Здесь мы представляем подготовку эрсианского отвара (EXD) в четыре этапа – вымачивание, отвар, фильтрацию и концентрацию – и демонстрируем введение готовой EXD-содержащей сыворотки крысам. Эти методы применимы к исследованиям in vivo и in vitro травяных отваров, таких как традиционные китайские лекарства.
Традиционная фитотерапия, альтернативная медицина в клинических условиях, получила повышенное внимание в последние годы. Перед доставкой в организм обычно требуется дополнительная процедура экстракции для выделения активных компонентов из сырых трав. Отвар воды – классическая процедура экстракции, которая до сих пор широко используется в клинических условиях. Здесь мы предлагаем подробный протокол для отсасывания er-xian (EXD), чтобы применить травяные отвары к экспериментальным исследованиям. Описывается расчет подходящей для животных дозы, а также четыре основных этапа EXD: вымачивание, отвар воды, фильтрация и концентрация. Кроме того, сыворотку, содержащую EXD, вводят крысам в качестве средства проверки in vitro . Здесь крысам перорально вводили EXD в течение трех дней. Затем образцы крови собирали, инактивировали, центрифугировали и фильтровали. Сыворотка, разбавленная культуральной средой, может быть использована для лечения клеток или тканей в vИтро. Например, EXD применяли как к in vivo, так и in vitro исследованиям и продемонстрировали, что EXD усиливает остеогенез. Этот протокол может использоваться в качестве справочника для подготовки и применения лекарственных трав.
В настоящее время растет интерес к изучению и применению традиционной фитотерапии. В отличие от современных лекарств, в которых химические ингредиенты являются определенными, растительные формулы имеют некоторые неизвестные ингредиенты и требуют экстракционных процессов, чтобы обеспечить доставку их активных соединений. Хотя многие исследования пытаются выбрать одно небольшое соединение с хорошо известной структурой как представитель всей травы или растительной формулы, ни фармакологическая эффективность, ни механизмы не могут считаться эквивалентными 1 , 2 . В то время как отпечатки пальцев позволяют анализировать составляющие сложных лекарственных препаратов, некоторые составляющие до сих пор неясно анализируются, что приводит к сложной проблеме при объединении всех экстрактов для исследования 3 . Взаимодействие многочисленных компонентов / экстрактов опосредует терапевтические эффекты лекарственных трав. Чтобы сохранить это преимущество, традиционная форма экструзии-decoctИон – все еще широко используется в клинике. Поскольку процедура экстракции оказывает большое влияние на терапевтическую эффективность, необходим стандартный протокол традиционного отвара воды, особенно для исследований in vivo 4 , 5 .
С другой стороны, при исследовании фармакологических механизмов введение травяных отваров во время исследований in vitro или ex vivo также является проблемой. Концепция лекарственно-содержащей сыворотки была впервые предложена Ташино в 1988 году 6 . С тех пор все большее число исследователей применили его к фитотерапии 7 , 8 , 9 . Хотя метод лекарственно-содержащей сыворотки имеет некоторые ограничения, такие как влияние некоторых компонентов сыворотки, он по-прежнему считается методом, который точно имитирует физиологические условия.
<p class=«Jove_content»> Отвар er-xian был разработан в начале 1950-х годов, чтобы облегчить симптомы менопаузы 10 , 11 , 12 , 13 . Он также применяется для лечения апластической анемии 14 , менопаузального остеопороза 15 , 16 , 17 , преждевременной овариальной недостаточности 18 , рака молочной железы 19 , рака яичников 20 и задержки полового созревания 21 . Здесь мы приводим подробные протоколы для подготовки как er-xian decoction (EXD), так и его содержащей лекарственные средства сыворотки. Кроме того, мы описываем применение сыворотки, содержащей EXD и EXD, к моделям остеопороза мышиных менопаузы.EXD состоит из 9 г каждого из Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii </eM>, Radix Morindae Officinalis и Radix Angelicae Sinensis и 6 г каждого из Cortex Phellodendri и Rhizoma Anemarrhenae на взрослого пациента в день. Эквивалентная доза для мыши составляет 0,1418 EXD / кг / день на основе следующего уравнения 22 : дБ = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . ДА и дБ относятся к дозе на вес тела (мг / кг) человека и мыши, соответственно. Доза в мг / кг заменяется на количество EXD / кг. RA и RB представляют собой фактор человеческого тела и фактор тела мыши, соответственно, которые пропорциональны (площадь поверхности тела (м 2 ) / масса тела (кг)) 2/3 (см. Таблицу 1 ). WA и WB указывают вес тела (кг) человека и мыши соответственно.
В последние годы больше внимания уделяется травяным лекарствам, одним из видов альтернативной медицины, которые применялись в клинических условиях в Восточном мире в течение тысяч лет. В отличие от «современной скамьи на кровать» современной медицины, традиционная травяная медицина …
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Национальным научным фондом Китая (81573992). Мы благодарим Эмили К. Ло и Кэтлин ДиНаполи за помощь в редактировании языка.
Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD components |
Filter paper | GElifesciences | 99-103-952 | Filter EXD decoction before concentration |
Imprinting Control Region (ICR) mice | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | In vivo study |
Sprague Dawley rats | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | EXD-containing serum preparation |
Syringe filter | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µm |
gavage needles (10 ml) | Shanghai BO Ge trade sales department | 59104274 | Adminstration of EXD |
Ketamine (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anesthesia |
Xylazine (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium | Gibco | 12800-116 | DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides |
Streptomycin | Sigma | 1277 | 100 µg / ml |
Penicillin | Sigma | 4687 | 100 µg / ml |