Preparazione della medicina a base di erbe: Eruzione di Er-Xian e Serum contenente Er-Xian per<em> In Vivo</em> E<em> In vitro</em> Esperimenti
Summary
Qui presentiamo la preparazione di un decotto er-xiano (EXD) in quattro fasi – immersione, decotto, filtrazione e concentrazione – e dimostrare la somministrazione di un siero preparato con EXD ai ratti. Questi metodi sono applicabili allo studio in vivo e in vitro di decotti a base di erbe come i medicinali cinesi tradizionali.
Abstract
La medicina tradizionale a base di erbe, una medicina alternativa nell'ambiente clinico, ha ricevuto un'attenzione maggiore negli ultimi anni. Prima della consegna al corpo, è necessaria una procedura di estrazione aggiuntiva per liberare i costituenti attivi dalle erbe grezze. La decozione dell'acqua è una procedura di estrazione classica che è ancora ampiamente utilizzata nelle impostazioni cliniche. Qui proponiamo un protocollo dettagliato per la decotto er-xian (EXD) per applicare decotti a base di erbe a studi sperimentali. Viene descritto il calcolo di una dose appropriata per l'animale, nonché le quattro fasi principali di EXD: l'ammollo, la decozione dell'acqua, la filtrazione e la concentrazione. Inoltre, EXD contenente siero viene introdotto nei ratti come mezzo di convalida in vitro . Qui, i ratti sono stati somministrati per via orale con EXD per tre giorni. I campioni di sangue sono stati raccolti, inattivati, centrifugati e filtrati. Il siero, diluito con il mezzo di coltura, può essere utilizzato per trattare cellule o tessuti in vItro. Ad esempio, EXD è stato applicato sia agli studi in vivo che in vitro e ha dimostrato che EXD migliora l'osteogenesi. Questo protocollo può essere utilizzato come riferimento per la preparazione e l'applicazione di medicinali a base di erbe.
Introduction
L'interesse per lo studio e l'applicazione della medicina tradizionale a base di erbe sta crescendo. Al contrario di farmaci moderni, in cui gli ingredienti chimici sono definiti, le formule a base di erbe hanno alcuni ingredienti sconosciuti e richiedono processi di estrazione per consentire la consegna dei loro composti attivi. Anche se molti studi cercano di selezionare un piccolo composto con una struttura ben nota come rappresentante dell'intera erba o di formula a base di erbe, né le efficienze farmacologiche né i meccanismi possono essere considerati equivalenti 1 , 2 . Mentre l'impronta digitale consente l'analisi dei costituenti delle formule complesse a base di erbe, alcuni componenti non sono ancora chiaramente analizzati, portando ad una sfida quando si combinano tutti gli estratti per lo studio 3 . Le interazioni di numerosi costituenti / estratti mediano gli effetti terapeutici delle medicine a base di erbe. Per mantenere questo vantaggio, il tradizionale estratto forma-decottoIone-è ancora ampiamente utilizzato nella clinica. Poiché la procedura di estrazione ha un grande impatto sull'efficacia terapeutica, è necessario un protocollo standard di decotto acqua tradizionale, specialmente per gli studi in vivo 4 , 5 .
D'altra parte, quando esplora i meccanismi farmacologici, è anche una sfida l'amministrazione di decotti a base di erbe durante studi in vitro o ex vivo . Il concetto di un siero contenente droga fu proposto per la prima volta da Tashino nel 1988 6 . Da allora, un numero crescente di ricercatori lo hanno applicato alla medicina a base di erbe 7 , 8 , 9 . Anche se il metodo del siero contenente farmaci ha alcune limitazioni, come l'influenza di determinate componenti del siero, è ancora considerato un metodo che imitava in modo preciso le condizioni fisiologiche.
<p class="Jove_content"> La decozione er-xian è stata sviluppata nei primi anni '50 per alleviare i sintomi della menopausa 10 , 11 , 12 , 13 . È stato inoltre applicato al trattamento dell'anemia aplastica 14 , dell'osteoporosi menopausa 15 , 16 , 17 , insufficienza ovarica precoce 18 , cancro mammario 19 , cancro ovarico 20 e pubertà ritardata 21 . Qui presentiamo protocolli dettagliati per la preparazione del decotto er-xian (EXD) e del suo siero contenente droga. Inoltre, descriviamo l'applicazione del siero contenente EXD e EXD ai modelli osteoporotici della menopausa murina.Un EXD è composto da 9 g ciascuno di Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii </eM, Radix Morindae Officinalis e Radix Angelicae Sinensis e 6 g ciascuno di Cortex Phellodendri e Rhizoma Anemarrhenae per paziente adulto al giorno. La dose equivalente per un topo è 0.1418 EXD / kg / giorno sulla base della seguente equazione 22 : dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA e dB si riferiscono rispettivamente alla dose per peso corporeo (mg / kg) dell'uomo e del mouse. La dose, in mg / kg, è sostituita dal numero di EXD / kg. RA e RB rappresentano rispettivamente il fattore del corpo umano e il fattore del corpo del topo proporzionale alla superficie del corpo (m 2 ) / peso corporeo (kg)) 2/3 (vedi tabella 1 ). WA e WB indicano rispettivamente il peso corporeo (kg) dell'uomo e del mouse.
Protocol
Representative Results
Discussion
Negli ultimi anni, più attenzione è stata prestata alle medicine a base di erbe, un tipo di medicina alternativa che è stato applicato nel contesto clinico nel mondo orientale per migliaia di anni. Diverso dal modello "banco a letto" della medicina moderna, la medicina tradizionale a base di erbe richiede innanzitutto il modello "letto a panca" per spiegare i propri meccanismi. Ciò può essere seguito dalla convalida eseguita in fase di panificazione e di elaborazione per lo sviluppo di nuovi far…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Science Foundation della Cina (81573992). Ringraziamo Emily K. Lo e Kathleen DiNapoli per la loro assistenza per la modifica del linguaggio.
Materials
| Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD components |
| Filter paper | GElifesciences | 99-103-952 | Filter EXD decoction before concentration |
| Imprinting Control Region (ICR) mice | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | In vivo study |
| Sprague Dawley rats | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | EXD-containing serum preparation |
| Syringe filter | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µm |
| gavage needles (10 ml) | Shanghai BO Ge trade sales department | 59104274 | Adminstration of EXD |
| Ketamine (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anesthesia |
| Xylazine (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
| Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium | Gibco | 12800-116 | DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides |
| Streptomycin | Sigma | 1277 | 100 µg / ml |
| Penicillin | Sigma | 4687 | 100 µg / ml |
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