Anesthetized चूहों गैर शारीरिक प्रणालीगत रक्तचाप है, जो स्वायत्तता रक्त चाप और स्वायत्त तंत्रिका तंत्र के बीच अंतरंग संबंध दिया टोन के सार्थक मूल्यांकन precludes प्रदर्शन । इस प्रकार, एक उपंयास विधि को एक साथ गुर्दे सहानुभूति तंत्रिका गतिविधि और होश चूहों में नसों में अर्क के साथ रक्त दबाव रिकॉर्ड करने के लिए रेखांकित किया है ।
गुर्दे सहानुभूति नसों दोनों शारीरिक और pathophysiological घटना के लिए महत्वपूर्ण योगदान करते हैं । गुर्दे सहानुभूति तंत्रिका गतिविधि का मूल्यांकन (RSNA) क्रोनिक गुर्दे की बीमारी, उच्च रक्तचाप, दिल की विफलता, मधुमेह और मोटापा जैसे अनुसंधान के कई क्षेत्रों में बहुत रुचि है । सहानुभूति तंत्रिका तंत्र की भूमिका का स्पष्ट मूल्यांकन इस प्रकार प्रयोगात्मक परिणाम और रोग प्रक्रियाओं की समझ की उचित व्याख्या के लिए आवश्यक है । RSNA को चूहों सहित anesthetized कुतर में पारंपरिक रूप से मापा गया है । हालांकि, चूहों आमतौर पर बहुत कम प्रणालीगत रक्तचाप और संज्ञाहरण और सर्जरी के दौरान कई घंटे के लिए hemodynamic अस्थिरता प्रदर्शन । RSNA की सार्थक व्याख्या इस गैर शारीरिक राज्य द्वारा, सहानुभूति तंत्रिका टोन और हृदय की स्थिति के बीच अंतरंग संबंधों को देखते हुए स्थापित किया गया है । पारंपरिक दृष्टिकोण की इस सीमा को संबोधित करने के लिए, हम सचेत, स्वतंत्र रूप से चलती चूहों में RSNA को मापने के लिए एक नई विधि विकसित की है । चूहों लंबे रक्त दबाव के रूप में अच्छी तरह से एक jugular शिरापरक अर्क कैथेटर और RSNA की प्रत्यक्ष रिकॉर्डिंग के लिए कस्टम डिजाइन द्विध्रुवी इलेक्ट्रोड के सतत निगरानी के लिए रेडियो-telemeters के साथ साधन थे । एक 48-72 घंटे वसूली अवधि के बाद, जीवित रहने की दर १००% थी और सभी चूहों सामांय व्यवहार किया । इस समय-बिंदु पर, RSNA सफलतापूर्वक चूहों के ८०% में दर्ज किया गया था, व्यवहार्य संकेतों के साथ 4 और 5 दिनों के बाद ७०% और चूहों के ५०% में सर्जरी, क्रमशः हासिल की । शारीरिक रक्त दबाव सभी चूहों में दर्ज किया गया (116 ± 2 mmHg; n = 10) । दर्ज RSNA खाने और संवारने, के रूप में अच्छी तरह से साहित्य में स्थापित के साथ वृद्धि हुई है । इसके अलावा, RSNA ganglionic नाकाबंदी और औषधीय एजेंटों के साथ रक्तचाप के मॉडुलन द्वारा मान्य किया गया था । साथ ही, सचेत, स्वतंत्र रूप से चलती चूहों में RSNA की स्पष्ट रिकॉर्डिंग के लिए एक प्रभावी और प्रबंधनीय विधि वर्णित है ।
जैव चिकित्सा अनुसंधान के कई क्षेत्रों में चूहों का उपयोग करने में रुचि अनगिनत आनुवंशिक रूप से इंजीनियर मॉडल के विकास के साथ विस्तार करने के लिए जारी है । अधिकांश भाग के लिए, तकनीकी प्रगति शरीर विज्ञान में चूहों की वृद्धि हुई उपयोग के साथ तालमेल रखा है और अब चूहों में महत्वपूर्ण शारीरिक मापदंडों को मापने के लिए विशेष रूप से विकसित लघुकृत उपकरणों की एक प्रभावशाली चयन है. हालांकि चेतन चूहे में स्वायत्त तंत्रिका टोन के प्रत्यक्ष माप के लिए telemetric उपकरणों के लिए एक दशक से अधिक के लिए उपलब्ध किया गया है, होश में चूहों में तंत्रिका गतिविधि का आकलन करने के लिए लघुकृत उपकरणों वर्तमान में उपलब्ध नहीं हैं । जांचकर्ताओं आमतौर पर अप्रत्यक्ष तरीकों के साथ स्वायत्त तंत्रिका तंत्र के योगदान का मूल्यांकन द्वारा इस सीमा दरकिनार (यानी प्लाज्मा या मूत्र catecholamines, औषधीय स्वायत्त नाकाबंदी, रक्त के पैटर्न के वर्णक्रम विश्लेषण दाब/हृदय की दर)1.
हालांकि इन दृष्टिकोणों बहुमूल्य जानकारी प्रदान करते हैं, परिणाम समग्र स्वायत्त स्वर की एक वैश्विक तस्वीर है, बल्कि जांच के तहत घटना को नसों के पृथक आबादी के असतत योगदान खुलासा से । वैकल्पिक रूप से, विशिष्ट नसों से गतिविधि की प्रत्यक्ष रिकॉर्डिंग anesthetized चूहों, जो चिंताओं के एक भीड़ बन गया में मार डाला गया है । यह एक anesthetized माउस में शारीरिक सीमा के भीतर कई घंटे के लिए शल्य चिकित्सा के बाद स्थिर रक्तचाप बनाए रखने के लिए मुश्किल है । वास्तव में, प्रयोगों के इन प्रकार में, रक्तचाप अक्सर रिपोर्ट या बेहद कम स्तर पर प्रस्तुत किया जाता है (यानी 60-80 mmHg बनाम > एक चेतन माउस में 100mmHg)2। हृदय प्रणाली की कमजोरी एक anesthetized माउस तैयारी में प्रदर्शित अक्सर स्वायत्त तंत्रिका गतिविधि का सार्थक मूल्यांकन precludes, रक्तचाप और सहानुभूति टोन3के बीच codependent संबंध दिया, 4.
इस सीमा को संबोधित करने के लिए, गुर्दे सहानुभूति तंत्रिका गतिविधि की प्रत्यक्ष रिकॉर्डिंग के लिए एक नई विधि (RSNA) होश में, अनर्गल चूहों, उनके घर पिंजरों के भीतर अबाधित विकसित किया गया था. इस तकनीक के सफल क्रियान्वयन के लिए शल्य और प्रायोगिक दोनों दृष्टिकोण का विस्तार से वर्णन किया गया है. इस तैयारी के लिए एक साथ RSNA के अलावा radiotelemetry के माध्यम से धमनी दबाव रिकॉर्ड करने के लिए सक्षम बनाता है, जोड़ा क्षमता के साथ नसों में माउस को परेशान किए बिना ब्याज की एजेंटों को भ्रमित करने के लिए ।
चौबीस घंटे सर्जरी के बाद, चूहों सामांय व्यवहार और दर्द या संकट के लक्षण प्रदर्शित नहीं है । प्रायोगिक रिकॉर्डिंग तब शुरू हो सकता है ४८ करने के लिए ७२ घंटे के बाद सर्जरी, जबकि माउस आराम से अपने घर पिंजरे में भोजन, पानी और पर्यावरण संवर्धन के लिए अप्रतिबंधित पहुंच के साथ टिकी हुई है । स्पष्ट RSNA निशान प्रस्तुत कर रहे हैं और इस तंत्रिका जनसंख्या के सामान्य शारीरिक आंदोलनों के लिए विशेषता प्रतिक्रियाओं (जैसे खाने और सौंदर्य के रूप में) पशु के प्रणालीगत रक्तचाप के औषधीय मॉडुलन के अलावा प्रदर्शन कर रहे हैं. RSNA संकेत की गुणवत्ता और विशिष्टता ganglionic नाकाबंदी द्वारा आगे मान्य है । इस पांडुलिपि audiovisual इस तकनीक का एक शुरू में प्रकाशित वर्णन करने के लिए पूरक शामिल5।
इस के साथ साथ हम रेखांकित किया है, और प्रदर्शन के लिए जागरूक चूहों में RSNA के लक्षित मूल्यांकन के लिए एक उपंयास विधि मांय, को स्थानांतरित करने के लिए स्वतंत्र और आराम से अपने घर पिंजरों में विश्राम । एक धम?…
The authors have nothing to disclose.
S.M.H. स्वास्थ्य अनुसंधान (CIHR) के लिए कनाडा के संस्थानों से postdoctoral फैलोशिप द्वारा समर्थित था, हार्ट एंड स्ट्रोक फाउंडेशन ऑफ कनाडा (HSFC) और अलबर्टा स्वास्थ्य समाधान (AiHS) को नया रूप; J.E.H. राष्ट्रीय हृदय, फेफड़े और रक्त संस्थान PO1HL-५१९७१ से एक अनुदान द्वारा समर्थित है ।
Teflon-coated stainless steel multiple stranded wire | A-M Systems | 793200 | 0.001in diameter bare; 0.0055in diameter coated |
#11 Scalpel Blade | Fisher Scientific | ALMM9011 | |
Soldering Iron and solder | Any make or model suitable | ||
Male miniature pin connectors | A-M Systems | 520200 | Brass with gold plating |
Female miniature pin connectors | A-M Systems | 520100 | Brass with gold plating |
Heat Shrink tubing | Radio Shack | Model #: 278-1610 | Catalog #: 2781610 | 1.6 mm diameter |
Polyethylene 90 (PE90) tubing | VWR | CA-63018-703 | 0.86mm inner diameter; 1.27mm outer diameter |
Dissecting microscope | Leica Microsystems | Leica M80 | Any make or model also suitable |
Polyethylene 10 (PE10) tubing | Braintree Scientific | PE10 50 FT | 0.28mm inner diameter; 0.61mm outer diameter |
Super Glue Liquid | Loctite | n/a | Liquid Formula; any brand suitable |
Super Glue Gel | Loctite | n/a | Gel Formula; any brand suitable |
Polyethylene tubing | Scientific Commodities | BB31695-PE/13 | For pedestal 2.7mm inner diameter; 4.0mm outer diameter |
Hospital Sterilization Services & Ozone Sterilization packets | Contact local hospital sterilization services | ||
Isoflurane anesthesia | Abbott | 05260-05 | |
Deltaphase isothermal heat pads & surgical table | Braintree Scientific | 39OP | Keep heat pads warm in a 37°C water bath; Corresponding surgical table essential |
Glycopyrrolate | Amdipharm Mercury Company Limited | n/a | |
Isoflurane vaporizer system & flow gauge | Braintree Scientific | VP I | Include medical grade oxygen supply |
Tissue scissors | Fine Science Tools | 14173-12 | |
Fine spring scissors | Fine Science Tools | 15006-09 | |
Small cotton-tipped applicators | Fisher Scientific | 23400100 | |
Fine Straight Forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | #5, FST by Dumont Biologie Tip |
Angled Forceps | Fine Science Tools | 11251-35 | #5/45 FST by Dumont |
Small Absorbent Spears | Fine Science Tools | 18105-03 | |
Parafilm | Sigma Aldrich | BR701605 ALDRICH | |
Kwik-Sil 2 component Silicone Polymer | World Precision Instruments (WPI) | KWIK-SIL | Purchase extra specialized tips from WPI |
5-0 Polysorb Suture | Tyco Healthcare | n/a | |
6-0 Silk Suture | Braintree Scientific | SUT-S 104 | Deknatel brand, spool |
Radiotelemetry Probe | Data Sciences International (DSI) | TA11-PAC10 | |
Radiotelemetry Receiver | Data Sciences International (DSI) | PhysioTel RPC-1 | |
Ambient Pressure Reference | Data Sciences International (DSI) | Apr-01 | |
Pressure Output Adapter | Data Sciences International (DSI) | R11CPA | |
Rena Pulse Tubing | Braintree Scientific | RPT-040 | |
Infusion Swivel | Instech Solomon | 375/D/22 | |
Swivel Support Arm & Mount | Instech Solomon | SMCLA | |
Polysulfone button | Instech Solomon | LW62S/6 | |
Stainless steel spring | Instech Solomon | PS62 | |
Vetbond surgical adhesive | 3M | n/a | |
Triple Antibiotic Ointment | Fougera | n/a | |
PowerLab 8 Channel Data Acquisition System & Software | ADInstruments | PowerLab 8/35 | |
PVC Insulated Cable | Belden | PVC Audio Connection Cable 32 AWG | |
Preamplification Headstage | Dagan Corporation | Model 4002 | |
Differential Amplifier | Dagan Corporation | EX4-400 | |
Sodium Nitroprusside | Sigma Aldrich | 71778-25G | |
Phenylephrine | Sigma Aldrich | P6126-5G | |
Sterile Physiological Saline 0.9% NaCl | Beckton Dickinson | Contact local hospital supplier | |
hexamethonium | Sigma Aldrich | H0879-5G | |
Stainless Steel top anti vibration table | n/a | n/a | Custom designed in-house; Solid steel plate on a benchtop is also suitable |
Faraday cage | n/a | n/a | Custom designed and constructed in-house |
Small animal hair trimmer | n/a | n/a | Drugstore, men's beard trimmer suitable |
Dipilatory Cream | n/a | n/a | Veet brand, sensitive skin formula |
10% Povidone Iodine | Purdue Products | Betadiene | |
70% Ethanol | n/a | n/a | |
Steel microretractors | n/a | n/a | Made in-house. Bend a steel paper clip & loop 4-0 silk to form a retractor |
Hemostats | Fine Science Tools | 13011-12 | |
Heat Gun | Fisher Scientific | 09-201-27 |