Подготовка травяной медицины: Er-Xian Decoction и Er-Xian-содержащая сыворотка для<em> В Виво</em> И<em> In Vitro</em> Эксперименты
Summary
Здесь мы представляем подготовку эрсианского отвара (EXD) в четыре этапа – вымачивание, отвар, фильтрацию и концентрацию – и демонстрируем введение готовой EXD-содержащей сыворотки крысам. Эти методы применимы к исследованиям in vivo и in vitro травяных отваров, таких как традиционные китайские лекарства.
Abstract
Традиционная фитотерапия, альтернативная медицина в клинических условиях, получила повышенное внимание в последние годы. Перед доставкой в организм обычно требуется дополнительная процедура экстракции для выделения активных компонентов из сырых трав. Отвар воды – классическая процедура экстракции, которая до сих пор широко используется в клинических условиях. Здесь мы предлагаем подробный протокол для отсасывания er-xian (EXD), чтобы применить травяные отвары к экспериментальным исследованиям. Описывается расчет подходящей для животных дозы, а также четыре основных этапа EXD: вымачивание, отвар воды, фильтрация и концентрация. Кроме того, сыворотку, содержащую EXD, вводят крысам в качестве средства проверки in vitro . Здесь крысам перорально вводили EXD в течение трех дней. Затем образцы крови собирали, инактивировали, центрифугировали и фильтровали. Сыворотка, разбавленная культуральной средой, может быть использована для лечения клеток или тканей в vИтро. Например, EXD применяли как к in vivo, так и in vitro исследованиям и продемонстрировали, что EXD усиливает остеогенез. Этот протокол может использоваться в качестве справочника для подготовки и применения лекарственных трав.
Introduction
В настоящее время растет интерес к изучению и применению традиционной фитотерапии. В отличие от современных лекарств, в которых химические ингредиенты являются определенными, растительные формулы имеют некоторые неизвестные ингредиенты и требуют экстракционных процессов, чтобы обеспечить доставку их активных соединений. Хотя многие исследования пытаются выбрать одно небольшое соединение с хорошо известной структурой как представитель всей травы или растительной формулы, ни фармакологическая эффективность, ни механизмы не могут считаться эквивалентными 1 , 2 . В то время как отпечатки пальцев позволяют анализировать составляющие сложных лекарственных препаратов, некоторые составляющие до сих пор неясно анализируются, что приводит к сложной проблеме при объединении всех экстрактов для исследования 3 . Взаимодействие многочисленных компонентов / экстрактов опосредует терапевтические эффекты лекарственных трав. Чтобы сохранить это преимущество, традиционная форма экструзии-decoctИон – все еще широко используется в клинике. Поскольку процедура экстракции оказывает большое влияние на терапевтическую эффективность, необходим стандартный протокол традиционного отвара воды, особенно для исследований in vivo 4 , 5 .
С другой стороны, при исследовании фармакологических механизмов введение травяных отваров во время исследований in vitro или ex vivo также является проблемой. Концепция лекарственно-содержащей сыворотки была впервые предложена Ташино в 1988 году 6 . С тех пор все большее число исследователей применили его к фитотерапии 7 , 8 , 9 . Хотя метод лекарственно-содержащей сыворотки имеет некоторые ограничения, такие как влияние некоторых компонентов сыворотки, он по-прежнему считается методом, который точно имитирует физиологические условия.
<p class=«Jove_content»> Отвар er-xian был разработан в начале 1950-х годов, чтобы облегчить симптомы менопаузы 10 , 11 , 12 , 13 . Он также применяется для лечения апластической анемии 14 , менопаузального остеопороза 15 , 16 , 17 , преждевременной овариальной недостаточности 18 , рака молочной железы 19 , рака яичников 20 и задержки полового созревания 21 . Здесь мы приводим подробные протоколы для подготовки как er-xian decoction (EXD), так и его содержащей лекарственные средства сыворотки. Кроме того, мы описываем применение сыворотки, содержащей EXD и EXD, к моделям остеопороза мышиных менопаузы.EXD состоит из 9 г каждого из Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii </eM>, Radix Morindae Officinalis и Radix Angelicae Sinensis и 6 г каждого из Cortex Phellodendri и Rhizoma Anemarrhenae на взрослого пациента в день. Эквивалентная доза для мыши составляет 0,1418 EXD / кг / день на основе следующего уравнения 22 : дБ = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . ДА и дБ относятся к дозе на вес тела (мг / кг) человека и мыши, соответственно. Доза в мг / кг заменяется на количество EXD / кг. RA и RB представляют собой фактор человеческого тела и фактор тела мыши, соответственно, которые пропорциональны (площадь поверхности тела (м 2 ) / масса тела (кг)) 2/3 (см. Таблицу 1 ). WA и WB указывают вес тела (кг) человека и мыши соответственно.
Protocol
Representative Results
Discussion
В последние годы больше внимания уделяется травяным лекарствам, одним из видов альтернативной медицины, которые применялись в клинических условиях в Восточном мире в течение тысяч лет. В отличие от «современной скамьи на кровать» современной медицины, традиционная травяная медицина …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана Национальным научным фондом Китая (81573992). Мы благодарим Эмили К. Ло и Кэтлин ДиНаполи за помощь в редактировании языка.
Materials
| Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD components |
| Filter paper | GElifesciences | 99-103-952 | Filter EXD decoction before concentration |
| Imprinting Control Region (ICR) mice | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | In vivo study |
| Sprague Dawley rats | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | EXD-containing serum preparation |
| Syringe filter | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µm |
| gavage needles (10 ml) | Shanghai BO Ge trade sales department | 59104274 | Adminstration of EXD |
| Ketamine (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anesthesia |
| Xylazine (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
| Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium | Gibco | 12800-116 | DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides |
| Streptomycin | Sigma | 1277 | 100 µg / ml |
| Penicillin | Sigma | 4687 | 100 µg / ml |
References
- Zhang, L. G., Ouyang, X. W., Wu, T. T., Ni, L. J., Shi, W. Z. Quantitative evaluation of in vitro effects and interactions of active fractions in a Chinese medicinal formula (Yaotongning Capsule) on rat chondrocytes. J Ethnopharmacol. 155 (3), 1424-1432 (2014).
- Ogawa, Y., Fujii, Y., Sugiyama, R., Konishi, T. The role of the seven crude drug components in the sleep-promoting effect of Yokukansan. J Ethnopharmacol. 177, 19-27 (2016).
- Kim, J. H., Doh, E. J., Lee, G. Evaluation of Medicinal Categorization of Atractylodes japonica Koidz. by Using Internal Transcribed Spacer Sequencing Analysis and HPLC Fingerprinting Combined with Statistical Tools. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 2926819 (2016).
- Sheridan, H., et al. The potential of metabolic fingerprinting as a tool for the modernisation of TCM preparations. J Ethnopharmacol. 140 (3), 482-491 (2012).
- Planas, G. M., Kucacute, J. Contraceptive Properties of Stevia rebaudiana. Science. 162 (3857), 1007 (1968).
- Tashino, S. “Serum pharmacology” and “serum pharmaceutical chemistry”: from pharmacology of Chinese traditional medicines to start a new measurement of drug concentration in blood. Ther Drug Monit Res. 5, 54-64 (1988).
- Cao, Y., Liu, F., Huang, Z., Zhang, Y. Protective effects of Guanxin Shutong capsule drug-containing serum on tumor necrosis factor-alpha-induced endothelial dysfunction through nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase and the nitric oxide pathway. Exp Ther Med. 8 (3), 998-1004 (2014).
- Fu, L., et al. Ex Vivo Stromal Cell-Derived Factor 1-Mediated Differentiation of Mouse Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells into Hepatocytes Is Enhanced by Chinese Medicine Yiguanjian Drug-Containing Serum. Evid Based Complement Alternat Med. 2016, 7380439 (2016).
- Chen, X., et al. Application of serum pharmacology in evaluating the antitumor effect of Fuzheng Yiliu Decoction from Chinese Medicine. Chin J Integr Med. 20 (6), 450-455 (2014).
- Sze, S. C., et al. A novel mechanism: Erxian Decoction, a Chinese medicine formula, for relieving menopausal syndrome. J Ethnopharmacol. 123 (1), 27-33 (2009).
- Sze, S. C., et al. Effects of Erxian decoction, a Chinese medicinal formulation, on serum lipid profile in a rat model of menopause. Chin Med. 6, 40 (2011).
- Zhong, L. L., et al. A randomized, double-blind, controlled trial of a Chinese herbal formula (Er-Xian decoction) for menopausal symptoms in Hong Kong perimenopausal women. Menopause. 20 (7), 767-776 (2013).
- Wang, S. W., et al. Steroidogenic effect of Erxian decoction for relieving menopause via the p-Akt/PKB pathway in vitro and in vivo. J Ethnopharmacol. , (2016).
- Lin, L., Wu, S., Tang, J. [Clinical observation and experimental study of the treatment of aplastic anemia by warming and tonifying the spleen and kidney]. Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 10 (5), 272-274 (1990).
- Nian, H., et al. Antiosteoporotic activity of Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in ovariectomized rats. J Ethnopharmacol. 108 (1), 96-102 (2006).
- Qin, L., et al. Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula. J Ethnopharmacol. 118 (2), 271-279 (2008).
- Xue, L., et al. A HNMR-based metabonomics study of postmenopausal osteoporosis and intervention effects of Er-Xian Decoction in ovariectomized rats. Int J Mol Sci. 12 (11), 7635-7651 (2011).
- Lu, X. N., Xu, X. R., Lin, L. J. [Clinical observation of bushen er’xian decoction in treating premature ovarian failure]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 28 (7), 594-596 (2008).
- Yu, X., et al. Anti-angiogenic activity of Erxian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, in zebrafish. Biol Pharm Bull. 35 (12), 2119-2127 (2012).
- Chu, E. S., et al. An in vitro and in vivo investigation of the antimetastatic effects of a Chinese medicinal decoction, erxian decoction, on human ovarian cancer models. Integr Cancer Ther. 12 (4), 336-346 (2013).
- Zhu, Z., Li, L., Jin, X., Fang, J., Zhang, D. Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula, intervening early in hypothalamic-pituitary axis of male rats with delayed puberty. Pharmacogn Mag. 10 (40), 517-521 (2014).
- Miao, M. S. . Experimental animals and technology. 1997, 145 (1997).
- Soleimani, M., Nadri, S. A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow. Nat Protoc. 4 (1), 102-106 (2009).
- Lu, S., Huang, J., Wang, J., et al. Er-Xian Decoction Stimulates Osteoblastic Differentiation of Bone Mesenchymal Stem Cells in Ovariectomized Mice and Its Gene Profile Analysis. Stem Cells International. 2016, 4079210 (2016).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. J Am Assoc Lab Anim Sci. 50 (5), 600-613 (2011).
- Wu, C., et al. Simultaneous determination of seven flavonoids in dog plasma by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry and its application to a bioequivalence study of bioactive components in Herba Epimedii and Er-Xian Decoction. J Pharm Biomed Anal. 54 (1), 186-191 (2011).
- Hu, Y. M., et al. Identification of the major chemical constituents and their metabolites in rat plasma and various organs after oral administration of effective Erxian Decoction (EXD) fraction by liquid chromatography-mass spectrometry. Biomed Chromatogr. 24 (5), 479-489 (2010).
- Xue, L., et al. Effects and interaction of icariin, curculigoside, and berberine in er-xian decoction, a traditional chinese medicinal formula, on osteoclastic bone resorption. Evid Based Complement Alternat Med. , (2012).
- Nair, A. B., Jacob, S. A simple practice guide for dose conversion between animals and human. J Basic Clin Pharm. 7 (2), 27-31 (2016).
- Xu, X., et al. Protective effect of the traditional Chinese medicine xuesaitong on intestinal ischemia-reperfusion injury in rats. Int J Clin Exp Med. 8 (2), 1768-1779 (2015).
- Li, Z., Wang, J. On the methods for Chinese herbs serum pharmcology. Zhong Guo Zhong Yi Yao Xing Xi Za Zhi. 9 (2), 5-6 (2002).
- Jiang, Y. R., et al. Effect of chinese herbal drug-containing serum for activating-blood and dispelling-toxin on ox-LDL-induced inflammatory factors’ expression in endothelial cells. Chin J Integr Med. 18 (1), 30-33 (2012).
- Guo, C. Y., Ma, X. J., Liu, Q., Yin, H. J., Shi, D. Z. [Effect of Chinese herbal drug-containing serum for activating blood, activating blood and dispelling toxin on TNF-alpha-induced adherence between endothelial cells and neutrophils and the expression of MAPK pathway]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 35 (2), 204-209 (2015).
- Li, Y., Xia, J. Y., Chen, W., Deng, C. L. Effects of Ling Qi Juan Gan capsule drug-containing serum on PDGF-induced proliferation and JAK/STAT signaling of HSC-T6 cells]. Zhonghua Gan Zang Bing Za Zhi. 21 (9), 663-667 (2013).
- Li, Y. K. [Some issues in methology of Chinese herbs serum pharmcology]. Zhong Yao Xin Yao Yu Lin Chuang Yao Li. 10 (5), 263 (1999).
- Zhang, L., et al. [A review of Chinese herbs serum pharmcology methodological study]. Nan Jing Zhong Yi Yao Da Xue Xue Bao. 18 (4), 254 (2002).
- Zhang, D. [Issues and strategies for study of serum pharmcology in oncology]. Zhong Yi Yan Jiu. 17 (5), 13-14 (2004).
