Murine volledige dikte van de huid Transplantation
Summary
Murine full-dikte van de huid transplantatie is een gevestigde model om afstoting te studeren in een alloimmuun setting. Hier bieden we een tutorial van elke stap die betrokken zijn bij het uitvoeren van een BALB / c -> C57BL / 6 full-dikte van de huid transplantatie.
Abstract
Murine volledige dikte huidtransplantatie is een gevestigde in vivo model om allo respons en transplantaatafstoting bestuderen. Ondanks de beperkte toepassing voor mensen, is huidtransplantatie bij muizen grote schaal toegepast voor transplantatie onderzoek. De procedure is eenvoudig te leren en uit te voeren, en het vereist geen delicate microchirurgische technieken, noch uitgebreide training. Bovendien transplantaatafstoting in dit model wordt op een zeer reproduceerbare immunologische reactie en wordt gemakkelijk gevolgd door directe inspectie en palpatie. Bovendien kunnen secundaire huidtransplantatie met donor gematched of skin derden grafts uitgevoerd complexere transplantatie modellen als alternatief en eenvoudige methode om donor-specifieke tolerantie te bepalen. De complicaties zijn laag en zijn over het algemeen beperkt tot anesthesie overdosering of ademhalingsproblemen na de ingreep. Transplantaatfalen, daarentegen, komt vaak voor als gevolg van slechte voorbereiding van de grachterschip, onjuiste positionering in het transplantaat bed, of onjuiste plaatsing van de bandage. In dit artikel presenteren we een protocol voor volledige dikte huidtransplantatie bij muizen en beschrijf de belangrijke stappen die nodig zijn voor een succesvolle procedure.
Introduction
Orgaantransplantatie is de behandeling van keuze voor patiënten met eindstadium orgaanfalen en resultaten zijn opmerkelijk verbeterd met vooruitgang in chirurgische procedures en immunosuppressie protocollen. Echter langdurige immunosuppressie gepaard met significante bijwerkingen, en de ontwikkeling van nieuwe strategieën verdraagzaamheid blijft het doel van de moderne transplantatieonderzoek.
Talrijke diermodellen zijn ontwikkeld voor basisonderzoek bij transplantatie, de mechanismen van transplantaatafstoting bestuderen en te testen immunosuppressie benaderingen voor het voorkomen van transplantaat afstoting en voor de bevordering van tolerantie op lange termijn 1-3. Muismodellen hebben de steunpilaar van immunologisch onderzoek geworden als gevolg van de exclusieve en ruime beschikbaarheid van diagnostische en therapeutische antilichamen en goed gedefinieerde inteelt en transgene stammen. Huidtransplantatie is een eenvoudige procedure die niet vereist speciale vaardigheden en kan microchirurgischegemakkelijk postoperatief gevolgd. Bij elkaar genomen, heeft de muis huidtransplantatie een uitzonderlijk hulpmiddel om vele aspecten die betrokken zijn bij de alloimmuun reactie, met inbegrip van antigeen-afgifte, mobiele handel, en weefsel tijdens afstoting van 4,5 te bestuderen.
Hier tonen we de stap-voor-stap procedure voor full-thickness huidtransplantatie met het muismodel en we de belangrijke stappen die nodig zijn voor een succesvolle implantatie van de getransplanteerde huid beschrijven.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sinds de introductie van Medawar, eerst in menselijke studies en bij konijnen en muizen is huidtransplantatie een waardevol model voor de studie van allogene immune responsen 6,7 geweest. In dit manuscript presenteren we een model van grootschalige, niet-gevasculariseerd, full-thickness huidtransplantatie met de bovenste en onderste rugvel. Diverse alternatieve werkwijzen, inclusief het gebruik van de staart huid of oorhuid van de muis als graft bronweefsel, zijn tot op heden 8,9. Deze modellen pre…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd gefinancierd door NIH-subsidie R01AI077610.
Materials
| Straight micro forceps | Sigma | F4017 | |
| Curved micro forceps | Aesculap | BD333R | |
| Curved Stevens tenotomy scissors | Aesculap | BC905R | |
| Mayo dissecting scissors | Sigma | S3146 | |
| Micro needle holder | Aesculap | BM563R | |
| Sterile gauze | Covidien | 441218 | |
| 6-0 Nylon suture | MWI | 31849 | |
| Plastic Strips Band-Aid | Johnson & Johnson | Obtained from pharmacy | |
| 10 cm Petri dish | Fisherbrand | FB0875712 | |
| PBS | Quality Biological | 119069131 | |
| Buprenorphine | DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy | ||
| Enrofloxacin | Bayer Health Care | 186599 |
References
- Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
- Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
- Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
- Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
- Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
- Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
- Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
- Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
- Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
- Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
- Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
- Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
- McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
- Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
- Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
- Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).
