Murine full-tykkelse hudtransplantasjon
Summary
Murine full tykkelse hud transplantasjon er en veletablert modell for å studere avslag i en alloimmun omgivelser. Her gir vi en tutorial av hvert trinn er involvert i å utføre et BALB / c -> C57BL / 6 full tykkelse hud transplantasjon.
Abstract
Murine full tykkelse hud transplantasjon er en godt etablert in vivo modell for å studere alloimmun respons og transplantat avvisning. Til tross for sin begrensede søknad til mennesker, har hud transplantasjon hos mus vært mye brukt for transplantasjon forskning. Fremgangsmåten er enkel å lære og utføre, og det krever ikke delikate mikrokirurgiske teknikker eller omfattende opplæring. Dessuten, graft avvisning i denne modellen skjer på en meget reproduserbar immunologisk reaksjon, og blir lett overvåket ved direkte inspeksjon og palpasjon. I tillegg kan sekundær hud transplantasjon med donor-matchet eller tredjeparts hud grafts utføres på flere komplekse transplanterte modeller som et alternativ og ukomplisert metode for å vurdere donor-spesifikke toleranse. Komplikasjoner er lav og er generelt begrenset til anestesi overdose eller åndenød etter inngrepet. Graft svikt, på den annen side, forekommer ofte som et resultat av dårlig fremstilling av grakterut, uriktig posisjonering i transplantatet sengen, eller uhensiktsmessig plassering av bandasjen. I denne artikkelen presenterer vi en protokoll for full tykkelse hud transplantasjon hos mus og beskrive viktige skritt som er nødvendige for en vellykket prosedyre.
Introduction
Organtransplantasjon er behandling av valg for pasienter med sluttstadiet organsvikt, og resultatene har bedret seg bemerkelsesverdig med utviklingen innen kirurgiske prosedyrer og immunsuppresjonsteknikker protokoller. Imidlertid er langsiktig immunsuppresjon forbundet med betydelige bivirkninger, og utvikling av nye strategier som fremmer toleranse er fortsatt målet for moderne transplantasjon forskning.
Mange dyremodeller har blitt utviklet for grunnforskning i transplantasjon, for å studere mekanismene for allotransplantatavvisning og for å teste immunsuppresjon tilnærminger for å hindre avstøting av transplantat og for å fremme langsiktig toleranse 1-3. Musemodeller har blitt den viktigste immunologiske forskning på grunn av det eksklusive og store tilgjengeligheten av diagnostiske og terapeutiske antistoffer og veldefinerte innavlede og transgene stammer. Skin transplantasjon er en enkel prosedyre som ikke krever spesielle mikroferdigheter og kanenkelt overvåkes postoperativt. Til sammen har mus hud transplantasjon vært en eksepsjonell verktøy for å studere mange aspekter involvert i alloimmun respons, inkludert antigen levering, celle trafficking, og ødeleggelse vev under pode avvisning 4,5.
Her viser vi trinn-for-trinn fremgangsmåte for full tykkelse hudtransplantasjon ved hjelp av musemodellen, og vi beskriver de viktige trinnene som er nødvendige for en vellykket innpoding av den transplanterte huden.
Protocol
Representative Results
Discussion
Siden introduksjonen av Medawar, først i humane studier og deretter i kaniner og mus, har hudtransplantasjon vært en uvurderlig modell for studiet av allogene immunresponser 6,7. I dette manuskriptet, presenterer vi en modell av store, ikke-vaskularisert, full-tykkelse hud transplantasjon med øvre og nedre del av ryggen huden. Ulike alternative fremgangsmåter, inkludert bruken av halen hud eller øre huden på mus som pode vev kilden, er blitt rapportert å date 8,9. Disse modellene presentere …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dette arbeidet ble finansiert av NIH stipend R01AI077610.
Materials
| Straight micro forceps | Sigma | F4017 | |
| Curved micro forceps | Aesculap | BD333R | |
| Curved Stevens tenotomy scissors | Aesculap | BC905R | |
| Mayo dissecting scissors | Sigma | S3146 | |
| Micro needle holder | Aesculap | BM563R | |
| Sterile gauze | Covidien | 441218 | |
| 6-0 Nylon suture | MWI | 31849 | |
| Plastic Strips Band-Aid | Johnson & Johnson | Obtained from pharmacy | |
| 10 cm Petri dish | Fisherbrand | FB0875712 | |
| PBS | Quality Biological | 119069131 | |
| Buprenorphine | DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy | ||
| Enrofloxacin | Bayer Health Care | 186599 |
References
- Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
- Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
- Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
- Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
- Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
- Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
- Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
- Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
- Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
- Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
- Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
- Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
- McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
- Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
- Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
- Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).
