파인 우드 선충의 관측 및 짝짓기 행동의 정량화,<em> 소나무 재선충</em
Summary
A protocol for investigating the mating behavior of the pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus, is presented. Behavioral features of B. xylophilus are described in the mating process.
Abstract
관찰과 소나무 선충, Bursaphelenchus의 xylophilus의 짝짓기 행동을 정량화하기위한 방법은, 실체 현미경 아래 설립되었다. B. Xylophilus의 결합 효율을 향상시키고 상대 관찰 가능성을 증가시키는, 버진 성인 배양하고, 조사에 사용. 계란은 물에 선충을 유지하고, 여성은 10 분 동안 알을 낳기 수 있도록함으로써 얻을 수 있었다. 2 단째 유생 (J2)는 어둠에서 25 ° C에서 24 시간 동안 난자를 배양하여 동기화하고, 초기 J4 또 다른 52 시간 동안, 잿빛 곰팡이, 보 트리 티스 시네 레아와 J2를 배양함으로써 얻어졌다. 이 시점에서, 가장 J4 선충은 생식기 형태를 사용하여 남성 또는 여성 인 것으로 명확히 구별 될 수있다. 남성과 여성의 J4 수집하고 처녀 성인 선충을받을 24 시간 동안 두 개의 서로 다른 배양 접시에서 분리 배양 하였다. 처녀 남성과 처녀 여성은 와트의 드롭 쌍 하였다오목 슬라이드의 잘 어. 정합 동작은 실체 현미경 비디오 레코더로 촬영했다. 결합 프로세스의 전체 시간은 82.8 ± 3.91 분 (± SE 평균)이고 4 개의 단계로 나눌 수있다 : 검색, 접촉 교미 및 느린. 구간의 평균 분은 각각 21.8 ± 2.0, 28.0 ± 1.9, 25.8 ± 0.7 및 7.2 ± 0.5이었다. 일레븐 서브 행동을 설명했다 :, 순항 접근, 발생, 반원형 누수 방지 공법, 터치, 위치, 부착, 사정을, 정지를 분리하고, 로밍. 한 여성이 3 명의 남성 3 명의 여성과 한 남성과 함께 그룹화 할 때 흥미롭게도, 분명 내 성적 경쟁이 관찰되었다. 이 프로토콜의 B. xylophilus의 결합 거동을 조사에서뿐만 아니라 다른 선충 ethological 연구를위한 기준으로서 작용에서뿐만 아니라, 유용하고 귀중하다.
Introduction
The pinewood nematode, Bursaphelenchus xylophilus (Steiner and Buhrer) Nickle, is one of the most destructive invasive species, causing the wilting and eventual death of pine trees. This pathogenic nematode is believed to be native to the USA, but it was transported to several countries, including China, Japan, South Korea, and Portugal. Recently, it has also been reported in Spain, killing millions of pine trees at huge economic losses and threatening forest production and ecological stability1-5.
Once a host pine tree is infected by pinewood nematodes, thousands of millions of offspring are propagated rapidly within the trunk. This causes xylem dysfunction, resulting in wilting and eventually in the death of the host tree6. However, there is currently no efficient way to control this disease. Mating behavior might play an important role in the high fecundity of this nematode7. We therefore investigated the mating behavior of B. xylophilus in the laboratory, trying to find an effective way of disturbing its mating and decreasing its fecundity.
This protocol is intended to introduce the detailed methods of how to obtain the virgin adults of B. xylophilus and how to observe and analyze the mating behavior using a video recorder and a stereomicroscope. This protocol can also be used as a reference for behavioral studies of other nematodes.
Protocol
Representative Results
Discussion
행동 테스트는 화학 생태학, 신경 생물학, 분자 생물학, 유전학의 기본적인 부분입니다. 선충, 특히 C. 엘레은 광범위하게이 분야에서 연구에 사용됩니다. 선충의 짝짓기 행동은 이전에 10-11을 조사하고있다. 그러나, B.의 xylophilus는 자웅 이체와 자웅 동체 C. elegans의 다른이며, 그 결합 과정은 다른 행동 기능 9있다. 최근 Bursaphelenchus의 okinawaensis, …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Najie 주홍 및 Liqun 바이는이 작품에 동일하게 기여했다. 이 작품은 재정적으로 공공 복지에서 임업 과학 연구를위한 특별 기금 (201,204,501)와 중국 국가 자연 과학 재단 (31170604, 31270688 및 31570638)에 의해 지원되었다. 우리는 영어 쓰기에 자신의 도움이 제안 박사 Holighaus 리트 박사 다니엘 Hickford 감사합니다.
Materials
| B. xylophilus isolate Nxy61 | Extracted from Pinus massoniana in Ningbo area of China | ||
| Grey mold strain | Obtained from Forestry Academy of China | ||
| Baermann funnels | Sengong | ||
| falcon tubes | Sengong | ||
| centrifuge | Sengong | ||
| pipette | Sengong | ||
| sterile dd H2O | Sterilized by high pressure of steam at 121°C for 30 min. | ||
| Petri dishes | Sengong | ||
| PDA medium | Huankai Bio. | 021050 | |
| incubator | Sengong | ||
| Laminar flow | Sengong | ||
| glass capillary | Sengong | ||
| Stereoscope | Leica | LED5000 RL | |
| inverted stereo microscope | Zeiss | A1 | |
| concave slides | Sengong |
References
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