Этот протокол описывает процесс оценки исцеления сухожилия в крыс, которые были введены с аллогенной тромбоцитов богатой плазмы (PRP) или физиологический раствор после удаления части ахиллова сухожилия. Ход лечения сухожилия оценивается в нескольких точках времени, с использованием различных видов анализа.
Эта статья описывает экспериментальной процедуры, используемые для наблюдения, если PRP могут позитивно влиять на сухожилие исцеления. Есть 4 основные шаги, чтобы следовать: вызывают поражения в ахиллова сухожилия; подготовить PRP и вставляют его (или физиологический раствор); удалите сухожилия; и выполнять биомеханических, молекулярной и гистологической оценок. На каждом шаге все процедуры и методы описаны в деталях, так что они могут быть легко воспроизведены.
Ахиллова сухожилия были хирургически секционного (Удаление секции длиной 5 мм). Впоследствии ОТР или физиологический раствор был введен для изучения ли PRP имеет положительное влияние на исцеление сухожилия. Три группы 40 животных (в общей сложности 120 крыс были использованы в этом исследовании) были разделены на 2 подгруппы: PRP инъекции группы и солевые впрыск управления группы. Крысы были принесены в жертву на увеличение времени точек (Группа A: 5 дней; Группа B: 15 дней; Группа C: 30 дней) и сухожилий, были удалены. 90 сухожилий прошли биомеханические тестирования перед выполнением анализа транскриптомики и 30 оставшихся сухожилий были представлены гистологический анализ.
Хорошо известно1коагуляции, воспалительные процессы и иммунитет модуляция функции тромбоцитов. Совсем недавно было продемонстрировано, что они также имеют реституционного свойства2,3. Действительно, различные факторы цитокинов и роста (VEGF, PDGF, TGF-Б, IGF-I и HGF) выпускаются тромбоцитов во время дегрануляции. Эти факторы роста содействовать ангиогенеза, тканей ремоделирования и раны исцеление (кости, кожу, мышцы, сухожилия)2. Центрифугирование аутологичной крови производит тромбоцитов богатой плазмы (PRP) который содержит тромбоцитов высокой концентрации в зависимости от метода изоляции (между 3 и 10 раз крови концентрации исходных условий). Действительно различные методы приготовления ОТР не может обеспечить идентичные конечного продукта. До сих пор был международного общего согласия по этому вопросу. В целом ОТР может быть привлекательным терапевтического лечения хронического опорно-двигательного аппарата, например плеча, подошвенный фасциит, артроз и исправления4. Он был использован в первый раз в оральной хирургии и имплантологии4 для улучшения и ускорения заживления после размещения стоматологических имплантатов кость. В этом исследовании мы описываем используется воспроизводимый метод, который позволяет приобретение PRP для экспериментов на животных4.
После поражения сухожилий часто наблюдаются в спортсменов и физических рабочих, повышение процесс заживления и таким образом сократить время восстановления являются большой интерес5. Новые методы лечения, которые разрабатывают часто связаны с использованием факторов роста, и администрация ОТР является простой и минимально инвазивной способ доставить смесь эндогенных факторов роста4.
Несколько в пробирке или животных исследования показали, что администрация плазмы, содержащие высокий уровень тромбоцитов, выпуская биологических посредников, могут стимулировать ремонт сухожилия и связки, выпустив биологических посредников6 ,,78,9. Кроме того другие исследования показали, что PRP могут стимулировать типа I и III синтез коллагена в сухожилие клетки9,10,11. Он также предложил, что PRP может уменьшить активации матрицы металлопротеиназ (MMPs) и таким образом уменьшить деградацию матрицы. Клетки, которые участвуют в процессе воспаления могут производить MMP-9, который играет роль в ткани реконструкции (физиологические и патологические) индуцированных воспаление12.
Основываясь на этой информации, мы предположили, что однократного введения ОТР в секционного ахиллова сухожилия крысы могут улучшить процесс восстановления и механическую прочность ткани, ремонт. Это проверяется путем измерения биомеханические свойства исцеления сухожилия во время процесса восстановления и гистологические и молекулярный анализ для оценки коллагена Ремоделирование в новообразованной ткани. Целью исследования было наблюдать, если одной инъекции аллогенной PRP могут повлиять на исцеление секционного ахиллова сухожилия.
Тромбоциты имеют важное значение для раннего воспалительной фазы сухожилия, процесс заживления. Когда эти тромбоцитов подвергаются обязательной ткани или факторы, которые вызывают коагуляции, они будут выпускать факторы роста, которые хранятся в α гранул. Вследствие этого взаимодейс…
The authors have nothing to disclose.
Это исследование было поддержано стандартных де Льеж и Лежён – Lechien предоставляет Леон Frédéricq средств.
Xylazine (Xyl-M) | VMD | none | anesthetic |
Ketamin (Jétamine 1000 CEVA) | CEVA Santé Animale | none | anesthetic |
Buprenorphin (Vetergésic Multidosis) | ALSTOE | none | Painkiller |
iso-Betadine | MEDA-Pharma | none | Desinfectant |
resorbable yarn Vicryl 6/0 | Johnson & Johnson | ||
Nembutal | CEVA Santé Animale | none | Anesthetic |
Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | Preserves structure of the tissue |
Isopropanol 100% | VWR | 20,922,364 | |
Ethanol 95% | VWR | 20,823,362 | |
Xylene | VWR | 28973.363 | |
Paraffin | VWR | LEIC3950.1006 | |
Hematoxylin | Millipore | 1.15938.0025 | Colorant |
Eosin | Millipore | 1.15935.0100 | Colorant |
Eukitt | Sigma-Aldrich | 3989 | Mounting Medium |
CaCl2 |