وتقليد من المكروية ورم: طريقة بسيطة لتوليد بالسكان خلية المخصب والتحقيق بين الخلايا الاتصالات
Summary
We adapted a permeable microporous membrane insert to mimic the tumor microenvironment (TME). The model consists of a mixed cell culture, allows simplified generation of highly enriched individual cell populations without using fluorescent tagging or cell sorting, and permits studying intercellular communication within the TME under normal or stress conditions.
Abstract
فهم التفاعلات غيروي مبكرة بين الخلايا السرطانية والمحيطة سدى غير سرطانية المهم في توضيح الأحداث التي أدت إلى تفعيل انسجة وإنشاء المكروية الورم (TME). عدة في التجارب المختبرية والنماذج الحية من TME تم تطويرها. ومع ذلك، في عام هذه النماذج لا تسمح بسهولة عزل السكان الخلية الفردية، في ظل ظروف غير تكدير، لمزيد من الدراسة. للتحايل على هذه الصعوبة، ونحن قد استخدمت في المختبر نموذج TME باستخدام الركيزة نمو الخلايا تتكون من نفاذية إدراج غشاء الصغيرة التي يسهل اختراقها تسمح الجيل بسيط من السكان الخلية التخصيب نمت بشكل وثيق، ولكن بشكل منفصل، على جانبي غشاء إدراج لتعاون موسع مرات ğ ثقافة. من خلال استخدام هذا النموذج، ونحن قادرون على توليد المخصب إلى حد كبير الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAF) السكان من العادية الخلايا الليفية الإنسان مضاعفا يليشارك في ثقافة (120 ساعة) مع خلايا سرطان الثدي النقيلي الإنسان إلى حد كبير، من دون استخدام العلامات الفلورية و / أو فرز الخلايا. بالإضافة إلى ذلك، عن طريق تحوير حجم المسام من إدراج، يمكننا السيطرة على الوضع من الاتصالات بين الخلايا (على سبيل المثال، الاتصالات تقاطع الفجوة، والعوامل يفرز) بين اثنين من السكان الخلية مغاير، الذي يسمح التحقيق في الآليات الكامنة وراء تطور TME، بما في ذلك دور نفاذية الفجوة تقاطع. ويقدم النموذج بوصفه أداة قيمة في تعزيز فهمنا للأحداث الأولية مما أدى إلى بدء السرطان سدى، وتطور في وقت مبكر من TME، وتأثير تحوير للسدى على استجابات الخلايا السرطانية الى العوامل العلاجية.
Introduction
المكروية الورم (TME) هو نظام معقد للغاية يتكون من خلايا سرطان أن تتعايش وتتطور جنبا إلى جنب مع سدى المضيف. يتكون هذا المكون انسجة عادة من الخلايا الليفية، myofibroblasts، والخلايا البطانية، ومختلف مكونات جهاز المناعة، وكذلك المصفوفة خارج الخلية 1. والمكونة كبير، في كثير من الأحيان أن غالبية هذه سدى، والخلايا الليفية تفعيلها، وكثيرا ما يشار إلى الخلايا الليفية المرتبطة السرطان أو الخلايا الليفية المرتبطة سرطان (CAF) 2،3. على عكس الخلايا الليفية الطبيعي، وعدم تفعيلها، تساهم مقاهي لبدء الورم، التقدم، الأوعية الدموية، والغزو، ورم خبيث، وتكرار 4-11 في مجموعة واسعة من السرطانات بما فيها سرطان الصدر والبروستاتا والرئة والبنكرياس والجلد والقولون والمريء، و المبيض 5،6،12-17. ومع ذلك، فإن الطبيعة الدقيقة للمساهمة مقاهي في جميع أنحاء المرضية السرطان لا تزال محددة بشكل واضح. وعلاوة على ذلك، وقد أثبتت الأدلة السريرية قيمة النذير من مقاهي، ربط وجودهم إلى الأورام الخبيثة عالية الجودة، وفشل العلاج، وعموما الفقراء 10،18،19 التكهن.
بوضوح، وتعزيز فهمنا للأحداث الشروع في التنمية CAF، فضلا عن الاتصالات بين الخلايا الوساطة دورها داخل TME، قد توفر أهداف علاجية جديدة مثيرة والاستراتيجيات المحسنة التي يمكن أن تحسن نتائج المرضى. وتحقيقا لهذا الهدف، وقد وضعت عدة في الجسم الحي ونماذج في المختبر. في حين النهج في الجسم الحي هي أكثر تعبيرا من TME المرضى، لديهم قيود، بما في ذلك التعقيد وعدم التجانس داخل وبين الأورام على حد سواء. وعلاوة على ذلك، وعينات من الورم من المواضيع الإنسان في كثير من الأحيان تمثل درجة عالية من التطور TME، ولا تسمح فهم TME بدء الأحداث. دراسات على حيوانات التجارب توفر بعض المزايا، لكن تعميم البيانات المأخوذة من الحيوانات إلى البشر وينبغي أن يتم بحذر وذلك بسبب الاختلافات في physiology بين البشر والحيوانات مثل القوارض (على سبيل المثال، الكيمياء ثيول 20، معدل الأيض 21، وتحمل الإجهاد 22، الخ). وعلاوة على ذلك، على عكس البشر، والتي هي غير متجانسة وراثيا في الطبيعة، وعادة ما تكون ولدت حيوانات المختبر إلى التجانس. أيضا، غالبا ما يكون من الصعب دراسة التغيرات الفسيولوجية عابرة وتغيرات الخلية النمط الظاهري، وكذلك للسيطرة على المعلمات التجريبية محددة باستخدام الحيوانات مثل القوارض. وهكذا، في المختبر 2- و 3 الأبعاد (2D و 3D) نماذج زراعة الأنسجة كثيرا ما تستخدم لتعزيز فهم أساسي للتنمية TME. وعلى الرغم من عدم وجود صورة دقيقة لتعقيد النظم في الجسم الحي، وهذه النماذج تقدم المزايا التي تسهل كثيرا التحقيقات الميكانيكية. في المختبر نماذج تسمح لتحليل أكثر بساطة، وركزت، وفعالة من حيث التكلفة TME، حيث دلالة إحصائية البيانات التي يمكن أن تتولد فيخلايا خالية من الاختلافات المنهجية التي تنشأ في الحيوانات.
وهناك عدة أنواع من النظم في المختبر. تتكون الأكثر شيوعا TME في المختبر النموذجين من أحادي الطبقة المختلطة أو مزارع الخلايا كروي. كلتا الطريقتين الثقافة هي مفيدة للدراسات الأساسية من التفاعلات بين الخلايا (على سبيل المثال، الخلايا الطبيعية مع الخلايا السرطانية) ولتحليل مختلف التغيرات خلية النمط الظاهري محددة TME (على سبيل المثال، ظهور الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان من الخلايا الليفية الطبيعية). بالإضافة إلى ذلك، الكروية هي قادرة على خلق بنية تشبه النسيج أكثر تعبيرا عن TME، ويمكن أن تكون ممثلة للورم التجانس 23. ومع ذلك الكروية غالبا ما تنتج متفاوتة على نطاق واسع التدرجات توتر الأوكسجين عبر طبقات، والتي قد تعقد النتائج التجريبية 24. للأسف، وكلا النموذجين محدودا للغاية في قدرتها على عزل السكان الخلية نقية لمزيد من التوصيف والدراسة التالية المشاركثقافة. للقيام بذلك يتطلب نوع خلية واحدة على الأقل ليكون الموسومة fluorescently أو المسمى مع صانع تحديد، ومن ثم إخضاع مختلطة ثقافة مشتركة لمعالجة واسعة وخلية الفرز لفصل السكان الخلية. في حين أن فارز الخلية قادر على عزل السكان خلية النقي بدلا من ذلك، يجب على المرء أن يكون مدركا للإجهاد الخلوي والتلوث الميكروبي محتمل يهدد 25.
لتسهيل فهم الاتصالات بين الخلايا، تم بذل جهود كبيرة من أجل تطوير وتحسين نظم المختبر التي تحاكي بشكل وثيق البيئة في الجسم الحي، في حين يسمح نهج مبسطة. واحدة من هذه الأداة هو إدراج الصغيرة التي يسهل اختراقها قابلة للاختراق، وهو الركيزة الغشاء الذي تم تطويره لأول مرة في عام 1953 26 و في وقت لاحق تكييفها لتطبيقات متنوعة والدراسات (على سبيل المثال، الخلية القطبية 27، الإلتقام 28، نقل المخدرات 29، والنمذجة الأنسجة 30، فيرilization 31، وتأثير المارة 32،33، وما إلى ذلك). يسمح هذا النظام للنمو الخلايا في الجسم الحي مع تشبه التشريحية والتمايز الوظيفي، وكذلك التعبير الكثيرين في الجسم الحي علامات 34،35 التي لم يتم مراعاتها عند تربيتها على بلستيكور بردة. وعلاوة على ذلك، فإن غشاء مسامي رقيقة للغاية (10 ميكرون سميكة) يسمح الانتشار السريع للجزيئات والأوقات موازنة، والتي تحاكي البيئة في الجسم الحي ويسمح سير الخلوية مستقل في كل المجالات خلية قمية وbasolateral. ميزة إضافية لفائدة إدراج باعتباره نظام TME هو الفصل المادي اثنين من سكان الخلية مغاير نمت على جانبي الغشاء في نفس الظروف البيئية، مع الحفاظ على مختلف وسائل الاتصال بين الخلايا من خلال المسام الغشاء. على الرغم من فصل جسديا، تقترن السكان اثنين من خلية عملية الأيض عن طريق عناصر يفرز و، كما ديمكتوب هنا، أيضا من خلال قنوات الفجوة صلي. بالإضافة إلى ذلك، من خلال الحفاظ على إدراج في الجسم الحي في توتر الأوكسجين الجزئي (ص 2)، ونموذج يقلل من المضاعفات من الأوكسجين والمواد الكيميائية التدرجات التي لوحظت في الأنظمة الأخرى. بدلا من ذلك، لأنه يزيد من فهم آليات الطبيعية السيطرة على TME. والجدير بالذكر أن السكان الخلية اثنين يمكن عزلها مع نقاء عالية، من دون وضع علامات الفلورسنت و / أو فرز الخلايا بعد فترات طويلة من الثقافة المشتركة.
نحن هنا وصف في المختبر بروتوكول TME تتكون من خلايا سرطان الثدي البشرية والخلايا الليفية الإنسان نمت، على التوالي، على جانبي نفاذية غشاء إدراج الصغيرة التي يسهل اختراقها، ولكن حتى الآن في استمرار الاتصالات ثنائية الاتجاه من خلال مسام الغشاء. وتبين لنا أن باستخدام الأغشية مع أحجام المسام المختلفة، ومساهمة من نوع معين من الاتصالات بين الخلايا (على سبيل المثال، العوامل يفرز مقابل تقاطعات الفجوة) في تطويرمن TME يمكن التحقيق فيها.
Protocol
Representative Results
Discussion
بروتوكول الموصوفة هنا هي بسيطة، قابلة للتكيف في إجراء المختبر (الشكل 1) التي تستخدم منفذ الصغيرة التي يسهل اختراقها إدراج غشاء لتوليد التخصيب السكان الخلية الفردية من شارك في ثقافة من خلايا غيروي. إلى حد كبير، وهذا النموذج هو مناسبة للتحقيق في مختل…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This research was supported by grants from the New Jersey Commission on Cancer Research (Pre-Doctoral Fellowship DFHS13PPCO17), the National Institutes of Health (CA049062), and the National Aeronautics and Space Administration (NNX15AD62G).
Materials
| For Cell Culture | |||
| AG01522 (i.e., AG1522) human diploid fibroblast | Coriell | 107661 | Passage 8-13 |
| MDA-MB-231-luc-D3H1 breast adenocarcinoma cell line | PerkinElmer | 119261 | Parental line: ATCC (#HTB-26) |
| MDA-MB-231/GFP breast adenocarcinoma cell line | Cell Biolabs | AKR-201 | |
| Eagle's minimal essential medium (MEM) | Corning Cellgro | 15-010-CV | |
| Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified | Sigma | F6178-500mL | |
| Corning Glutagro Supplement (200mM L-alanyl-L-glutamine) | Corning Cellgro | 25-015-Cl | |
| Penicillin Streptomycin Solution, 100X | Corning Cellgro | 30-002-Cl | |
| Transwell Insert (i.e., permeable microporous membrane insert) (0.4 μm pore) | Costar | 3450 | |
| Transwell Insert (i.e., permeable microporous membrane insert) (1 μm pore) | Greiner bio-one | 657610 | |
| Transwell Insert (i.e., permeable microporous membrane insert) (3 μm pore) | Costar | 3452 | |
| 6-well Culture Plate | Greiner Bio-One Cellstar | 657160-01 | |
| 75 cm2 cell culture flask | CellStar | 658 170 | |
| Phosphate-Buffered Saline (PBS), 1X | Corning Cellgro | 21-040-CV | without calcium & magnesium |
| 0.25% (vol/vol) Trypsin, 2.21 mM EDTA, 1X | Corning Cellgro | 25-053-Cl | |
| 15 mL Centrifuge Tube | CellTreat | 229411 | |
| 35 x 10 mm Cell Culture Dish | Greiner bio-one | 627 160 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| For Immunofluorescent Microscopy | |||
| Mouse anti-Caveolin 1 | BD Transduction Laboratories | 610406 | In situ Immunofluorescence – 1:5000 |
| Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate | ThermoFisher Scientific | A-11029 | In situ Immunofluorescence – 1:2000 |
| Bovine Serum Albumin – Fraction V | Rockland | BSA-50 | Immunoglobulin and protease free |
| 16% (wt/vol) Formaldehyde Solution | ThermoFisher Scientific | 28908 | Dilute to 4% with 1X PBS |
| Premium Cover Glass (22×22 mm No.1) | Fisher | 12548B | |
| Triton X-100 | Sigma | T8787-50ML | |
| SlowFade Gold antifade reagent with DAPI | Invitrogen | S36938 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| For Flow Cytometric Analysis | |||
| Calcein, AM | Molecular Probes | C3100MP | |
| Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS) | Gibco | 14025-076 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| For Western Blot Analysis | |||
| Mouse anti-Caveolin 1 | BD Transduction Laboratories | 610406 | Western Blot – 1:10000 |
| Tween-20 | BioRad | 170-6531 | |
| Nitrocellulose Membrane (0.2 μm) | BioRad | 162-0112 | |
| Western Lightning Plus-ECL | PerkinElmer | NEL104001EA | |
| BioRad DC Protein Assay | BioRad | 500-0116 | |
| Sodium dodecyl sulfate (SDS) | BioRad | 161-0302 | |
| Sodium deoxycholate monohydrate (DOC) | Sigma | D5670 | |
| IGEPAL CA-630 (NP40) | Sigma | I8896 | |
| 30% Acrylamide/Bis Solution, 37.5:1 | BioRad | 161-0158 |
References
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. The hallmarks of cancer. Cell. 100 (1), 57-70 (2000).
- Olive, K. P., Jacobetz, M. A., et al. Inhibition of Hedgehog signaling enhances delivery of chemotherapy in a mouse model of pancreatic cancer. Science. 324 (5933), 1457-1461 (2009).
- Pandol, S., Edderkaoui, M., Gukovsky, I., Lugea, A., Gukovskaya, A. Desmoplasia of pancreatic ductal adenocarcinoma. Clinical Gastroenterology and Hepatology: the Official Clinical Practice. Journal of the American Gastroenterological Association. 7 (11 Suppl), S44-S47 (2009).
- Dabbous, M. K., Haney, L., Carter, L. M., Paul, A. K., Reger, J. Heterogeneity of fibroblast response in host-tumor cell-cell interactions in metastatic tumors. Journal of Cellular Biochemistry. 35 (4), 333-344 (1987).
- Olumi, A. F., Grossfeld, G. D., Hayward, S. W., Carroll, P. R., Tlsty, T. D., Cunha, G. R. Carcinoma-associated fibroblasts direct tumor progression of initiated human prostatic epithelium. Cancer Research. 59 (19), 5002-5011 (1999).
- Orimo, A., Gupta, P. B., et al. Stromal fibroblasts present in invasive human breast carcinomas promote tumor growth and angiogenesis through elevated SDF-1/CXCL12 secretion. Cell. 121 (3), 335-348 (2005).
- Schürch, W., Seemayer, T. A., Lagacé, R., Gabbiani, G. The intermediate filament cytoskeleton of myofibroblasts: an immunofluorescence and ultrastructural study. Virchows Archiv. A, Pathological Anatomy and Histopathology. 403 (4), 323-336 (1984).
- Nakagawa, H., Liyanarachchi, S., et al. Role of cancer-associated stromal fibroblasts in metastatic colon cancer to the liver and their expression profiles. Oncogene. 23 (44), 7366-7377 (2004).
- Choi, Y. P., Lee, J. H., et al. Cancer-associated fibroblast promote transmigration through endothelial brain cells in three-dimensional in vitro models. International Journal of Cancer. Journal International du Cancer. 135 (9), 2024-2033 (2014).
- Ito, M., Ishii, G., Nagai, K., Maeda, R., Nakano, Y., Ochiai, A. Prognostic impact of cancer-associated stromal cells in patients with stage I lung adenocarcinoma. Chest. 142 (1), 151-158 (2012).
- Gaggioli, C., Hooper, S., et al. Fibroblast-led collective invasion of carcinoma cells with differing roles for RhoGTPases in leading and following cells. Nature Cell Biology. 9 (12), 1392-1400 (2007).
- Navab, R., Strumpf, D., et al. Prognostic gene-expression signature of carcinoma-associated fibroblasts in non-small cell lung cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (17), 7160-7165 (2011).
- Hwang, R. F., Moore, T., et al. Cancer-associated stromal fibroblasts promote pancreatic tumor progression. Cancer Research. 68 (3), 918-926 (2008).
- Sneddon, J. B., Zhen, H. H., et al. Bone morphogenetic protein antagonist gremlin 1 is widely expressed by cancer-associated stromal cells and can promote tumor cell proliferation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (40), 14842-14847 (2006).
- De Wever, O., Nguyen, Q. -. D., et al. Tenascin-C and SF/HGF produced by myofibroblasts in vitro provide convergent pro-invasive signals to human colon cancer cells through RhoA and Rac. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 18 (9), 1016-1018 (2004).
- Zhang, C., Fu, L., et al. Fibroblast growth factor receptor 2-positive fibroblasts provide a suitable microenvironment for tumor development and progression in esophageal carcinoma. Clinical Cancer Research. 15 (12), 4017-4027 (2009).
- Yao, Q., Qu, X., Yang, Q., Wei, M. CLIC4 mediates TGF-β1-induced fibroblast-to-myofibroblast transdifferentiation in ovarian cancer. Oncology Reports. , (2009).
- Crawford, Y., Kasman, I., et al. PDGF-C mediates the angiogenic and tumorigenic properties of fibroblasts associated with tumors refractory to anti-VEGF treatment. Cancer Cell. 15 (1), 21-34 (2009).
- Paulsson, J., Micke, P. Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer. Seminars in Cancer Biology. 25, 61-68 (2014).
- Messina, J. P., Lawrence, D. A. Effects of 2-mercaptoethanol and buthionine sulfoximine on cystine metabolism by and proliferation of mitogen-stimulated human and mouse lymphocytes. International Journal of Immunopharmacology. 14 (7), 1221-1234 (1992).
- Ames, B. N. Endogenous oxidative DNA damage, aging, and cancer. Free Radical Research Communications. 7 (3-6), 121-128 (1989).
- Cheng, Y., Ma, Z., et al. Principles of regulatory information conservation between mouse and human. Nature. 515 (7527), 371-375 (2014).
- Upreti, M., Jamshidi-Parsian, A., et al. Tumor-endothelial cell three-dimensional spheroids: new aspects to enhance radiation and drug therapeutics. Translational Oncology. 4 (6), 365-376 (2011).
- Mehta, G., Hsiao, A. Y., Ingram, M., Luker, G. D., Takayama, S. Opportunities and challenges for use of tumor spheroids as models to test drug delivery and efficacy. Journal of Controlled Release: Official Journal of the Controlled Release Society. 164 (2), 192-204 (2012).
- Muraki, Y., Hongo, S., Ohara, Y. Contamination of the cell sorter fluidics system with the water-borne bacterium Burkholderia cepacia. Cytometry. Part A: the Journal of the International Society for Analytical Cytology. 81 (2), 105-107 (2012).
- Grobstein, C. Morphogenetic interaction between embryonic mouse tissues separated by a membrane filter. Nature. 172 (4384), 869-870 (1953).
- Tan, S., Tompkins, L. S., Amieva, M. R. Helicobacter pylori usurps cell polarity to turn the cell surface into a replicative niche. PLoS Pathogens. 5 (5), e1000407 (2009).
- Hyman, T., Shmuel, M., Altschuler, Y. Actin is required for endocytosis at the apical surface of Madin-Darby canine kidney cells where ARF6 and clathrin regulate the actin cytoskeleton. Molecular Biology of the Cell. 17 (1), 427-437 (2006).
- Ghaffarian, R., Muro, S. Models and methods to evaluate transport of drug delivery systems across cellular barriers. Journal of Visualized Experiments : JoVE. (80), e50638 (2013).
- Braian, C., Svensson, M., Brighenti, S., Lerm, M., Parasa, V. R. A 3D human lung tissue model for functional studies on mycobacterium tuberculosis infection. Journal of Visualized Experiments : JoVE. (104), e53084 (2015).
- Bath, M. L. Inhibition of in vitro fertilizing capacity of cryopreserved mouse sperm by factors released by damaged sperm, and stimulation by glutathione. PLoS ONE. 5 (2), e9387 (2010).
- Zhao, Y., De Toledo, S. M., Hu, G., Hei, T. K., Azzam, E. I. Connexins and cyclooxygenase-2 crosstalk in the expression of radiation-induced bystander effects. British Journal of Cancer. 111 (1), 125-131 (2014).
- Buonanno, M., de Toledo, S. M., Azzam, E. I. Increased frequency of spontaneous neoplastic transformation in progeny of bystander cells from cultures exposed to densely ionizing radiation. PLoS ONE. 6 (6), e21540 (2011).
- Byers, S. W., Hadley, M. A., Djakiew, D., Dym, M. Growth and characterization of polarized monolayers of epididymal epithelial cells and Sertoli cells in dual environment culture chambers. Journal of Andrology. 7 (1), 59-68 (1986).
- Pitt, A., Gabriels, J. Epithelial cell culture on microporous membranes. American Biotechnology Laboratory. 4 (5), 38-45 (1986).
- Buonanno, M., de Toledo, S. M., Pain, D., Azzam, E. I. Long-term consequences of radiation-induced bystander effects depend on radiation quality and dose and correlate with oxidative stress. Radiation Research. 175 (4), 405-415 (2011).
- Ducrest, A. -. L., Amacker, M., Lingner, J., Nabholz, M. Detection of promoter activity by flow cytometric analysis of GFP reporter expression. Nucleic Acids Research. 30 (14), e65 (2002).
- Mercier, I., Casimiro, M. C., Wang, C. Human breast cancer-associated fibroblasts (CAFs) show caveolin-1 down-regulation and RB tumor suppressor functional inactivation: implications for the response to hormonal therapy. Cancer Biology & Therapy. , (2008).
- Martinez-Outschoorn, U. E., Pavlides, S., et al. Tumor cells induce the cancer associated fibroblast phenotype via caveolin-1 degradation: implications for breast cancer and DCIS therapy with autophagy inhibitors. Cell Cycle. 9 (12), 2423-2433 (2010).
- Witkiewicz, A. K., Dasgupta, A., et al. Loss of stromal caveolin-1 expression predicts poor clinical outcome in triple negative and basal-like breast cancers. Cancer Biology & Therapy. 10 (2), 135-143 (2014).
- Zhao, X., He, Y., et al. Caveolin-1 expression level in cancer associated fibroblasts predicts outcome in gastric cancer. PLoS ONE. 8 (3), e59102 (2013).
- Shaul, P. W., Anderson, R. G. Role of plasmalemmal caveolae in signal transduction. The American Journal of Physiology. 275 (5 Pt 1), L843-L851 (1998).
- Fujimoto, T., Kogo, H., Nomura, R., Une, T. Isoforms of caveolin-1 and caveolar structure. Journal of Cell Science. 113 (Pt 19), 3509-3517 (2000).
- Wartiovaara, J., Lehtonen, E., Nordling, S., Saxen, L. Do Membrane Filters prevent Cell Contacts. Nature. 238 (5364), 407-408 (1972).
- Tyan, S. -. W., Kuo, W. -. H., et al. Breast cancer cells induce cancer-associated fibroblasts to secrete hepatocyte growth factor to enhance breast tumorigenesis. PLoS ONE. 6 (1), e15313 (2011).
- Xu, J., Lu, Y., Qiu, S., Chen, Z. -. N., Fan, Z. A novel role of EMMPRIN/CD147 in transformation of quiescent fibroblasts to cancer-associated fibroblasts by breast cancer cells. Cancer Letters. 335 (2), 380-386 (2013).
- Hoffman, R. M. Stromal-cell and cancer-cell exosomes leading the metastatic exodus for the promised niche. Breast Cancer Research : BCR. 15 (3), 310 (2013).
- Franco, O. E., Shaw, A. K., Strand, D. W., Hayward, S. W. Cancer associated fibroblasts in cancer pathogenesis. Seminars in Cell & Developmental Biology. 21 (1), 33-39 (2010).
- Kuse, R., Schuster, S., Schübbe, H., Dix, S., Hausmann, K. Blood lymphocyte volumes and diameters in patients with chronic lymphocytic leukemia and normal controls. Blut. 50 (4), 243-248 (1985).
- Vaupel, P., Schlenger, K., Knoop, C., Höckel, M. Oxygenation of human tumors: evaluation of tissue oxygen distribution in breast cancers by computerized O2 tension measurements. Cancer Research. 51 (12), 3316-3322 (1991).
