חקיין של microenvironment הגידול: שיטה פשוטה ליצירת אוכלוסיות תאים מועשרות חוקרים אינטר תקשורת
Summary
We adapted a permeable microporous membrane insert to mimic the tumor microenvironment (TME). The model consists of a mixed cell culture, allows simplified generation of highly enriched individual cell populations without using fluorescent tagging or cell sorting, and permits studying intercellular communication within the TME under normal or stress conditions.
Abstract
הבנת יחסי גומלין heterotypic מוקדם בין תאים סרטניים ואת stroma שאינו סרטני שמסביב חשובה הבהיר את האירועים שהובילו הפעלת סטרומה והקמת microenvironment הגידול (TME). כמה במבחנה במודלים vivo של TME פותחו; עם זאת, באופן כללי מודלים אלה אינם מאפשרים בידוד בקלות של אוכלוסיות תאים בודדות, בתנאים שאינם מביך, למחקר נוסף. כדי לעקוף את הקושי הזה, יש לנו עבד מודל TME במבחנה באמצעות מצע צמיחת תאים מורכבים להכניס קרום microporous חדיר המאפשר דור פשוט של אוכלוסיות תאים מועשרות גדל באופן אינטימי, עדיין בנפרד, משני צדי הממברנה של הכנס על שיתוף המורחבת פעמים -culture. באמצעות שימוש במודל זה, אנו מסוגלים לייצר פיברובלסטים סרטן קשור מועשרים מאוד (CAF) אוכלוסיות פיברובלסטים אדם דיפלואידי נורמלים הבאותשיתוף תרבות (120 שעות) עם תאי סרטן שד אנושיים גרורתי מאוד, ללא שימוש תיוג ניאון ו / או מיון התא. בנוסף, על ידי הוויסות הנקבובית בגודל של הכנס, אנחנו יכולים לשלוט על המצב של תקשורת בין תאית (למשל, תקשורת צומת-פער, גורמים מופרשים) בין שתי אוכלוסיות תאי heterotypic, המתיר חקירת המנגנונים העומדים בבסיס הפיתוח של TME, כולל התפקיד של חדירות צומת-הפער. מודל זה משמש כלי רב ערך לשיפור הבנתנו את האירועים הראשוניים שהובילו ייזום הסרטן-stroma, תחילת האבולוציה של TME, ואת אפקט הכיוונון של stroma על התגובות של תאים סרטניים לסוכנים טיפוליים.
Introduction
במיקרו-סביבה של הגידול (TME) הוא מערכת מורכבת מאוד מורכבת תאי קרצינומה כי להתקיים ולהתפתח לצד stroma המארח. רכיב סטרומה זה בדרך כלל מורכב פיברובלסטים, myofibroblasts, לתאי אנדותל, רכיבי חיסון שונים, כמו גם תאי מטריקס 1. מרכיב משמעותי, לעתים קרובות רוב stroma זה, הם פיברובלסטים מופעלים, מכונים לעתים קרובות כמו פיברובלסטים סרטן קשור או פיברובלסטים הקשורים קרצינומה (CAF) 2,3. בניגוד נורמלי, פיברובלסטים שאינם מופעל, cafs לתרום התחלה של גידול, התקדמות, אנגיוגנזה, פלישה, גרורות, והישנות 4-11 במגוון רחב של גידולים סרטניים, כולל סרטן שד, ערמונית, ריאות, לבלב, עור, מעי גס, ושט, השחלה 5,6,12-17. עם זאת, על טבעם המדויק של תרומת cafs ברחבי בפתוגנזה הסרטן נשאר מוגדר היטב. יתר על כן, עדות קלינית הוכיחה ערך פרוגנוסטי של cafs, התאמת נוכחותם ממאירות בדרגה גבוהה, כישלון הטיפול, 10,18,19 פרוגנוזה גרועה הכוללת.
ברור, שיפור הבנתנו את האירועים ליזום בפיתוח CAF, כמו גם התקשורת בין התאית בתיווך תפקידם בתוך TME, עשוי לספק מטרות טיפוליות חדשות ומלהיבות ואסטרטגיות משופרות שיכולים לשפר את תוצאות מטופל. כדי להשיג מטרה זו, כמה in vivo ו במודלים חוץ גופית פותחו. בעוד גישות in vivo הן מהורהרות יותר של 'TME החולה, יש להם מגבלות, כולל את המורכבות העצומות ואת ההטרוגניות הן בתוך ובין גידולים. יתר על כן, דגימות גידולים מ בבני אדם לעתים קרובות מאוד מייצגות שפותחו TME ואינן מאפשרות הבנה של האירועים ליזום TME. מחקרים בבעלי חיים ניסוייים מציעים כמה יתרונות, אולם הכללה של נתונים בעלי חיים לבני אדם צריך להיעשות בזהירות בשל הבדלי physiology בין בני אדם ובעלי חיים כמו מכרסמים (למשל, כימיה תיאול 20, קצב חילוף החומרים 21, סובלנות להדגיש 22, וכו '). יתר על כן, בניגוד לאוכלוסיה האנושית, שהיא גנטית הטרוגנית בטבע, בחיות מעבדה בדרך כלל הם התרבו הומוגניות. כמו כן, הוא לעתים קרובות קשה לבחון וריאציות פיסיולוגיות חולפות ושינויי התא פנוטיפ, כמו גם לשלוט על פרמטרים ספציפיים ניסוי באמצעות בעלי חיים כמו מכרסמים. לפיכך, במבחנה 2 ו 3 ממדים (2D and 3D) מודלים בתרבית רקמה מנוצלים לעתים קרובות כדי לקדם את ההבנה הבסיסית של פיתוח TME. למרות חוסר של תיאור מדויק של המורכבות של מערכות in vivo, מודלים אלה מציעים יתרונות המאפשרים חקירות מכניסטית מאוד. חוץ גופית מודלים לאפשר פשוטה יותר, ממוקד, יעיל וחסכוני ניתוח TME, לפיה מובהקות סטטיסטית ניתן להפיק נתוניםתאים ללא וריאציות מערכתיות המתעוררות אצל בעלי חיים.
ישנם כמה סוגים של מערכות במבחנה. שני הנפוץ ביותר TME במבחנה מודלים מורכבים בשכבה מעורבת או בתרביות תאים אליפטית. שתי השיטות התרבות הם יתרון לימודי יסוד של אינטראקציות בין תאית (למשל, תאים נורמליים עם תאים סרטניים) ו לניתוח שינויים פנוטיפ תאים שונים TME ספציפיים (למשל, הופעתה של פיברובלסטים סרטן הקשורים מן fibroblasts נורמלי). בנוסף, spheroids מסוגל ליצור מבנה מרקמה דמוית מהורהר יותר של TME, והוא יכול להיות נציג של ההטרוגניות גידול 23. עם זאת spheroids לעתים קרובות לייצר הדרגתי מתח חמצן מגוון הרחב של נפחים פני שכבות, אשר עלול לסבך מסקנות ניסוי 24. למרבה הצער, שני הדגמים מוגבלים מאוד ביכולתם לבודדת אוכלוסיות תאים טהורות עבור אפיון נוסף והלימוד הבא שיתוףתַרְבּוּת. לשם כך ידרוש לפחות סוג תא אחד להיות fluorescently-tagged או מתויג עם יצרנית זיהוי, ולאחר מכן חשיפת המעורבות ושיתוף תרבות מיון עיבוד התא נרחב להפריד בין אוכלוסיות תאים. בעוד סדרן תא הוא מסוגל לבודד אוכלוסיית תא טהורה למדי, אחד חייב להיות מודע של מתח הסלולר זיהום מיקרוביאלי פוטנציאל סיכוני 25.
כדי להקל על ההבנה של תקשורת בין תאית, מאמצים רבים הוקדשו לקראת פיתוח ואופטימיזציה במערכות חוץ גופית כי מקרוב לחקות את הסביבה vivo, תוך התרת גישה פשוטה. כלי אחד כזה הוא להכניס microporous חדיר, מצע קרום אשר פותחה הראשון בשנת 1953 26 ובהמשך מותאם ליישומים ומחקרים מגוונים (למשל, הקוטביות בתא 27, אנדוציטוזה 28, תחבורה התרופה 29, דוגמנות רקמת 30, FERTilization 31, עובר אורח אפקט 32,33, וכו '). מערכת זו מאפשרת את הצמיחה של תאים עם אנטומיים in vivo-כמו והבחנה פונקציונלית, כמו גם ביטוי של רבי in vivo סמני 34,35 שאינם נצפו כאשר בתרבית על plasticware בלתי חדיר. יתר על כן, הקרום הנקבובי מאוד דק (10 מיקרומטר העבה) מתיר דיפוזיה מהירה של מולקולות ושעות איזון, המדמה את סביבת vivo ומאפשרת תפקוד הסלולר עצמאי בשני תחומי תא apical ו basolateral. יתרון נוסף של השירות של הכנס כמערכת TME הוא ההפרדה הפיסית של שתי אוכלוסיות תאי heterotypic גדלו משני צדי הממברנה באותם תנאים סביבתיים, תוך שמירה על מצבים שונים של תקשורת בין תאית הדרך הנקבובית הממברנה. למרות מופרדים פיסיים, שתי אוכלוסיות התאים הם מצמידים מטבולית באמצעות אלמנטים המופרשים על ידם, כמו דהscribed כאן, גם בערוצים-junctional הפער. בנוסף, על ידי שמירה על ההכנסות ב in vivo מתח חמצן חלקי (PO 2), המודל מפחית את הסיבוכים של הדרגתיים חמצן כימיים שנצפו מערכות אחרות. במקום זאת, היא מגדילה את ההבנה של מנגנונים טבעיים שליטה על TME. יש לציין, כי שתי אוכלוסיות התאים יכולות להיות מבודדות בקלות עם טוהר גבוה, ללא תיוג ניאון ו / או מיון התא הבא פרקי שיתוף התרבות.
כאן אנו מתארים פרוטוקול במבחנת TME מורכב תאים אנושיים שד קרצינומה ו fibroblasts האנושי גדל, בהתאמה, משני הצדים להכניס קרום microporous חדיר, אבל עדיין בתקשורת מתמדת דו-כיוונית הדרך הנקבובית הממברנה. אנו מראים כי באמצעות ממברנות עם גדלים נקבוביים שונים, תרומת סוג מסוים של תקשורת בין תאית (למשל, גורמים המופרשים לעומת צומת פער) לפיתוחיכול להיחקר של TME.
Protocol
Representative Results
Discussion
הפרוטוקול המתואר כאן הוא פשוט, להתאמה בהליך במבחנה (איור 1) אשר מנצל להכניס קרום microporous חדיר ליצור אוכלוסיות תאים בודדות מועשר מתוך שיתוף תרבות של תאי heterotypic. באופן משמעותי, המודל מתאים חוקרת מצבים שונים של תקשורת בין תאית. השלבים הקריטיים כוללים בחירת הכ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This research was supported by grants from the New Jersey Commission on Cancer Research (Pre-Doctoral Fellowship DFHS13PPCO17), the National Institutes of Health (CA049062), and the National Aeronautics and Space Administration (NNX15AD62G).
Materials
| For Cell Culture | |||
| AG01522 (i.e., AG1522) human diploid fibroblast | Coriell | 107661 | Passage 8-13 |
| MDA-MB-231-luc-D3H1 breast adenocarcinoma cell line | PerkinElmer | 119261 | Parental line: ATCC (#HTB-26) |
| MDA-MB-231/GFP breast adenocarcinoma cell line | Cell Biolabs | AKR-201 | |
| Eagle's minimal essential medium (MEM) | Corning Cellgro | 15-010-CV | |
| Fetal Bovine Serum (FBS), Qualified | Sigma | F6178-500mL | |
| Corning Glutagro Supplement (200mM L-alanyl-L-glutamine) | Corning Cellgro | 25-015-Cl | |
| Penicillin Streptomycin Solution, 100X | Corning Cellgro | 30-002-Cl | |
| Transwell Insert (i.e., permeable microporous membrane insert) (0.4 μm pore) | Costar | 3450 | |
| Transwell Insert (i.e., permeable microporous membrane insert) (1 μm pore) | Greiner bio-one | 657610 | |
| Transwell Insert (i.e., permeable microporous membrane insert) (3 μm pore) | Costar | 3452 | |
| 6-well Culture Plate | Greiner Bio-One Cellstar | 657160-01 | |
| 75 cm2 cell culture flask | CellStar | 658 170 | |
| Phosphate-Buffered Saline (PBS), 1X | Corning Cellgro | 21-040-CV | without calcium & magnesium |
| 0.25% (vol/vol) Trypsin, 2.21 mM EDTA, 1X | Corning Cellgro | 25-053-Cl | |
| 15 mL Centrifuge Tube | CellTreat | 229411 | |
| 35 x 10 mm Cell Culture Dish | Greiner bio-one | 627 160 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| For Immunofluorescent Microscopy | |||
| Mouse anti-Caveolin 1 | BD Transduction Laboratories | 610406 | In situ Immunofluorescence – 1:5000 |
| Goat anti-Mouse IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate | ThermoFisher Scientific | A-11029 | In situ Immunofluorescence – 1:2000 |
| Bovine Serum Albumin – Fraction V | Rockland | BSA-50 | Immunoglobulin and protease free |
| 16% (wt/vol) Formaldehyde Solution | ThermoFisher Scientific | 28908 | Dilute to 4% with 1X PBS |
| Premium Cover Glass (22×22 mm No.1) | Fisher | 12548B | |
| Triton X-100 | Sigma | T8787-50ML | |
| SlowFade Gold antifade reagent with DAPI | Invitrogen | S36938 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| For Flow Cytometric Analysis | |||
| Calcein, AM | Molecular Probes | C3100MP | |
| Hanks' Balanced Salt Solution (HBSS) | Gibco | 14025-076 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| For Western Blot Analysis | |||
| Mouse anti-Caveolin 1 | BD Transduction Laboratories | 610406 | Western Blot – 1:10000 |
| Tween-20 | BioRad | 170-6531 | |
| Nitrocellulose Membrane (0.2 μm) | BioRad | 162-0112 | |
| Western Lightning Plus-ECL | PerkinElmer | NEL104001EA | |
| BioRad DC Protein Assay | BioRad | 500-0116 | |
| Sodium dodecyl sulfate (SDS) | BioRad | 161-0302 | |
| Sodium deoxycholate monohydrate (DOC) | Sigma | D5670 | |
| IGEPAL CA-630 (NP40) | Sigma | I8896 | |
| 30% Acrylamide/Bis Solution, 37.5:1 | BioRad | 161-0158 |
References
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. The hallmarks of cancer. Cell. 100 (1), 57-70 (2000).
- Olive, K. P., Jacobetz, M. A., et al. Inhibition of Hedgehog signaling enhances delivery of chemotherapy in a mouse model of pancreatic cancer. Science. 324 (5933), 1457-1461 (2009).
- Pandol, S., Edderkaoui, M., Gukovsky, I., Lugea, A., Gukovskaya, A. Desmoplasia of pancreatic ductal adenocarcinoma. Clinical Gastroenterology and Hepatology: the Official Clinical Practice. Journal of the American Gastroenterological Association. 7 (11 Suppl), S44-S47 (2009).
- Dabbous, M. K., Haney, L., Carter, L. M., Paul, A. K., Reger, J. Heterogeneity of fibroblast response in host-tumor cell-cell interactions in metastatic tumors. Journal of Cellular Biochemistry. 35 (4), 333-344 (1987).
- Olumi, A. F., Grossfeld, G. D., Hayward, S. W., Carroll, P. R., Tlsty, T. D., Cunha, G. R. Carcinoma-associated fibroblasts direct tumor progression of initiated human prostatic epithelium. Cancer Research. 59 (19), 5002-5011 (1999).
- Orimo, A., Gupta, P. B., et al. Stromal fibroblasts present in invasive human breast carcinomas promote tumor growth and angiogenesis through elevated SDF-1/CXCL12 secretion. Cell. 121 (3), 335-348 (2005).
- Schürch, W., Seemayer, T. A., Lagacé, R., Gabbiani, G. The intermediate filament cytoskeleton of myofibroblasts: an immunofluorescence and ultrastructural study. Virchows Archiv. A, Pathological Anatomy and Histopathology. 403 (4), 323-336 (1984).
- Nakagawa, H., Liyanarachchi, S., et al. Role of cancer-associated stromal fibroblasts in metastatic colon cancer to the liver and their expression profiles. Oncogene. 23 (44), 7366-7377 (2004).
- Choi, Y. P., Lee, J. H., et al. Cancer-associated fibroblast promote transmigration through endothelial brain cells in three-dimensional in vitro models. International Journal of Cancer. Journal International du Cancer. 135 (9), 2024-2033 (2014).
- Ito, M., Ishii, G., Nagai, K., Maeda, R., Nakano, Y., Ochiai, A. Prognostic impact of cancer-associated stromal cells in patients with stage I lung adenocarcinoma. Chest. 142 (1), 151-158 (2012).
- Gaggioli, C., Hooper, S., et al. Fibroblast-led collective invasion of carcinoma cells with differing roles for RhoGTPases in leading and following cells. Nature Cell Biology. 9 (12), 1392-1400 (2007).
- Navab, R., Strumpf, D., et al. Prognostic gene-expression signature of carcinoma-associated fibroblasts in non-small cell lung cancer. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (17), 7160-7165 (2011).
- Hwang, R. F., Moore, T., et al. Cancer-associated stromal fibroblasts promote pancreatic tumor progression. Cancer Research. 68 (3), 918-926 (2008).
- Sneddon, J. B., Zhen, H. H., et al. Bone morphogenetic protein antagonist gremlin 1 is widely expressed by cancer-associated stromal cells and can promote tumor cell proliferation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (40), 14842-14847 (2006).
- De Wever, O., Nguyen, Q. -. D., et al. Tenascin-C and SF/HGF produced by myofibroblasts in vitro provide convergent pro-invasive signals to human colon cancer cells through RhoA and Rac. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 18 (9), 1016-1018 (2004).
- Zhang, C., Fu, L., et al. Fibroblast growth factor receptor 2-positive fibroblasts provide a suitable microenvironment for tumor development and progression in esophageal carcinoma. Clinical Cancer Research. 15 (12), 4017-4027 (2009).
- Yao, Q., Qu, X., Yang, Q., Wei, M. CLIC4 mediates TGF-β1-induced fibroblast-to-myofibroblast transdifferentiation in ovarian cancer. Oncology Reports. , (2009).
- Crawford, Y., Kasman, I., et al. PDGF-C mediates the angiogenic and tumorigenic properties of fibroblasts associated with tumors refractory to anti-VEGF treatment. Cancer Cell. 15 (1), 21-34 (2009).
- Paulsson, J., Micke, P. Prognostic relevance of cancer-associated fibroblasts in human cancer. Seminars in Cancer Biology. 25, 61-68 (2014).
- Messina, J. P., Lawrence, D. A. Effects of 2-mercaptoethanol and buthionine sulfoximine on cystine metabolism by and proliferation of mitogen-stimulated human and mouse lymphocytes. International Journal of Immunopharmacology. 14 (7), 1221-1234 (1992).
- Ames, B. N. Endogenous oxidative DNA damage, aging, and cancer. Free Radical Research Communications. 7 (3-6), 121-128 (1989).
- Cheng, Y., Ma, Z., et al. Principles of regulatory information conservation between mouse and human. Nature. 515 (7527), 371-375 (2014).
- Upreti, M., Jamshidi-Parsian, A., et al. Tumor-endothelial cell three-dimensional spheroids: new aspects to enhance radiation and drug therapeutics. Translational Oncology. 4 (6), 365-376 (2011).
- Mehta, G., Hsiao, A. Y., Ingram, M., Luker, G. D., Takayama, S. Opportunities and challenges for use of tumor spheroids as models to test drug delivery and efficacy. Journal of Controlled Release: Official Journal of the Controlled Release Society. 164 (2), 192-204 (2012).
- Muraki, Y., Hongo, S., Ohara, Y. Contamination of the cell sorter fluidics system with the water-borne bacterium Burkholderia cepacia. Cytometry. Part A: the Journal of the International Society for Analytical Cytology. 81 (2), 105-107 (2012).
- Grobstein, C. Morphogenetic interaction between embryonic mouse tissues separated by a membrane filter. Nature. 172 (4384), 869-870 (1953).
- Tan, S., Tompkins, L. S., Amieva, M. R. Helicobacter pylori usurps cell polarity to turn the cell surface into a replicative niche. PLoS Pathogens. 5 (5), e1000407 (2009).
- Hyman, T., Shmuel, M., Altschuler, Y. Actin is required for endocytosis at the apical surface of Madin-Darby canine kidney cells where ARF6 and clathrin regulate the actin cytoskeleton. Molecular Biology of the Cell. 17 (1), 427-437 (2006).
- Ghaffarian, R., Muro, S. Models and methods to evaluate transport of drug delivery systems across cellular barriers. Journal of Visualized Experiments : JoVE. (80), e50638 (2013).
- Braian, C., Svensson, M., Brighenti, S., Lerm, M., Parasa, V. R. A 3D human lung tissue model for functional studies on mycobacterium tuberculosis infection. Journal of Visualized Experiments : JoVE. (104), e53084 (2015).
- Bath, M. L. Inhibition of in vitro fertilizing capacity of cryopreserved mouse sperm by factors released by damaged sperm, and stimulation by glutathione. PLoS ONE. 5 (2), e9387 (2010).
- Zhao, Y., De Toledo, S. M., Hu, G., Hei, T. K., Azzam, E. I. Connexins and cyclooxygenase-2 crosstalk in the expression of radiation-induced bystander effects. British Journal of Cancer. 111 (1), 125-131 (2014).
- Buonanno, M., de Toledo, S. M., Azzam, E. I. Increased frequency of spontaneous neoplastic transformation in progeny of bystander cells from cultures exposed to densely ionizing radiation. PLoS ONE. 6 (6), e21540 (2011).
- Byers, S. W., Hadley, M. A., Djakiew, D., Dym, M. Growth and characterization of polarized monolayers of epididymal epithelial cells and Sertoli cells in dual environment culture chambers. Journal of Andrology. 7 (1), 59-68 (1986).
- Pitt, A., Gabriels, J. Epithelial cell culture on microporous membranes. American Biotechnology Laboratory. 4 (5), 38-45 (1986).
- Buonanno, M., de Toledo, S. M., Pain, D., Azzam, E. I. Long-term consequences of radiation-induced bystander effects depend on radiation quality and dose and correlate with oxidative stress. Radiation Research. 175 (4), 405-415 (2011).
- Ducrest, A. -. L., Amacker, M., Lingner, J., Nabholz, M. Detection of promoter activity by flow cytometric analysis of GFP reporter expression. Nucleic Acids Research. 30 (14), e65 (2002).
- Mercier, I., Casimiro, M. C., Wang, C. Human breast cancer-associated fibroblasts (CAFs) show caveolin-1 down-regulation and RB tumor suppressor functional inactivation: implications for the response to hormonal therapy. Cancer Biology & Therapy. , (2008).
- Martinez-Outschoorn, U. E., Pavlides, S., et al. Tumor cells induce the cancer associated fibroblast phenotype via caveolin-1 degradation: implications for breast cancer and DCIS therapy with autophagy inhibitors. Cell Cycle. 9 (12), 2423-2433 (2010).
- Witkiewicz, A. K., Dasgupta, A., et al. Loss of stromal caveolin-1 expression predicts poor clinical outcome in triple negative and basal-like breast cancers. Cancer Biology & Therapy. 10 (2), 135-143 (2014).
- Zhao, X., He, Y., et al. Caveolin-1 expression level in cancer associated fibroblasts predicts outcome in gastric cancer. PLoS ONE. 8 (3), e59102 (2013).
- Shaul, P. W., Anderson, R. G. Role of plasmalemmal caveolae in signal transduction. The American Journal of Physiology. 275 (5 Pt 1), L843-L851 (1998).
- Fujimoto, T., Kogo, H., Nomura, R., Une, T. Isoforms of caveolin-1 and caveolar structure. Journal of Cell Science. 113 (Pt 19), 3509-3517 (2000).
- Wartiovaara, J., Lehtonen, E., Nordling, S., Saxen, L. Do Membrane Filters prevent Cell Contacts. Nature. 238 (5364), 407-408 (1972).
- Tyan, S. -. W., Kuo, W. -. H., et al. Breast cancer cells induce cancer-associated fibroblasts to secrete hepatocyte growth factor to enhance breast tumorigenesis. PLoS ONE. 6 (1), e15313 (2011).
- Xu, J., Lu, Y., Qiu, S., Chen, Z. -. N., Fan, Z. A novel role of EMMPRIN/CD147 in transformation of quiescent fibroblasts to cancer-associated fibroblasts by breast cancer cells. Cancer Letters. 335 (2), 380-386 (2013).
- Hoffman, R. M. Stromal-cell and cancer-cell exosomes leading the metastatic exodus for the promised niche. Breast Cancer Research : BCR. 15 (3), 310 (2013).
- Franco, O. E., Shaw, A. K., Strand, D. W., Hayward, S. W. Cancer associated fibroblasts in cancer pathogenesis. Seminars in Cell & Developmental Biology. 21 (1), 33-39 (2010).
- Kuse, R., Schuster, S., Schübbe, H., Dix, S., Hausmann, K. Blood lymphocyte volumes and diameters in patients with chronic lymphocytic leukemia and normal controls. Blut. 50 (4), 243-248 (1985).
- Vaupel, P., Schlenger, K., Knoop, C., Höckel, M. Oxygenation of human tumors: evaluation of tissue oxygen distribution in breast cancers by computerized O2 tension measurements. Cancer Research. 51 (12), 3316-3322 (1991).
