NOTE: this item is an example only; any contaminant free salt formulations may be used). |
Refractometer | Pentair Aquatic Ecosystems | SR6 | measuring salinity |
Rotifer Culture Equipment | |||
Plankton Collectors 12" Dia, 53 microns | Pentair Aquatic Ecosystems | BBPC20 | Mesh screen for collecting rotifers |
Scrub Pads | Pentair Aquatic Ecosystems | SCR-58 | Scrub pad for cleaning inside of culturing vessels |
Scrub Brush | |||
Bucket | Grainger Supply | 43Y530 | Graduated bucket for mixing culture water |
Hatching Jar | Pentair Aquatic Ecosystems | J30 | Storage of algae feed mix |
Lugol’s Solution, Dilute | Fisher Scientific | S99481 | Agent used to immobilize live rotifers for counting |
Sedgewick-Rafter plankton counting slide with grid | Pentair Aquatic Eco-Systems | M415 | Counting rotifers |
Miscelleneous | |||
Tea Strainer | Kitchenworks | 971972 | Used for collecting zebrafish embryos after spawning |