Murin full tjocklek hudtransplantation
Summary
Murin full tjocklek hudtransplantation är en väl etablerad modell för att studera avslag i ett alloimmun inställning. Här ger vi en handledning för varje involverad i att utföra en BALB / c steg -> C57BL / 6 full tjocklek hudtransplantation.
Abstract
Murin full tjocklek hudtransplantation är en väletablerad in vivo modell för att studera alloimmun svar och avstötning av transplantat. Trots sin begränsade tillämpning på människor, har hudtransplantation på möss i stor utsträckning använts för transplantation forskning. Förfarandet är lätt att lära och utföra och det kräver inte känsliga mikrokirurgisk teknik eller omfattande utbildning. Dessutom, transplantatavstötning i denna modell förekommer i en mycket reproducerbar immunologisk reaktion och övervakas lätt genom direkt inspektion och palpation. Dessutom kan sekundär hudtransplantation med givare matchade eller tredjeparts hudtransplantation utföras på mer komplexa transplantationsmodeller som ett alternativ och okomplicerad metod för att bedöma givarspecifik tolerans. Komplikationerna är låga och är i allmänhet begränsade till anestesi överdos eller andnöd efter ingreppet. Graft fel, å andra sidan, uppträder vanligen som ett resultat av dålig förberedelse för grakterut, felaktig placering i transplantatet sängen, eller olämplig placering av bandaget. I den här artikeln presenterar vi ett protokoll för full tjocklek hudtransplantation på möss och beskriva de viktiga åtgärder som krävs för en lyckad procedur.
Introduction
Organtransplantation är behandling av valet för patienter med gravt organsvikt, och resultaten har förbättrats avsevärt med framsteg inom kirurgiska ingrepp och immunosuppression protokoll. Dock är långsiktigt immunosuppression i samband med betydande biverkningar, och utveckling av nya strategier som främjar tolerans förblir målet för moderna transplantationsforskning.
Ett stort antal djurmodeller har utvecklats för grundforskning vid transplantation, för att studera mekanismerna bakom allograftavstötning och testa immunsuppression metoder för att förhindra avstötning av transplantat och för att främja långtidstolerans 1-3. Musmodeller har blivit grunden för immunologisk forskning på grund av den exklusiva och stora tillgången på diagnostiska och terapeutiska antikroppar och väldefinierade inavlade och transgena stammar. Hudtransplantation är en enkel procedur som inte kräver speciella mikrokunskaper och kanlätt övervakas postoperativt. Sammantaget har mushud transplantation varit ett utomordentligt verktyg för att studera många aspekter på alloimmun svar, bland annat antigen leverans, cell trafficking, och vävnadsdöd under avstötning 4,5.
Här visar vi steg-för-steg förfarande för full tjocklek hudtransplantation använder musmodell och vi beskriver de viktiga åtgärder som krävs för en lyckad engraftment av transplanterade hud.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sedan introduktionen av Medawar, först i humanstudier och sedan i kaniner och möss har hudtransplantation varit en ovärderlig modell för studier av allogena immunsvar 6,7. I detta manuskript, presenterar vi en modell av storskalig, icke-vaskulariserade, full tjocklek hud transplantation med användning av de övre och nedre delen av ryggen hud. Olika alternativa metoder, innefattande användning av svansen hud eller öronhuden på musen som implantatet vävnadskälla, har rapporterats till dags dato …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete har finansierats av NIH bidrag R01AI077610.
Materials
| Straight micro forceps | Sigma | F4017 | |
| Curved micro forceps | Aesculap | BD333R | |
| Curved Stevens tenotomy scissors | Aesculap | BC905R | |
| Mayo dissecting scissors | Sigma | S3146 | |
| Micro needle holder | Aesculap | BM563R | |
| Sterile gauze | Covidien | 441218 | |
| 6-0 Nylon suture | MWI | 31849 | |
| Plastic Strips Band-Aid | Johnson & Johnson | Obtained from pharmacy | |
| 10 cm Petri dish | Fisherbrand | FB0875712 | |
| PBS | Quality Biological | 119069131 | |
| Buprenorphine | DEA Number required; Obtained from hospital pharmacy | ||
| Enrofloxacin | Bayer Health Care | 186599 |
References
- Furtmuller, G. J., et al. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J Vis Exp. , (2016).
- Oh, B., et al. A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice. J Vis Exp. , (2016).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , e50753 (2014).
- Jones, T. R., Shirasugi, N., Adams, A. B., Pearson, T. C., Larsen, C. P. Intravital microscopy identifies selectins that regulate T cell traffic into allografts. J Clin Invest. 112, 1714-1723 (2003).
- Celli, S., Albert, M. L., Bousso, P. Visualizing the innate and adaptive immune responses underlying allograft rejection by two-photon microscopy. Nat Med. 17, 744-749 (2011).
- Medawar, P. B. The behaviour and fate of skin autografts and skin homografts in rabbits: A report to the War Wounds Committee of the Medical Research Council. J Anat. 78, 176-199 (1944).
- Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B., Sparrow, E. M. Quantitative studies on tissue transplantation immunity. I. The survival times of skin homografts exchanged between members of different inbred strains of mice. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 143, 43-58 (1954).
- Garrod, K. R., Cahalan, M. D. Murine skin transplantation. J Vis Exp. , (2008).
- Schmaler, M., Broggi, M. A., Rossi, S. W. Transplantation of tail skin to study allogeneic CD4 T cell responses in mice. J Vis Exp. , e51724 (2014).
- Bergstresser, P. R., Toews, G. B., Gilliam, J. N., Streilein, J. W. Unusual numbers and distribution of Langerhans cells in skin with unique immunologic properties. J Invest Dermatol. 74, 312-314 (1980).
- Chen, H. D., Silvers, W. K. Influence of Langerhans cells on the survival of H-Y incompatible skin grafts in rats. J Invest Dermatol. 81, 20-23 (1983).
- Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb Perspect Med. 3, a015495 (2013).
- Mayumi, H., Nomoto, K., Good, R. A. A surgical technique for experimental free skin grafting in mice. Jpn J Surg. 18, 548-557 (1988).
- McFarland, H. I., Rosenberg, A. S. Skin allograft rejection. Curr Protoc Immunol. Chapter 4, (2009).
- Lee, C. F., et al. Preventing Allograft Rejection by Targeting Immune Metabolism. Cell reports. 13, 760-770 (2015).
- Pollizzi, K. N., Powell, J. D. Integrating canonical and metabolic signalling programmes in the regulation of T cell responses. Nat Rev Immunol. 14, 435-446 (2014).
- Pearce, E. L., Poffenberger, M. C., Chang, C. H., Jones, R. G. Fueling immunity: insights into metabolism and lymphocyte function. Science. 342, 1242454 (2013).
